infektiöses Humanserum oder Blutproben behandelt werden.
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- Dirk Morgenstern
- vor 8 Jahren
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1 QUANTA Lite Phosphatidylserine IgG ELISA (Früher Anti-Phosphatidylserin (Human) IgG BINDAZYME Enzym-Immunoassay Kit) Nur für In-Vitro Diagnostik CLIA Kompliziertheit: Hoch Verwendungszweck Dieser Kit dient zur in-vitro Bestimmung von IgG-Antikörpern gegen Phosphatidylserin in Humanserum. Er dient zur Unterstützung der Diagnose des Antihospholipid Syndroms (APS). Der Kit enthält ausreichend Material, um maximal 41 Proben in Doppelbestimmung oder 89 Proben in Einzelbestimmung zu messen, sowie eine Kalibrationskurve und je eine Positiv- und Negativkontrolle. Informationen zum Test Patienten mit dem Antiphospholipid Syndrom haben Autoantikörper gegen anionische Phospholipide und leiden an wiederkehrenden Thrombosen, habituellen Aborten und Thrombozytopenie 1. Diese Antikörper werden traditionell mit einer Kombination aus Cardiolipin und dem Cofaktor ß 2 -Glycoprotein 1 2 als Antigen bestimmt. Kürzlich konnte gezeigt werden, dass Anti-Phosphatidylserine-Antikörper eine spezielle klinische Bedeutung bei diesem Krankheitsbild haben 3. Gegen Phosphatidylserin gerichtete Antikörper sind möglicherweise als Marker für die Verlaufskontrolle des Antiphospholipid Syndroms besser geeignet, da die Antigene in den Endothel- und Thrombozytenmembranen 4 vorkommen. Weiterhin unterstützt die Beobachtung, dass diese Antikörper APS bei Mäusen auslöst 5, diese Einschätzung. Testprinzip Die Wells (Vertiefungen) der Mikrotiterplatten sind mit Phosphatidylserin und einen Cofaktor beschichtet. Die Kalibratoren, Kontrollen und zu testende Proben werden in den Wells inkubiert, so dass die anti-phosphatidyl- Autoantikörper während der ersten Inkubation an das immobilisierte Antigen binden können. Nach dem Waschen der Wells - zum Entfernen des ungebundenen Protein - gibt man das, mit Peroxidase markierte ziege anti-human- IgG-Konjugat hinzu. Nach einer weiteren Inkubation und einem weiteren Waschvorgang - um das ungebundene Konjugat zu entfernen - wird das gebundene Konjugat mit Hilfe von 3,3',5,5' - Tetramethylbenzidin (TMB) sichtbar gemacht. TMB ergibt ein blaues Reaktionsprodukt, dessen Intensität proportional zur Autoantikörper-Konzentration der Probe ist. Schwefelsäure wird in jedes Well pipettiert um die Reaktion zu stoppen. Das gelbe Reaktionsprodukt wird bei 450 nm gemessen. Inhalt der Testpackung 1. Mit Phosphatidylserin-Antigen beschichtete ELISA-Mikrotiterplatte aus Polystyrol (12-1 x 8 Kavitäten), mit Streifenhalter in Folienverpackung und Trockenmittel 2. ELISA Negative Kontrolle, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum ohne humane IgG Antikörper gegen Phosphatidylserin, gebrauchsfertig vorverdünnt, 1,2 ml 3. Phosphatidylserin IgG ELISA Kalibrator A, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum IgG 4. Phosphatidylserin IgG ELISA Kalibrator B, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum IgG 5. Phosphatidylserin IgG ELISA Kalibrator C, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum IgG 6. Phosphatidylserin IgG ELISA Kalibrator D, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum IgG 7. Phosphatidylserin IgG ELISA Kalibrator E, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum IgG 8. Phosphatidylserin IgG Positiv Kontrolle, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum IgG 9. Probendiluens PS, 2 Flaschen stroh gefärbt mit phosphatgepufferte Kochsalzlösung, Proteinstabilisatoren und Konservierungsmittel, 50 ml 10. PBS Waschkonzentrat, 1 Flasche mit 20 fachem Konzentrat rot gefärbt mit phosphatgepufferte Kochsalzlösung, 50 ml. Zur Verdünnung bitte das entsprechende Kapitel in der Anleitung beachten. 11. HRP Phosphatidylserin IgG Konjugat, 1 Flasche rot gefärbt mit Puffer, Proteinstabilisatoren und Konservierungsmittel, 10 ml 12. TMB Chromogen, 1 Flasche mit Stabilisatoren, 10 ml 13. HRP Stopplösung, 0,344M Schwefelsäure, 1 Flasche farblos, 10 ml Hinweise 1. VORSICHT: Kontrollen und Konjugat enthalten 0,02% Chloramphenicol. Es ist im US-Bundesstaat Kalifornien und allgemein bekannt, daß dieser Stoff Krebs verursachen kann. Enthält ein Reizmittel, das bei Inhalation, Einnahme oder Absorbtion durch die Haut gesundheitliche Schäden verursachen kann. Kontakt mit Haut und Augen vermeiden. 2. Alle Reagenzien für die Herstellung dieses Tests wurden auf Antikörper gegen HIV, HBsAg und HCV getestet und für negativ befunden. Dennoch sollten alle humanen Kontrollen wie potentiell 9 infektiöses Humanserum oder Blutproben behandelt werden. 3. NaN3 wird als Stabilisator verwendet. NaN 3 ist ein Giftstoff und kann bei Einnahme toxische Reaktionen verursachen. Vorsichtig handhaben und Kontakt mit Augen und Haut vermeiden! Den Kontakt mit Metall, basischen Stoffen oder anderen Komponenten, die mit Säure reagieren können, vermeiden. Bei der Entsorgung von Reagenzien ist daher mit viel Leitungswasser nachzuspülen, um Ansammlungen im Abwassersystem zu verhindern. 4. Das HRP Phosphatidylserin IgG Konjugat enthält eine verdünnte Chemikalie, die bei Einnahme toxisch wirken kann. Daher den Kontakt mit Haut und Augen vermeiden. 1
2 5. Das TMB Chromogen enthält ein Reizmittel, das bei Inhalation, Einnahme oder Absorbtion durch die Haut gesundheitliche Schäden verursachen kann. Kontakt mit Haut und Augen vermeiden. 6. Die HRP Stopplösung besteht aus verdünnter Schwefelsäure. Den Kontakt mit Basen, Metallen und anderen Stoffen, die mit Säure reagieren können, vermeiden. Schwefelsäure ist ein Giftstoff und kann bei Einnahme toxische Reaktionen hervorrufen. Den Kontakt mit Haut und Augen vermeiden. 7. Die vorgeschriebene persönliche Schutzausrüstung während der Arbeit mit Reagenzien tragen. 8. Verschüttete Reagenzien sofort beseitigen. Bei der Entsorgung von Abfällen alle Umweltvorschriften beachten. Vorsichtsmaßnahmen 1. Dieser Test ist für In-Vitro Diagnostik. 2. Dieser Test sollte nur von entsprechend geschultem Laborpersonal durchgeführt werden. 3. Testdurchführung strikt nach Arbeitsanleitung. Jegliche Abweichung kann die Testqualität und Ergebnisse beeinflussen. Beachten Sie die spezifischen Hinweise und Warnungen in dieser Arbeitsanleitung. 4. Reagenzien unterschiedlicher Chargen dürfen NICHT untereinander gemischt oder gemeinsam verwendet werden. Bei großem Testdurchsatz muss darauf geachtet werden, dass alle Reagenzien der GLEICHEN Charge entstammen. Der Austausch einer Testkomponente kann inkorrekte Ergebnisse zur Folge haben. 5. Zur Vermeidung von Kontaminationen der Reagenzien immer saubere Plastik- oder Glasgefäße verwenden. Niemals unbenutztes Reagenz in die Flaschen zurückgeben. 6. Reagenzienflaschen nicht für längere Zeit offen stehenlassen. Die daraus resultierende Verdunstung oder Verunreinigung führt zu widersprüchlichen Ergebnissen. 7. TMB darf weder mit Licht noch mit Wasser in Berührung kommen! 8. Die Verwendung von mikrobiell oder mit Partikeln verunreinigter, hämolytischer oder lipämischer Seren vermeiden. 9. Falsche Probenverdünnungen können nicht erkannt werden, da die Kit-Kontrollen gebrauchsfertig sind. Es wird empfohlen, kalibrierte Pipetten und geeignete interne Kontrollen zu verwenden. 10. Die Verwendung von ELISA-Automaten, Pipettierautomaten oder anderen automatisierten Geräten kann im Vergleich zur manuellen Testdurchführung zu abweichenden Ergebnissen führen. Jedes Labor muss das System vollständig validieren und sicherstellen, dass die Ergebnisse innerhalb der in dieser Arbeitsanleitung und dem beigefügten QC-Zertifikat definierten Spezifikationen liegen. 11. Die verwendeten Geräte und Pipetten müssen gemäß der Herstellerangaben kalibriert und gewartet werden. Lagerung 1. Den Kit bei 2-8 C lagern, nicht einfrieren. Lagerung bei falscher Temperatur beeinflusst die Ergebnisse. 2. Der verdünnte Waschpuffer ist in einem sauberen Gefäß bei Raumtemperatur (20-26 C) bis maximal 1 woche haltbar. 3. Die Haltbarkeit des Kits wird auf dem Außenetikett angegeben. Proben 1. Blutproben über Venenpunktur sammeln und auf natürliche Weise gerinnen lassen. Serum vom Gerinnsel trennen. 2. Die Seren können bei 2-8 C bis zu 7 Tage vor dem Test gelagert werden 6. Für eine längere Lagerung empfiehlt es sich, die Seren unverdünnt und aliquotiert bei mindestens -20 C einzufrieren. 3. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Proben vermeiden. 4. Serumproben nicht hitzeinaktivieren, dies kann zu falsch-positiven Ergebnissen führen. Testdurchführung In der Testpackung vorhandenes Material Arbeitsanleitung: mit genauen Angaben zur Testdurchführung. QC Zertifikat: mit Angaben zu den Sollwerten der Kontrollen und ideale Kalibrationskurve der jeweiligen Charge. Phosphatidylserine Coated Wells (Phosphatidylserin-beschichtete Mikrotiterstreifen): 12 Mikrotiterstreifen mit 8 vereinzelbaren Wells, die mit Phosphatidylserin-Antigen beschichtet sind. Die Streifen sind in einem wiederverschließbaren Folienbeutel, der ein Trockenmittel enthält, verpackt. PS Sample Diluent (PS Probenverdünnungspuffer): 2 Flaschen mit 50mL gebrauchsfertigem Puffer zur Probenverdünnung. Farbcodierung: stroh. PBS Wash Concentrate (20x) (PBS Waschpuffer): 1 Flasche mit 50mL eines 20-fach konzentrierten Puffers zum Waschen der Wells. Phosphatidylserine IgG ELISA Calibrators (Phosphatidylserin IgG ELISA -Kalibratoren): 5 Flaschen mit je 1,2mL gebrauchsfertig verdünntem Humanserum das folgende Konzentrationen an anti- Phosphatidylserin-Autoantikörper enthält: 100; 33,3; 11,1; 3,7; 1,23 GPS U/mL. Phosphatidylserine IgG Positive Control (Phosphatidylserin IgG-Positivkontrolle): 1 Flasche mit 1,2mL verdünntem Humanserum. Der Sollwert ist auf dem QC-Zertifikat angegeben. Gebrauchsfertig. ELISA Negative Control (ELISA-Negativkontrolle): 1 Flasche mit 1,2mL verdünntem Humanserum. Der Sollwert ist auf dem QC-Zertifikat angegeben. Gebrauchsfertig. HRP Phosphatidylserine IgG Conjugate (HRP Phosphatidylserin IgG-Konjugat): 1 Flasche mit 10mL gereinigtem, Peroxidase-markiertem Antikörper gegen Human-IgG. Farbcodierung: rot. Gebrauchsfertig. TMB Chromogen (TMB-Chromogen): 1 Flasche mit 10mL TMB-Lösung. Gebrauchsfertig. HRP Stop Solution (Stopp-Lösung): 1 Flasche mit 10mL 0,344M Schwefelsäure. Gebrauchsfertig. 2
3 Zusätzliches benötigtes Material Automatisches Mikrotiterplatten-Waschgerät: ist empfehlenswert, aber die Platten können auch manuell gewaschen werden. Mikrotiterplatten-Reader: Messung der optischen Dichte in den Wells bei 450nm. Referenzmessung erfolgt gegen Luft. Destilliertes oder deionisiertes Wasser: Es sollte von höchster Qualität und frei von Metallionen sein. Kalibrierte Mikropipetten: Zum Pipettieren von 1000, 100 & 10µL. Mehrkanal-Pipette: Zum Pipettieren von 100µL Volumina von Konjugat, TMB-Chromogen und Stopp- Lösung. Glas- oder Plastikgefäße: Zur Probenverdünnung. Methode Testvorbereitung 1. Kit auf Raumtemperatur erwärmen Die optimale Temperatur für die Testdurchführung liegt bei C. Den Kit nach Entnahme aus dem Kühlschrank ca. 60 Minuten auf Raumtemperatur erwärmen lassen. Die Wells nicht vor Erreichen der Raumtemperatur aus dem Folienbeutel nehmen.hinweis: Der Kit kann bis zu 1 Woche bei Raumtemperatur gelagert werden. 2. Kit-Komponenten Jede Kit-Komponente vor Gebrauch kurz schütteln. 3. Waschpuffer Verdünnunen Den gesamten Inhalt (50 ml) des PBS Waschkonzentrats mit 950 ml Aqua dest. mischen (1:20 Verdünnung). Die verdünnte Pufferlösung ist bei 2-8 C eine Woche stabil. Soll nicht die gesamte Mikrotiterplatte auf einmal verwendet werden, so können für einen Ansatz von 16 Kavitäten 4 ml Konzentrat mit 76 ml Aqua dest. gemischt werden. 4. Verdünnung der Proben Serumproben 1:101 verdünnen, indem 10µL Serum mit 1000µL gebrauchsfertigem PS Probenverdünner gemischt werden. Verdünnte Proben sollen innerhalb von 8 Stunden getestet werden. Die Phosphatidylserin Kalibratoren A bis E, die Phosphatidylserin und die negative ELISA-Kontrolle NICHT VERDÜNNEN. 5. Umgang mit Streifen und Rahmen Die benötigte Anzahl Wells aus dem Folienbeutel entnehmen und in den Rahmen setzen. Dabei von Position A1 ausgehend die Spalten von links nach rechts auffüllen. Achten Sie darauf, die langen Seiten des Rahmens zusammenzudrücken, damit die Wells nicht herausfallen können. Hinweis: Um die Kontaktzeit mit der Luftfeuchtigkeit zu minimieren die nicht verwendeten Wells sofort in den wiederverschließbaren Folienbeutel mit dem Trockenmittel geben und gut verschließen. Darauf achten, dass der Folienbeutel nicht beschädigt wird.achtung: Kontakt mit Feuchtigkeit oder Verunreinigung durch Staub oder anderen Partikeln kann einen Antigen-Abbau verursachen. Daraus resultiert eine schlechte Präzision und potentiell falsche Ergebnisse. Testdurchführung Alle Reagenzien in der gleichen Reihenfolge pipettieren. 1. Pipettieren der Kalibratoren, Kontrollen und Proben und Inkubation 100µL von jedem Kalibrator, jeder Kontrolle und jeder verdünnten (1:101) Probe in das dafür laut Plattenschema vorgesehene Well pipettieren. Hinweis: Die Proben müssen so schnell wie möglich pipettiert werden; die Inkubationszeit läuft ab Zugabe der letzten Probe. 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. 2. Waschen der Platte Sorgfältiges Waschen der Wells ist wichtig für eine hohe Präzision und genaue Testergebnisse. Bei nicht korrekt gewaschenen Wells können ungenaue Ergebnisse mit schlechter Präzision und hohem Hintergrund auftreten.nach der Inkubation die Wells dreimal mit µL Waschpuffer waschen. Das Waschen kann mit einem automatischen Platten-Waschgerät oder manuell erfolgen. Nach dem letzten Waschschritt die Wells durch leichtes Klopfen auf eine absorbierende Unterlage (z.b. Papiertücher) trocknen. Manuelles Waschen: a. Den Inhalt der Wells in den Ausguss schütten, dabei die langen Seiten des Rahmens zusammendrücken. b. Die Wells auf einer absorbierenden Unterlage (z.b. Papiertücher) leicht ausklopfen. c µL Waschpuffer in der Arbeitskonzentration in die Wells pipettieren. d. Die Mikrotiterplatte auf einer flachen Unterlage stehend leicht schütteln. e. Zweimaliges Wiederholen der Schritte a bis d. f. Die Wells wie unter a und b entleeren. 3. Pipettieren des Konjugats 100µL Konjugat in jedes Well pipettieren. Die Ränder der Wells mit Filterpapier abtrocknen um Spritzer zu entfernen. Hinweis: Um Verunreinigungen zu vermeiden, niemals überschüssiges Konjugat in die Konjugat-Flasche zurückgeben. 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. 4. Waschen der Platte Siehe Abschnitt Pipettieren von TMB Chromogen Nach dem Waschen 100µL TMB Chromogen in jedes Well pipettieren. Die Ränder der Wells mit Filterpapier abtrocknen um Spritzer zu entfernen. Hinweis: Um Verunreinigungen zu vermeiden, niemals überschüssiges TMB in die TMB-Flasche zurückgeben.30 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubieren. 6. Reaktionsende 100µL Stopp-Lösung in jedes Well pipettieren. Die Farbe schlägt von blau nach gelb um. 7. Farbmessung Die optische Dichte (OD) bei 450nm in jedem Well mit einem Mikrotiterplatten-Reader innerhalb von 30 Minuten nach Zugabe der Stopp-Lösung bestimmen. 3
4 Qualitätskontrolle 1. Qualitätskontrolle Nur, wenn alle nachfolgend aufgeführten Kriterien erfüllt sind, ist der Test gültig. Ist dies nicht der Fall, ist der Test ungültig und muss wiederholt werden. Kalibratoren und Kontrollen (Positiv, Negativ) müssen bei jedem Testansatz mitgeführt werden. Das Ergebnis der Kontrollen muss in dem angegebenen Wertebereich (siehe QC-Zertifikat) liegen. Die berechnete Kalibrationskurve sollte der auf dem QC-Zertifikat abgebildeten Kalibrationskurve ähnlich sein. 2. Berechnung der mittleren optischen Dichte (nur bei Doppelbestimmung): Für jeden Kalibrator und jede Kontrolle und Probe die mittlere optischen Dichte (OD) der Doppelbestimmungen berechnen. Der Variationskoeffizient (%VK) der Doppelbestimmungen sollte jeweils unter 15% liegen. 3. Erstellen der Kalibrationskurve Die Kalibrationskurve kann entweder automatisch oder manuell erstellt werden. Dazu wird die anti- PhosphatidylserinAutoantikörper-Konzentration auf der logarithmischen Skala gegen die OD-Werte auf der linearen Skala für jeden Kalibrator aufgetragen. Automatisch: Geeignete, validierte Software verwenden. Kalkulationsmodus verwenden, der am besten zu den Daten passt. Manuell: Halblogarithmisches Millimeterpapier verwenden, eine Ausgleichskurve durch die Punkte legen (keine Gerade oder Punkt-zu-Punkt-Verbindung). 4. Umgang mit abweichenden Kalibrationspunkten Liegt ein Messpunkt nicht auf der Kalibrationskurve, so kann er weggelassen werden. Der Test sollte wiederholt werden, wenn die daraus resultierende Kalibrationskurve deutlich von der im QC-Zertifikat angegebenen Kurvenform abweicht oder, wenn mehrere Kalibrationspunkte zu starke Abweichungen aufweisen. 5. Berechnung der Autoantikörper-Konzentrationen in den Kontrollen und verdünnten Proben Die anti-phosphatidylserin-autoantikörper-konzentrationen der Kontrollen und verdünnten Proben direkt aus der Kalibrationskurve ablesen. Die Kontrollwerte müssen in den im QC-Zertifikat angegebenen Bereich fallen. Hinweis: Die Standard-Probenverdünnung von 1:101 ist in der Kalibrationskurve bereits berücksichtigt. Es sind keine weiteren Berechnungen nötig. 6. Kalibration des Tests Der Test ist gegen die Louisville-Referenzpräparation LAPL-GM-200 kalibriert. Grenzen des Verfahrens Dieser Testkit dient nur zur Unterstützung der Diagnose. Ein positives Ergebnis ist ein Hinweis auf bestimmte Erkrankungen, es muss aber durch den klinischen Befund und andere serologische Untersuchungen bestätigt werden. Die Testergebnisse können nicht als diagnostischer Beweis für das Vorliegen bzw. Nichtvorliegen einer Krankheit verwendet werden. Leistungs-Daten Präzision Die Intra- und Inter-Assay-Präzision wurde mit drei Proben, deren Autoantikörperkonzentration innerhalb der Kalibrationskurven liegen, bestimmt. Die Konzentrationen und die Variationskoeffizienten (%VK) jeder Probe sind wie folgt: INTRA-ASSAY PRÄZISION n=16 Konzentration (GPS U/mL) % VK Probe 1 12,7 7,3 Probe 2 25,7 6,6 Probe 3 75,4 6,9 INTER-ASSAY PRÄZISION n=3 Konzentration (GPS U/mL) % VK Probe 4 16,7 2,9 Probe 5 22,4 10,6 Probe 6 34,2 4,8 Normalbereich Die Konzentration an anti-phosphatidylserin-autoantikörpern wurde in Seren von 200 normalen, erwachsenen Blutspendern bestimmt. Die Ergebnisse sind unten graphisch zusammengefasst. Auf der Basis eines negativen Cut-Off-Wertes von <11 GPS U/mL wurde 1 von 200 Proben mit einer Konzentration von 12,86 GPS U/mL als positiv befundet. IgG PS Normalverteilung Anzahl d. Proben >11 IgG anti-ps GPS U/mL Dieser Normalbereich dient nur zur Orientierung. Es wird empfohlen, dass jedes Labor einen eigenen Normalbereich ermittelt. 4
5 Spezifität Sensitivität, Übereinstimmung Die relative Spezifität, Sensitivität und Übereinstimmung wurde im Vergleich zu einem alternativen anti- Phosphatidylserin EIA-Kit mit 55 Proben ermittelt. EIA BINDAZYME IgG Anti-Phosphatidylserin EIA Alternativer EIA a Relative Sensitivität 100,0% Relative Spezifität 64,3% Relative Übereinstimmung 81,8% a Es liegen Berichte vor, dass es eine Korrelation zwischen dem Vorhandensein von anti Phosphatidylserin- und Anticardiolipin-Antikörpern in Patientenproben gibt 7. Die 10 diskrepanten Proben wurden in einem IgG- Anticardiolipin ELISA überprüft; 8 der 10 Proben wurden als positiv bestätigt. Analytische Sensitivität Die Sensitivität wird als die mittlere Konzentration plus die zweifache Standardabweichung (2SD) des Proben- Verdünnungspuffers ausgedrückt. Hierzu wurde der Proben-Verdünnungspuffer 20mal gemessen. Analytische Sensitivität = 0,21 GPS U/mL. Messbereich Der Messbereich des Tests liegt zwischen 1,23 und 100 GPS U/mL. Interferieriende Substanzen Anti-Phosphatidyserin-positive Proben (hohe und niedrige Konzentrationen) wurden mit verschiedenen interferierenden Substanzen versetzt und anschließend mit diesem ELISA getestet. Die Überprüfungsmethode für diese Substanzen basiert auf Interference Check A plus - Kokusai Shiyaku, Japan. Substanz Bilirubin F (Frei) Bilirubin C (Konjugiert) Hämolysiertes Haemoglobin Chylus Konzentration 18,3mg/dL 19,0mg/dL 490,0mg/dL 1930,0 Units Es wurden keinerlei Interferenzen festgestellt. Hinweis: Proben von Patienten mit einem IgG-Myelom können falsch-positive Ergebnisse erzeugen. Es wurde aber dokumentiert 8, dass einige Myelom-Antikörper eine spezifische Anti-Phospholipid-Aktivität aufweisen. Erwartungswerte Der Normalbereich wurde mit Seren von 200 normalen erwachsenen Blutspendern bestimmt. Die unten angegebenen Werte dienen nur zur Orientierung. ELISAs sind sehr sensitiv und in der Lage kleine Unterschiede in der Probenpopulation festzustellen. Daher wird empfohlen, dass jedes Labor auf der Basis der lokalen Population und der verwendeten Geräte und Techniken seinen eigenen Normalbereich ermittelt. IgG Anti-Phosphatidylserin <11 GPS U/mL Negativ 11 GPS U/mL Positiv 5
6 Plattenscheman A B C D E F G H Kurzarbeitsanleitung µL von jedem Kalibrator, jeder Kontrolle und jeder 1:101 verdünnten Probe in das entsprechende Well pipettieren. 30 Minuten inkubieren. Waschen µL Konjugat in jedes Well pipettieren. 30 Minuten inkubieren.waschen µL Substrat in jedes Well pipettieren. 30 Minuten inkubieren µL Stopp-Lösung in jedes Well pipettieren. Absorption bei 450nm messen. QUANTA Lite i ist ein eingetragenes Warenzeichen von INOVA Diagnostics, Inc. 6
7 Referenzen 1. McNeil HP, Chesterman CN, Krillis SA (1991). Immunology and Clinical Importance of Anti-phospholipid Antibodies. Adv Immunol,49: Roubey AS (1996). Immunology of the Anti-phospholipid Antibody Syndrome. Arthritis & Rheumatism,39: Barna LK et al. (1994) A study of relationships among anti-phosphatidylserine and anti-cardiolipin antibodies, the lupus anticoagulant and clinical complications. Lupus 3: Schick PK, Kurica KB, Chacko GK (1976) Location of phosphatidylethanolamine and phosphatidylserine in the human platelet plasma membrane. J Clin Invest 57: Blank M, Tincani A,, Shoenfeld Y (1994) Induction of experimental anti-phospholipid syndrome in naïve mice with purified IgG anti-phosphatidylserine antibodies. J Rheumatol 21: Protein Reference Unit Handbook of Autoimmunity (3rd Edition) 2004 Ed A Milford Ward. J. Sheldon, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield Radway-Bright E.L., Ravirajan C.T. and Isenberg D.A. (2000) The prevalence of antibodies to anionic phospholipids in patients with the primary antiphospholipid syndrome and their relatives and spouses. J Rheumatol 21: MacGregor AJ. et al. (1992). Analysis of antibody reactivity in sera of 42 patients with paraproteinaemia. Autoimmunity; 13: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. Hersteller: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) : support@inovadx.com Autorisierter Repräsentant: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: DEU Revision 1 7
SLE-Patienten, da hier die CIC-Konzentration mit der Aktivität der Krankeit variiert und durch Komplement-Reaktionen vermindert werden 6.
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