Qualitätssicherung in der Massenanalytik
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- Sofie Auttenberg
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1 Qualitätssicherung in der Massenanalytik Martin Stierli, dipl. Lm-Ing. ETH Bereichsleiter Qualitätssicherung Daniel Glauser, Dr. med. vet. FVH PhD Bereichsleiter Labr Frühjahrestagung der SVVLD, 23. April 2015, Tierspital Zürich
2 Suisselab AG 2006 als Aktiengesellschaft gegründet, das Aktinariat besteht heute aus 2 Zuchtverbänden (Swissherdbk, Braunvieh Schweiz) und einer Vertreterrganisatin der Milchbranche (TSM) Durchführung der Qualitätskntrlle der vermarkteten Milch (die sg. «Milchprüfung») für den westlichen Teil der Schweiz Seit 2011 Durchführung der Milchprüfung für die gesamte Schweiz Seit 2008 Durchführung der Milchleistungsprüfung (MLP) für swissherdbk Seit 2011 Durchführung der MLP für Braunvieh Schweiz und den Schweizerischen Hlsteinzuchtverband Seit 2009 Mastitis Diagnstik mittels PCR (PathPrf) Seit 2012 milchserlgische Überwachung vn BVD, IBR, EBL Seit 2013 milchserlgische Überwachung vn SBV Seit 2014 Milch-Trächtigkeitstest «FERTAYLS»
3 Mengengerüst Milchprüfung (MP, Qualitätskntrlle der vermarkteten Milch) Untersuchung vn ca Milchprben auf: Hemmstffe (BRT), Keimzahl (BactScan), Zellzahl, Milchinhaltstffe und Gefrierpunkt (CmbiFss) Milchleistungsprüfung (MLP) ca Untersuchungen auf Zellzahl u. Milchinhaltstffe (CmbiFss) ca Untersuchungen auf Acetn (nasschemisch auf AutAnalyzer3) Gehaltsprben ca Untersuchungen auf Milchinhaltsstffe für Mlkereien (CmbiFss) Tierseuchen-Mnitring ca ELISA Untersuchungen vn Tankmilch (BVD, EBL, IBR, Schmallenberg Virus) Mastitis-Diagnstik ca PCR Untersuchungen zur Mastitis Identifikatin (PathPrf C12 und M3) Milch-Trächtigkeitstest (FERTALYS) ca ELISA Untersuchungen (IDEXX Milch-Trächtigkeitstest)
4 Tankmilchdiagnstik Seit 2012 werden die Schweizerischen Milchviehbestände im Auftrag des BLV milchserlgisch überwacht: 1) Überwachung BVD Test: SVANOVIR BVDV Antibdy Test Cnfirmatin Frmat (Svanva, biphasisch) : 2x jährliche Untersuchung sämtlicher ca milchliefernder Betriebe (Februar- März und Oktber-Nvember) Ab 2015: 1x jährliche Untersuchung sämtlicher ca milchliefernder Betriebe (Februar-März) bzw. (Nvember-Januar) 2) Überwachung IBR Test: IBR (BHV-1) Antibdy Test Kit fr Tank Milk (IDEXX, biphasisch) 2x jährliche Untersuchung einer Stichprbe vn milchliefernden Betrieben (Januar und April)
5 3) Überwachung EBL Test: EBL (BLV) Antibdy Test Kit Milk Screening (IDEXX, mnphasisch), bzw. Milk Cnfirmatin (IDEXX, biphasisch) 2x jährliche Untersuchung einer Stichprbe vn milchliefernden Betrieben (Januar und April) 4) Überwachung SBV Test: ID Screen Schmallenberg Virus Milk Indirect (ID.vet, mnphasisch) Erflgt im Rahmen eines Überwachungsprgrammes für vektrübertragene Rinderkrankheiten des BLV 3x jährliche Untersuchung einer Stichprbe vn 250 Betrieben (Mai, Juli, Nvember) Bis 2014 wurden die Milchprben im Anschluss an die SBV Untersuchung am IVI zusätzlich auf Bluetngue Virus (BTV) untersucht
6 Prbenmaterial Für die Tankmilchdiagnstik werden die Prben der Qualitätskntrlle der vermarkteten Milch (Milchprüfung) verwendet. Die Milchprüfung wird für die ganze Schweiz vn Suisselab AG durchgeführt Vrgaben des Gesetzgebers (VO über die Hygiene bei der Milchprduktin): Kriterium Keimzahl Smatische Zellen Hemmstffe Anfrderung < KbE/ml < Zellen/ml nicht nachweisbar (gemäss FIV: unter MRL) Jeder Betrieb wird 2x pr Mnat untersucht, je 1 Prbe aus jeder Mnatshälfte Milchprben werden unknserviert und gekühlt transprtiert und innerhalb 30 Std. nach Prbenahme untersucht Für die Tankmilchdiagnstik wird ein Aliqut der MP-Prben verwendet
7 Prbennahme 1) Manuelle Prbennahme bei Milchsammelstelle der Käserei Prbenflasche mit Schnapp-Deckel Käser, Prbenehmer 14-stelliger Barcde, spezifisch für Betrieb (bleibt gleich) Abreissbare «Quittung» für Prduzenten 2) Autmatisierte Prbennahme auf Sammelwagen Prbenflasche mit durchstechbarer Membran 10-stelliger Barcde, einmalig Chauffeur Betriebs-ID zum Barcde wird vm Transprteur geliefert Durchführung der Prbennahme in Verantwrtung der Milchkäufer Frmulierung Vrgaben und der Einhaltung durch Suisselab AG
8 Elemente der Qualitätssicherung 1) Qualitätsmanagement (akkreditiert nach ISO/IEC :2005) Akkreditierungsbereich Prüfung vn Einzelkuhmilch, Kuh-Mischmilch, Milchprüfung (Tankmilch) Typ A: Änderung dieses Geltungsbereiches nicht gestattet - Prbenahme: manuell und autmatisiert - AP-Geräteprüfung: Prüfung und Zulassung vn autmatisierten Prbenahmegeräten - Infrart-spektrftmetrische Bestimmung vn Fett, Prtein, Laktse, Harnstff, Kasein - Berechnung des Gefrierpunktes auf Grund der Infrart-Absrptin und der Leitfähigkeit - Thermistr-kryskpische Bestimmung des Gefrierpunktes - Flureszenzptische Bestimmung der smatischen Zellen - Flureszenzptische Bestimmung der Keimzahl - Mikrbilgischer Inhibitinstest für den Nachweis vn Hemmstffen Tierseuchendiagnstik gemäss TSV (Tankmilchprben aus Milchprüfung gem. MiPV) Typ B: Optimierung festgelegter Prüfverfahren (Anpassung an Kundenwünsche, geänderte Nrmen) gestattet - Nachweis vn Antikörpern gegen das Bvine Virus Diarrhe Virus (BVD) mittels ELISA - Nachweis vn Antikörpern gegen das Bvine Herpesvirus Typ 1 (IBR) mittels ELISA - Nachweis vn Antikörpern gegen das Bvine Leuksevirus (EBL) mittels ELISA
9 Elemente der Qualitätssicherung Prbenahme: Vrgaben Instruktin und Zulassung des Persnals Identifikatin der Prben mit Barcde Prtkll der Prbenahme Kühlkette mit Überwachung und Prtkllierung der Temperatur Eingangsprüfung: Überprüfung der Prtklle und visuelle Kntrlle der Prben Registrierung: Übertragen des Barcdes in das Dateisystem Puffer: Frtsetzten der Kühlkette mit Temperaturüberwachung
10 Elemente der Qualitätssicherung Puffer: Frtsetzten der Kühlkette mit Temperaturüberwachung Prbensteuerung: Analysenreihenflge: 1. Hemmstff: keine Verschleppung 2. Bakterien: keine Vermehrung 3. Inhaltsstffe Wiederhlung bei Grenzwertüberschreitung Analysegerät: Validierte Methde Kalibrierung mit zertifizierten Referenzprben interne Kntrllprben (jede 48 Prbe mit bekannten Werten) Wartung Ringversuche Scannen: Erfassen des Barcdes und Zurdnen des Resultats
11 Ablauf Labruntersuchung
12 BactScan Basic Unit BactScan Basic Unit BactScan Basic Unit CmbiFss Basic Unit Basic Unit CmbiFss Basic Unit CmbiFss Basic Unit CmbiFss Basic Unit CmbiFss Basic Unit CmbiFss Untersuchungen für Milchprüfung Prben- Puffer Prben- Puffer Pilt- Puffer Puffer Puffer Puffer Puffer Puffer Repetitin 5 Shredder 8 2 Prben- Ausstss 2) Registrierung der Prben (Ablesen Barcde, Beschreiben 3) Stapelung RFID in Kühlpuffer Chip) Puffer Puffer Puffer Pip 1 Pip 2 4 Puffer Puffer Puffer 8) Abwurf der Prben in den Shredder 5) Srtieren der Prben auf «Repetitin» 3 Puffer 1 4) Pipettieren in BRT Platten und Rückstellmuster Aut Analyzer (Azetn) 6 7 1) Einstellen der Prben in «Pucks» 7) Zellzahl- und Gehaltsbestimmung auf 6) 6) Keimzahlbestimmung Keimzahlbestimmung auf BactScan CmbiFss auf BactScan CmbiFss
13 Ablauf und Datenfluss TMD Abgleich mit Selektinsliste Erstellung Platemap Dupln Pipettierung Rückstellmuster Registrierung Barcde bei Prbeneingang Umpipettierung in DWP Selektin der zu untersuchenden Betriebe Erstellung Platemap DWP Übermittlung an alis ELISA Analyse Verbringen in Frmat für alis Einlesen Prben- IDs und Prbenwerte in LIMS Erstellung Platemap ELISA Ausgabe Prbenwerte
14 Selektin der Betriebe Für jede TVD Nummer wird anhand der Stammdatenbank vn Suisselab AG via der AGIS Nummer der entsprechende «Lab Key» (Milchkäufer/Zne-Genssenschaft-Lieferant) ermittelt Erstellen einer Selektinsliste mit den Lab Keys im Datenerfassungssystem MiLg Die Prben auf der Selektinsliste sind «scharf gestellt», d.h. sie werden beim nächsten Prbeneingang registriert
15 Registrierung Prbeneingang Bei der Pipettierung der Prben in das Rückstellmuster der Hemmstff-Untersuchung wird der Prbeneingang und die Pipettierung im MiLg eingetragen: >Nr. des Dupln Racks >Barcde Nr. Prbenflasche >Barcde Nr. dazugehörigen BRT Platte >Psitin auf Dupln Rack/BRT Platte >Datum u. Uhrzeit der Pipettierung Gleichzeitig wird das Platemap des Dupln-Racks erstellt
16 Umpipettierung in DWPs Autmatisiert auf Tecan Freedm EVO-100 Wrkstatin (8-Kanal LiHa) Transfer der selektierten Milchprben in 48-well Deepwell-Platten Autmatisierte Erstellung des Platemap der DWP
17 Transfer Platemap Dupln zu DWP Platemap Rückstellmuster (Dupln Rack) Autmatische Generierung durch Steuerungssftware Tecan Freedm EVO-100 Platemap 48-Well DWP
18 Autmatisierte ELISA Untersuchung Autmatisiert auf Tecan Freedm EVO-200 ELISA Wrkstatin (2x 4-Kanal LiHa, 1x RMa, 2x MIO2 Inkubatren, 96-Kanal Hydrspeed Washer, Sunrise Micrplate Reader) Transfer der Milchprben aus den 48-Well Deepwell- in die 96-Well ELISA Platten Autmatisierte Erstellung des Platemap der ELISA Platte (csv File)
19 Transfer Platemap DWP zu ELISA Platemap 48-Well DWP Autmatische Generierung durch Steuerungssftware Tecan Freedm EVO-200 Platemap ELISA Platte (csv)
20 Ausgabe Prbenwerte Datenanalyse-Sftware «Magellan» : Berechnung der Nett-Extinktinen und PP-Werte Datenausgabe in asc File Prüfung der Validitätskriterien
21 Validierung der Befunde Das ELISA Platemap (csv) und das Daten-File (asc) werden in ein Excel Frmular eingelesen Die OD-Werte, Nett-Extinktinen und PP-Werte werden dargestellt Die Validitätskriterien werden nchmals unabhängig geprüft Technische Freigabe durch Labranten, Medizinische Freigabe durch Labrleiter/Stv.
22 Einlesen in LIMS, Übermitteln an alis Das ELISA Platemap (csv) und das Daten-File (asc) werden ins LIMS (MiPrDat) eingelesen Die Betriebs-IDs (Lab Key) werden TVD Nummern, Kuh-Zahl, PLZ, Kantn etc. zugerdnet Die Erfüllung der Validitätskriterien (aus Datenanalyse-Sftware «Magellan») wird im LIMS angezeigt und durch den Labrleiter/Stv. nchmals überprüft. Die Befunde werden anschliessend direkt aus dem LIMS an alis übermittelt.
23 Summary QM-System Akkreditierung Validierte Methden Wartung Autmatisierung Qualität Kalibrierung Interne Kntrllen Ringversuche Datenfluss
24 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!
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