RPR TEST KITS. Newmarket Laboratories Ltd Lanwades Business Park, Kentford, Newmarket, CB8 7PN UK
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- Georg Brahms
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1 Product Code: RPR TEST KITS Kits for the qualitative and semi-quantitative detection of syphilis antibody in human serum or plasma by macroscopic agglutination on disposable test cards. Newmarket Laboratories Ltd Lanwades Business Park, Kentford, Newmarket, CB8 7PN UK Distributed by: Bio-Rad 3 Boulevard Raymond Poincaré Marnes - la - coquette - France
2 RPR 100 RPR 500 Produktcode : 100 qualitative Tests Produktcode : 500 qualitative Tests Kits für die qualitative und semiquantitative Detektion von Syphilis-Antikörpern in Humanserum oder -plasma mittels makroskopischer Agglutination auf Einweg-Testkarten. Alle hergestellten und in den Verkehr gebrachten Reagenzien unterliegen einem Qualitätssicherungssystem, das sich vom Eingang der Rohmaterialien bis zum Vertrieb der Produkte erstreckt. Jede Charge unterliegt der Qualitätskontrolle und wird nur bei Konformität mit den Freigabekriterien in den Verkehr gebracht. Die Aufzeichnungen zu Produktion und Qualitätskontrolle einer jeden Charge befinden sich in unserer Firma. Klinischer Hintergrund. Syphilis ist eine chronische Infektionskrankheit, die spezifische Infektionsstadien durchläuft: Primär-, Sekundär-, Tertiär- und Quartärstadium. Die einzelnen Stadien sind durch unterschiedliche klinische Symptome gekennzeichnet. Im Anfangsstadium tritt in der Regel ein so genannte Schanker auf, gefolgt von Ausschlag und langen Ruhephasen im Krankheitsverlauf. Wird die Infektion nicht behandelt, kann sie zu Herzkreislaufproblemen und Neurosyphilis führen. Auslöser der Krankheit sind die Spirochäten Treponema pallidum, die in der Regel beim Geschlechtsverkehr übertragen werden. Syphilis kann aber auch durch die Transfusion infizierten Bluts übertragen werden. Die intra-uterine Ansteckung ist ebenfalls möglich. Die Kultivierung der Bakterien in künstlichen Medien hat sich so gut wie unmöglich erwiesen. Der Nachweis der Bakterien erfolgt in der Regel durch den Nachweis von Antikörpern im Blut, die bereits kurz nach der anfänglichen Ansteckung auftreten und viele Jahre erhalten bleiben. Der RPR-Test ist ein Nicht-Treponementest, da die aufgespürten keine T pallidum-spezifischen Antikörper sind, obgleich das Vorhandensein der Antikörper im Serum oder Plasma des Patienten stark auf eine Infektion mit T pallidum hindeuten. Dieser Test misst Antikörper (IgG und IgM), die zum einen als Reaktion auf von beschädigten Wirtszellen freigesetztes lipoidales Material gebildet werden, zum anderen als Reaktion auf lipoproteinähnliche Materialien, die von den Spirochäten abgegeben werden. Diese Antikörper verschwinden in der Regel nach erfolgreicher Behandlung der Infektion. Verwendung Diese Kits zur Detektion von im Zusammenhang mit Syphilis auftretenden Antikörpern im menschlichen Serum und Plasma sind nur von angemessen ausgebildetem und qualifiziertem Personal zu verwenden. Testprinzip Die RPR-Testkits arbeiten auf der Grundlage von Kohlepartikeln, die mit einer Mischung aus flüssigen Antigenen beschichtet sind. Diese verbinden sich mit Antikörpern im Serum oder Plasma des Patienten. Die Partikel sind in einem Medium suspendiert, das Substanzen zur Eliminierung unspezifischer Reaktionen enthält. Positive Reaktionen zeigen sich in der makroskopischen Aggregation der Partikel. Obgleich das Testkit in erster Linie für die Durchführung qualitativer Tests gedacht ist, kann die Antikörperkonzentration in jeweils zweifacher Verdünnung schrittweise titriert werden. Die Agglutinationsmuster werden mit dem Auge ausgewertet. 22
3 Inhalt Tests Tests R1 RPR-Antigen 1 x 2ml 5 x 2 ml R2 Positivkontrolle 1 x 1ml 2 x 1 ml R3 Negativkontrolle 1 x 1ml 2 x 1ml Tropfflasche 1 2 Tropfnadel 1 2 Testkarten (10 Kreise) Gebrauchsanleitung Warnhinweise Nur zur In-vitro-Diagnostik. Alle Reagenzien enthalten Natriumazid (weniger als 0,1% w/v). Flüssige Abfälle, die bei der Verwendung der Kits anfallen, sind mit viel Wasser wegzuspülen, um die Ansammlung potenziell explosiver Substanzen in den laboreigenen Rohrleitungen zu vermeiden. Die zum Kit gehörigen Kontrollmaterialien sind aus menschlichem Serum hergestellt. Sie wurden auf Spenderebene getestet und als negativ in Bezug auf Hepatitis B und C sowie HIV 1 und 2 befunden. Sie sollten jedoch so behandelt werden, als ob sie potenziell Krankheiten übertragen können. Serum- und Plasmaproben sind als mikrobiologische Gefahrenquelle zu behandeln und gemäß den geltenden Vorschriften und Gesetzen zu handhaben. Nach dem Verfallsdatum nicht mehr verwenden. Reagenzien nicht gegen Reagenzien austauschen oder mit Reagenzien kombinieren, die aus Kits mit anderen Lot-Nummern stammen. Lagerung Bei Nichtgebrauch zwischen 2 8 C lagern. Flaschen aufrecht stellen. Nicht tiefgefrieren. Haltbarkeitsdatum siehe Datum auf dem Etikett. Benötigte Ausrüstung Eine korrekt geeichte und gewartete Pipette (oder Einwegtropfer) mit einem Volumen von 50 Mikrolitern. Ein Rotator zum Drehen der Testkarte mit 100 Umdr./Min. bei einem Kreisdurchmesser von ca. 1 cm. Proben Serum- bzw. Plasmaproben sollten frei von Blutzellen und offensichtlicher mikrobieller Kontamination, auffälliger Hämolyse, Trübungen und Lipämie sein. Die Proben können bei C bis zu 7 Tage vor dem Durchführen der Tests gelagert werden. Proben, die länger gelagert werden müssen, sollten bei mindestens minus 20 C eingefroren werden. Eingefrorene Proben sollten vor dem Testen aufgetaut und gut vermischt werden. Testmethode. Bringen Sie zunächst alle Reagenzien, Kontrollsubstanzen und Proben auf Raumtemperatur. Verwenden Sie keine Proben, die übermäßig verschmutzt, hämolysiert, sehr trüb oder lipämisch sind. 23
4 Qualitativer Test. 1. Die zum Testkit gehörenden Positiv- und Negativkontrollen müssen bei jeder Testreihe durchgeführt werden. 2. Bringen Sie 50µl der Probe bzw. der Kontrollsubstanz in einen Kreis auf der Testkarte ein. 3. Streichen Sie die Probe gleichmäßig auf den kreisförmigen Bereich. 4. Schütteln Sie die Phiole mit RPR-Antigen, damit der Inhalt gründlich vermischt wird. 5. Befestigen Sie die Tropfnadel an der Tropfflasche aus Kunststoff und saugen Sie das RPR-Antigen an. 6. Drehen Sie die Tropfflasche und drücken Sie sie vorsichtig zusammen, um Luft aus der Nadel zu vertreiben. 7. Halten Sie die Tropfflasche senkrecht über die Probe und tropfen Sie genau einen Tropfen Antigen auf die Probe. 8. Setzen Sie die Testkarte auf einen Kartenrotator und drehen Sie die Karte 8 Minuten lang bei 100 Umdr./Min. 9. Sehen Sie sich das Ergebnis in gutem Licht an und werten Sie das Ergebnis aus. (Siehe Auswertung ) 10. Füllen Sie unbenutztes Antigen von der Tropfflasche zurück in die Glasphiole. 11. Reinigen Sie die Tropfflasche und Nadel mit destilliertem Wasser und lassen Sie sie vor Wiedergebrauch gut trocknen. Semiquantitativer Test 1. Verdünnen Sie die Probe in jeweils doppelter Verdünnung von unverdünnt auf 1:16 in physiologischer Kochsalzlösung. 2. Bringen Sie jeweils 50µl einer jeder Verdünnung in einen separaten Kreis auf der Testkarte ein. 3. Verstreichen Sie jede Verdünnung gleichmäßig auf dem Testkreis. 4. Folgen Sie den Anweisungen des Qualitativen Tests ab Schritt 3. Der Titer der Probe zeigt sich als Kehrwert der höchsten Verdünnung, die eine Aggregation der Kohlepartikel zeigt. Versuchsauswertung und -validierung Sehr reaktiv (SR): Große Klumpen von Kohlepartikeln vor einem hellen Hintergrund. Reaktiv (R) : Leicht Reaktiv (LR): Große Klumpen von Kohlpartikeln, etwas stärker dispersiert als bei Sehr reaktiv. Kleine Klumpen von Kohlepartikeln vor hellgrauen Hintergrund. Minimal Reaktiv (LR): Sehr leichte Verklumpung von Kohlepartikeln, die sich normalerweise als Aggregatknoten in der Mitte des Testkreises zeigt, oder am äußeren Rand des Testkreises verteilt ist. Nicht Reaktiv (NR): Typischerweise ein gleichmäßiges graues Muster oder ein Knoten nicht aggregierter Kohlepartikel in der Mitte des Testkreises. 24
5 Reaktive Proben sollten als Antikörper-positiv vermerkt werden und (aufgrund der Unspezifizität der entdeckten Antikörper) weiteren Tests unterzogen werden, um somit das Vorhandensein bzw. die Abwesenheit spezifischer Anti-Treponemen-Antikörper zu bestimmen. Zur Bestätigung der Gültigkeit des Tests sollte die mitgelieferte Positivkontrolle ein starkes positives Muster abgeben und die Negativkontrolle ein eindeutig negatives Ergebnis. Leistungsmerkmale Die folgenden Materialien wurden unabhängig voneinander getestet, um die Leistung des RPR-Tests (3 unterschiedliche Reihen) mit einem Referenzreagenz von CDC Atlanta und einem Reagenz eines anderen Herstellers zu vergleichen. Referenzplasma (n=20) von CDC Atlanta Positivteststreifen von einem britischen Krankenhaus (n=50) Normales Spenderplasma (n=50) WHO-Kontrolle Alle Proben gaben 100% übereinstimmende qualitative Ergebnisse mit allen Reagenzien. (95%- Vertrauensgrenze: 98, %). Bei den Titern positiver Proben lagen die Abweichungen zwischen den Reagenzien bei nicht mehr als einem zweifachen Verdünnungsschritt. Präzision und Genauigkeit Bei N =10 Versuchsreihen einer positiven Probe %CV = 0% Genauigkeit = +/-0% 25
6 Literatur 1. Larsen SA.,Pettit, et coll., EDTA treated plasma in the rapid plasm regain card test and the toluidine red unheated serum test for serodiagnosis syphilis. J Clin Microbiology 1983;17; Portnoy J. Modifications of the rapid plasma regain (RPR) card test for syphilis, for use in large-scale testing.am J Clin Pathol;1963;40; Larsen S.A., Pope V., et coll., A manual of Tests for Syphilis 9 th Edition ;1998;
7 UK Use By DE Verwendbar bis ES Fecha de caducidad IT Utilizzare entro FR Utiliser jusque S Utgångsdatum DK Holdbar til P Fecha de caducidad UK Manufacturer DE Hersteller ES Fabricante IT Fabbricante FR Fabricant S Tillverkat av DK Producent P Fabricante UK In Vitro Diagnostic Medical Device DE In Vitro Diagnostikum ES Producto sanitario para diagnóstico in vitro IT Dispositivo medico-diagnostico in vitro FR Dispositif médical de diagnostic in vitro S In vitro-diagnostik DK Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik P Producto sanitario para diagnóstico in vitro UK Temperature limitation DE Zulässiger Temperaturbereich ES Limite de temperatura IT Limiti di temperatura FR Limites de température S Förvaring i temperaturområde DK Temperaturbegrænsning P Limite de temperatura UK Consult Instructions for Use- DE Gebrauchsanweisung beachten ES Consulte las instrucciones de uso IT Consultare le istruzioni per l'uso FR Consulter les instructions d'utilisation S Se bruksanvisningen DK Se brugsanvisning P Consulte las instrucciones de uso UK Batch code DE Chargenbezeichnung ES Codigo de lote IT Codice del lotto FR Code du lot S Lot nummer DK Lotnummer P Codigo de lote CE MOD1 2003/10 33
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