I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H

Transkript

1 Instruction for Use PAPP-A ELISA Enzyme immunoassay for the in-vitro diagnostic quantitative determination of pregnancy associated plasma protein (PAPP-A) in human serum and plasma. RE C DRG Instruments GmbH, Germany 0197 I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1 EINLEITUNG Der PAPP-A ELISA wird zur quantitativen in-vitro-bestimmung des Pregnancy associated plasma Protein A (PAPP-A) in Serum und Plasma eingesetzt. PAPP-A wird in der sich entwickelnden Plazenta produziert. Die PAPP-A Konzentration im mütterlichen Blut steigt nach der 7. Schwangerschaftswoche schnell an. Die Bestimmung von PAPP-A im ersten Trimenon der Schwangerschaft ist als ein nützlicher Marker für das pränatale Screening auf Down Syndrom und anderer Aneuploidien beschrieben worden. Erniedrigte PAPP-A Konzentrationen konnten in Verbindung mit der Messung von freiem ß-HCG und der sonografischen Bestimmung der Nackentransparenz (NT) in den Schwangerschaftswochen bis zu 90 % der Schwangerschaften mit Down Syndrom erkennen (Referenz 7). Der PAPP-A ELISA ist für die Risikoabschätzung von Trisomie 21 (Down Syndrom) im ersten Trimenon der Schwangerschaft geeignet. Die Risikoabschätzung von Trisomie 21 und anderer Aneuploidien sollte nur in Verbindung mit zusätzlichen Testverfahren (z.b. freies ß-HCG und NT, s. oben) und einer speziellen Software, erfolgen. Gemäss der IVD Direktive 98/79/EG müssen sowohl die Software als auch die zusätzlichen Testverfahren für die Ermittlung des Trisomie 21 Risikos geeignet - und durch eine benannte Stelle (Notified body) entsprechend CE-zertifiziert sein (angezeigt durch die Angabe der Nummer der benannten Stelle auf dem CE Symbol). 2 TESTPRINZIP Der IBL PAPP-A ELISA ist ein Festphasen-Enzymimmunoassay, der auf der Sandwichtechnik basiert. Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem polyklonalen Antikörper beschichtet. Die Proben, die endogenes PAPP-A enthalten inkubieren zusammen mit einem Assaypuffer in den beschichteten Wells. Ungebundene Material wird durch Waschen der Wells entfernt. In einem zweiten Inkubationsschritt wird ein Sandwichkomplex mit Meerrettichperoxidase-konjugiertem polyklonalem Anti-PAPP-A-Antikörper gebildet. Anschließend wird die Substratlösung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt. Die Intensität der gebildeten Farbe ist proportional der PAPP-A-Konzentration in der Probe. Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen. 3 VORSICHTSMAßNAHMEN 1. Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet. 2. Alle Bestandteile dieses Testkits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, wurden mit FDA-geprüften Methoden auf HIV I/II, HbsAg und HCV getestet und als negativ bestätigt. Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie mögliche Gefahrenstoffe betrachtet werden. 3. Nur die gültige, im Testkit enthaltene, Arbeitsanleitung verwenden. 4. Das Mikrotiterplate enthält abbrechbare Streifen. Ungenutzte Wells müssen bei 2 C bis 8 C im verschlossenen Folienbeutel gelagert und im mit gelieferten Rahmen verwendet werden. 5. Das Pipettieren von Proben und Reagenzien muss so schnell wie möglich und in derselben Folge für jeden Schritt durchgeführt werden. 6. Verwenden Sie Reservoire nur für einzelne Reagenzien. Dies gilt besonders für die Substratsreservoire. Es kann sein, dass ein Reservoir welches zuvor für die konjugierte Lösung verwendet wurde, und nun zur Abgabe einer Substratslösung verwendet wird, die, Lösung färbt. Keine Reagenzien zurück in die Fläschchen geben, da es sonst zu einer kontamination der Reagenzien kommen kann. 7. Mischen Sie den Inhalt der Wells gründlich, um gute Testergebnisse sicherzustellen. Die Mikrowells nicht wiederverwenden. 8. Die Wells während des Tests nicht austrocknen lassen; die Reagenzien sofort nach dem waschen zugeben. 9. Die Reagenzien vor Testbeginn auf Raumtemperatur (21-26 C) bringen. Die Temperatur beeinflusst die Messung des Absorptionsvermögens im Assay. Die Werte der Patientenproben werden dadurch jedoch nicht beeinflusst. 10. Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimhäuten vermeiden. 11. In den Bereichen, in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden, nicht rauchen, essen oder Kosmetika verwenden. 12. Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg-Latexhandschuhe tragen. Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen führen. Vers / 19

3 13. Der Gebrauch sollte gemäß der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff- Sicherheitsrichtlinie erfolgen. 14. Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit-Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden. 15. Alle im Kit-Protokoll angegebenen Mengen müssen genau eingehalten werden. Optimale Ergebnisse können nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten-Lesegeräte erreicht werden. 16. Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen. Es wird empfohlen, keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden, auch nicht, wenn es sich um das gleiche Lot handelt. Die Kits können unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein, so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausfällt. 17. Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden, da sie 0.5 M H2SO4 enthält. Schwefelsäure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen. 18. Einige Reagenzien enthalten Proclin 300, BND und/oder MIT als Konservierungsmittel. Im Falle von Kontakt mit Augen oder Haut, sofort mit Wasser spülen. 19. TMB-Substrat hat eine Reizwirkung auf Haut und Schleimhaut. Im Falle von möglichem Kontakt waschen die Augen mit einem reichlichlich Wasser und die Haut mit Seife und reichlichlich Wasser waschen. Kontaminierte Gegenstände vor dem Wiedergebrauch waschen. Wenn die Substanz eingeatmet wurde, sofort an die frische Luft gehen. 20. Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien müssen gemäß den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gefährlicher Abfall behandelt werden. 21. Materialsicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma IBL International erhältlich. Die Materialsicherheitsdatenblätter entsprechen den Verordnungen der EU-Richtlinie 91/155 EC. 4 BESTANDTEILE DES KITS 4.1 Kitinhalt 1. Microtiterwells, 96 Wells, 12x8 Wells (einzeln brechbar); Mit anti-papp-a-antikörper (polyklonal) beschichtet. 2. Standard (Standard 0-5), 6 Fläschchen (lyophilisiert), je 0,15 ml; Konzentrationen: 0; 1; 2.5; 5.0; 15.0; 30.0 µg/ml Umrechnungsfaktor: 1 mu/ml = 4.5 mg/l Die PAPP-A Standards sind vergleichbar mit dem von NEQAS anerkannten Referenzmaterial für Down Syndrome Screening (U/L, IRP 76/610) Siehe Vorbereitung der Reagenzien. Enthält 0,015% BND und 0,010% MIT als Konservierungsstoff. 3. Control (low and high) (Kontrolle), 2 Fläschchen (lyophilisiert), je 0,15 ml; Kontrollwerte und bereiche entnehmen Sie bitte dem Fläschchenetikett oder dem QC-Datenblatt. Siehe Vorbereitung der Reagenzien. Enthält 0,015% BND und 0,010% MIT als Konservierungsstoff. 4. Assay Buffer (Assaypuffer), 1 Fläschchen, 25 ml, gebrauchsfertig; Enthält 0,015% BND und 0,010% MIT als Konservierungsstoff. 5. Enzyme Conjugate (Enzymkonjugat)11X konzentriert, 1 Fläschchen, 1,5 ml; Komplex, mit Meerrettichperoxidase konjugiert, siehe Vorbereitung der Reagenzien. Enthält 0,3% Proclin, 0,015% BND und 0,010% MIT als Konservierungsstoff. 6. Conjugate Diluent (Konjugatverdünnungsmedium), 1 Fläschchen, 14 ml, gebrauchsfertig. Enthält 0,3% Proclin, 0,015% BND und 0,010% MIT als Konservierungsstoff. 7. Substrate Solution (Substratlösung), 1 Fläschchen, 14 ml, gebrauchsfertig; Substratlösung TMB. 8. Stop Solution (Stopplösung), 1 Fläschchen, 14 ml, gebrauchsfertig; enthält 0,5M H 2 SO 4, Kontakt mit der Stopplösung vermeiden! Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen. 9. Wash Solution (Waschlösung), 1 Fläschchen, 30 ml, 40X konzentriert; Siehe Vorbereitung der Reagenzien. * BND = 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxane MIT = 2-methyl-2H-isothiazol-3-one Anmerkung: Zusätzlicher Standard 0 zur Probenverdünnung ist auf Anfrage erhältlich. Vers / 19

4 4.2 Nicht im Kit enthaltene aber erforderliche Geräte und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenlesegerät mit 450 ± 10 nm Filter). Kalibrierte variable Präzisions-Mikropipette Saugfähiges Papier Aqua dest. Timer Semilogarithmisches Millimeterpapier oder Software für die Datenauswertung 4.3 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die ungeöffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2-8 C ihre Reaktivität bis zum Verfallsdatum. Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden. Nach dem Öffnen sollten alle Reagenzien bei 2-8 C gelagert werden. Die Mikrotiterwells sollten bei 2-8 C gelagert werden. Der einmal geöffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgfältig wieder verschlossen werden. Unter den beschriebenen Lagerbedingungen behalten geöffnete Kits zwei Monate ihre Reaktivität. 4.4 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die benötigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden. Standards Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt der Standardfläschchen mit 150 µl destilliertem Wasser. Achtung: Bei 2-8 C sind die rekonstituierten Standards 2 Monate haltbar. Control Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt des Fläschchens mit 150 µl destilliertem Wasser und lassen Sie das Fläschchen mindestens 10 Minuten ruhen. Vor Gebrauch die Kontrolle mehrmals vorsichtig schütteln. Achtung: Bei 2-8 C ist die rekonstituierte Kontrolle 2 Monate haltbar. Wash Solution Die 40-fach konzentrierte Wash Solution (30 ml) mit 1170 ml destilliertem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 1200 ml verdünnen. Die verdünnte Waschlösung ist bei Raumtemperatur für 2 Wochen stabil. Enzyme Conjugate 30 Minuten vor Gebrauch 1.0 ml Enzyme Conjugate-Konzentrat mit 10 ml Conjugate Diluent vermischen. Achtung: Das Enzymkonjugat muß 30 Minuten vor Gebrauch frisch zubereitet werden und darf nicht länger als 24 Stunden gelagert werden. Wenn mehr als ein Testlauf durchgeführt wird, verdünnen Sie nur die Menge, die für jede Testdurchführung benötigt wird. 4.5 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gemäß den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen. Spezielle Informationen für dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt. 4.6 Beschädigte Testkits Im Falle einer starken Beschädigung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma IBL spätestens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden. Stark beschädigte Einzelkomponenten sollten nicht für den Testlauf verwendet werden. Sie müssen gelagert werden bis eine endgültige Lösung gefunden wurde. Danach sollten Sie gemäß den offiziellen Richtlinien entsorgt werden. 5 PROBENVORBEREITUNG Serum oder Plasma (EDTA-, Heparin- oder Zitratplasma) kann in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden. Lipämische, ikterische und/oder stark hämolysierte Proben sollten nicht verwendet werden. Achtung: Proben, die Natriumazid enthalten, sollten nicht verwendet werden. Vers / 19

5 5.1 Probenentnahme Serum: Blut durch Venenpunktion entnehmen (z.b. mit Sarstedt Monovette # ), gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen. Vor der Zentrifugation muss die Gerinnung vollständig abgeschlossen sein. Bei Patienten, die Antikoagulantien erhalten, kann die Gerinnungszeit länger dauern. Plasma: Die Blutentnahme erfolgt mit Röhrchen, die ein Antikoagulanz enthalten. Das Plasma wird als Überstand nach einer Zentrifugation gewonnen. (z.b f ür EDTA-Plasma Sarstedt Monovette roter Deckel - # ; für Heparinplasma Sarstedt Monovette oranger Deckel - # ; für Zitratplasma Sarstedt Monovette grüner Deckel - # ) 5.2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und können vor Testbeginn bis zu 5 Tage bei 2-8 C gelagert werden. EDTA-Plasma sollte bei Lagerung bei 2-8 C spätestens nach 48 Stunden gemessen werden. Für eine längere Aufbewahrung (bis zu 2 Monaten) sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden. Nur einmal einfrieren. Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden, ohne Schaumbildung. 5.3 Probenverdünnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration höher als der höchste Standard gefunden wird, kann diese Probe mit Standard 0 weiter verdünnt und nochmals bestimmt werden. Die Verdünnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden. Beispiel: a) Verdünnung 1:10: 10 µl Serum + 90 µl Standard 0 gründlich mischen) b) Verdünnung 1:100: 10 µl Verdünnung a) 1: µl Standard 0 (gründlich mischen). 6 TESTDURCHFÜHRUNG 6.1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben müssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchgemischt werden. Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden. Wenn die Testdurchführung einmal begonnen wurde, muss sie ohne Unterbrechung zu Ende geführt werden. Für jeden Standard, jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden, um Verschleppungen zu vermeiden. Die Optische Dichte ist abhängig von Inkubationszeit und Temperatur. Deshalb ist es notwendig, vor Beginn der Testdurchführung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen, die Deckel der Fläschchen zu öffnen, alle benötigten Wells in den Halter zu setzen. Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten für jeden Pipettiervorgang ohne Pausen. Als generelle Regel gilt, dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist. Vers / 19

6 6.2 Testdurchführung Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten. Alle Standards, Proben und Kontrollen sollten gleichzeitig in Doppelbestimmung durchgeführt werden, so dass alle Testkonditionen gleich sind. 1. Die benötigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen. 2. Je 10 µl Standards, Controls und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben µl Assay Buffer in jedes Well geben. Für 10 Sekunden gut schütteln. Es ist sehr wichtig, in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. 5. Den Inhalt der Wells kräftig ausschütten. Alle Wells 3 Mal mit 400 µl Wash Solution waschen. Verbleibende Wassertropfen durch Ausklopfen der Wells auf saugfähigem Papier entfernen. Achtung: Die Sensitivität und Präzision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchführung des Waschschrittes! µl verdünntes Enzyme Conjugate (siehe Vorbereitung der Reagenzien ) in jedes Well geben Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. 8. Den Inhalt der Wells kräftig ausschütteln. Wells 3mal mit verdünnter Wash Solution waschen. Verbleibende Flüssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugfähigem Papier entfernen µl Substrate Solution in jedes Well geben Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. 11. Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 50 µl Stop Solution in jedes Well abstoppen. 12. Die Optische Dichte bei 450±10 nm mit einem Mikrotiterplatten-Lesegerät innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen. 6.3 Ergebnisermittlung 1. Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte (OD) für jedes Set von Standards, Controls und Patientenproben bestimmen. 2. Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration, wobei der OD-Wert auf der vertikalen (Y) Achse und die Konzentration auf der horizontalen (X) Achse eingetragen wird. 3. Unter Verwendung der mittleren OD wird für jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt. 4. Automatische Methode: Die in der Arbeitsanleitung ermittelten Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung (4PL, 4 Parameter Logistics, 4 Parameter Rodbard) bestimmt. Andere Auswertungsfunktionen können leicht abweichende Werte ergeben. 5. Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden. Proben, die eine höhere Konzentration als die des höchsten Standards enthalten, müssen verdünnt werden. Dieser Verdünnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Beispiel für eine Standardkurve Nachfolgend wird ein typisches Beispiel für eine Standardkurve mit dem IBL ELISA gezeigt. Diese Werte sollten nicht zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden. Standard Optische Dichte (450 nm) Standard 0 (0 µg/ml) 0.18 Standard 1 (1 µg/ml) 0.38 Standard 2 (2.5 µg/ml) 0.56 Standard 3 (5 µg/ml) 0.83 Standard 4 (15 µg/ml) 1.44 Standard 5 (30 µg/ml) 1.80 Vers / 19

7 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen, dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt. 7.1 Schwangere Frauen im 1. Trimester Die Proben von 238 schwangeren Frauen im 1. Trimester wurden mit dem IBL PAPP-A ELISA gemessen und die Ergebnisse durch Vergleich mit einer Gauss schen Normalverteilung validiert. Unter Berücksichtigung des Gewichtes und des Gestationstages ergibt sich folgende Regressionsfunktion: Median (f) PAPP-A = EXP ( * Gestationstag * Körpergewicht). Unter ausschliesslicher Berücksichtigung des Gestationstages (Körpergewicht nicht berücksichtigt) ergibt sich für die gleichen 238 Seren die folgende gewichtsunabhängige Regressionsfunktion: Median (sst) PAPP-A = EXP ( * Gestationstag). In der folgenden Grafik und Tabelle wurden die Funktions-Mediane (Median (f) für die abgeschlossenen Schangerschaftswochen 8 bis 13 für drei Körpergewichte (50 kg, 65kg (durchschnittliches Körpergewicht) und 100 kg) berechnet. Zum Vergleich wurden die Mediane zusätzlich mit der gewichtsunabhängigen Regressionsfunktion (Median (sst)) berechnet und manuell bestimmt (Wochen-Median). Abgeschlossene Schwangerschaftswoche Gestationstag Median(sst) [µg/ml] gewichtsunabhängig Median (f) [µg/ml] 50 kg Gewicht Median (f) [µg/ml] 65 kg Gewicht Median (f) [µg/ml] 100 kg Gewicht Wochen- Median [µg/ml] Vers / 19

8 In unterschiedlichen Populationen und Laboratorien können leicht abweichende Mediane auftreten. Jedes Labor sollte daher aus dem eigenem Patientenkollektiv eigene Mediane bestimmen und diese fortlaufend aktualisieren. Die in der Tabelle angegebenen Werte sowie die Regressionsgleichungen sollten nur als Anhaltspunkt verwendet werden. Die Berechnung von Medianen oder Regressionsgleichungen sollte über die verwendete Risikoermittlungssoftware erfolgen. Für den IBL PAPP-A ELISA ermittelte Mediane können nicht mit PAPP-A Assays anderer Hersteller verwendet werden. Mediane, die für Assays anderer Hersteller ermittelt wurden, können nicht für den IBL PAPP-A ELISA verwendet werden Einsatz für die Risikoeinschätzung des Down Syndroms Für die Risikoberechnung im pränatalen Screening werden die PAPP-A Konzentrationen als MOM-Werte (multiple of medians) angegeben: MOM = gemessene PAPP-A Konzentration / Median PAPP-A. Bei Schwangerschaften mit Down Syndrom steigen die Mediane der MOMs während des ersten Trimenons stetig an und sind im zweiten Trimenon nicht mehr unterscheidbar von normalen Schwangerschaften (Referenz 6, Details ind in der nachfolgenden Tabelle angegeben). PAPP-A muss daher während des ersten Trimenons bestimmt werden. Abgeschlossene Schwangerschaftswoche Median der MOMs in Schwangerschaften mit Down Syndrom Werte sind Referenz 6 entnommen Neben der Bestimmung des PAPP-A müssen zur Risikoermittlung von Trisomie 21 weitere Parameter wie freies βhcg und die Nackentransparenz (NT) für das 1. Trimester und/oder AFP, freies Estriol und hcg im 2. Trimester bestimmt werden. Der Einsatz dieser Parameter für die Risikoberechnung erfordert eine spezielle Software. Gemäss der IVD Direktive 98/79/EG müssen sowohl die Software als auch die oben genannten zusätzlichen Testverfahren für die Ermittlung des Trisomie 21 Risikos geignet - und durch eine benannte Stelle (Notified body) entsprechend CE-zertifiziert sein (angezeigt durch die Angabe der Nummer der benannten Stelle auf dem CE Symbol). Die Software muss die Berechnung von Medianen aus eigenen Messwerten unterstützen. Bei der Berechnung des Trisomie 21-Risikos mit der CE-konformen Software müssen unbedingt weitere Faktoren wie Alter der Frau, Gewicht, ethnische Zugehörigkeit und Raucherin/Nichtraucherin Berücksichtigung finden. Da sich die Konzentrationen der für den Triple-Test eingesetzten Serumparameter während des Untersuchungszeitraumes ändern, kann eine Überschätzung des Schwangerschaftsalters (Schwangerschaftsdauer) zu einem zu hoch eingeschätzen Risiko ( Falsch Positiv ) führen. Um diese Fehlerquelle zu reduzieren, ist es wichtig, das Gestationsalter so präzise wie möglich zu bestimmen. Die Bestimmung des Gestationsalters aus der letzten Regelblutung ist mit einem hohen Variationsrisiko behaftet. Für eine möglichst genaue Bestimmung des Gestationsalters wird die sonographische Bestimmung der Scheitel-Steiss Länge (SSL) oder des Biparietaldurchmessers (BPD) empfohlen. Die Bestimmung von PAPP-A im Zuge eines Pränatalscreenings erlaubt lediglich die Ermittlung eines Risikos für Trisomie 21. Der Nachweis von Trisomie 21 kann nur über genetische Methoden erfolgen. Vers / 19

9 8 QUALITÄTS-KONTROLLE Es wird empfohlen, die Kontrollproben gemäß den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen. Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag-zu-Tag Überprüfung der Ergebnisse erzielt. Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden. Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC-Labors sind im QC-Zertifikat, das dem Kit beiliegt, aufgeführt. Die im QC-Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden. Es wird ebenfalls empfohlen, an nationalen oder internationalen Qualitätssicherungs-Programmen teilzunehmen, um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern. Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll-Werten und Trends angewendet werden. Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials übereinstimmen, sollten die Patientenergebnisse als ungültig eingestuft werden. In diesem Fall überprüfen Sie bitte die folgenden Bereiche: Pipetten und Zeitnehmer, Photometer, Verfallsdatum der Reagenzien, Lagerungs- und Inkubationsbedingungen, Absaug- und Waschmethode. Sollten Sie nach Überprüfung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben, setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma IBL in Verbindung. 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 9.1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen µg/ml 30 µg/ml. 9.2 Spezifität der Antikörper (Kreuzreaktivität) Der für den IBL PAPP-A ELISA eingesetzte Antikörper ist spezifisch für humanes PAPP-A. Es gibt keine Kreuzreaktion mit verschiedenen anderen Spezies. Es zeigte sich keine Reaktion mit normalem menschlichen Plasma. 9.3 Sensitivität Die analytische Sensitivität, definiert als Mittelwert plus der zweifachen Standardabweichung des Standards 0 (n = 20), beträgt µg/ml. Die Daten zu: 9.4 Präzision 9.5 Wiederfindung 9.6 Linearität entnehmen Sie bitte der ausführlichen englischen Arbeitsanleitung. 10 GRENZEN DES TESTS Jede unsachgemäße Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests können die Ergebnisse beeinflussen Interferenzen Hämoglobin (bis zu 4 mg/ml), Bilirubin (bis zu 0.5 mg/ml) und Triglyceride (bis zu 30 mg/ml) haben keinen Einfluss auf das Testergebnis Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe (Medikamente) bekannt geworden, deren Einnahme die Messung des PAPP-A-Gehaltes der Probe beeinflussen würde High-Dose-Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt bei Proben mit bis zu 300 µg/ml PAPP-A nicht auf. Vers / 19

10 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 11.1 Zuverlässigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gemäß der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden. Darüber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP (Good Laboratory Practice) oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten. Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien. Es ist sehr wichtig, bei der Testdurchführung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur Überprüfung der Genauigkeit und Präzision mitlaufen zu lassen. Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen, und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen für diesen Assay erfüllen. Wenn Sie bezüglich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben, setzen Sie sich bitte mit der Firma IBL in Verbindung Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen, selbst dann nicht, wenn alle Testergebnisse mit den in genannten Voraussetzungen übereinstimmen. Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten. Nur in Fällen, in denen die Laborergebnisse in akzeptabler Übereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen, sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden. Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage für die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen Haftung Jegliche Veränderungen des Testkits und/oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen, können die gewünschten Ergebnisse und die Gültigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen. Solche Veränderungen und/oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzansprüche zur Folge. Reklamationen, die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gemäß Punkt erfolgen, sind ebenfalls abzuweisen. Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschränkt. Jegliche Schäden, die während des Transports am Kit entstanden sind, unterliegen nicht der Haftung des Herstellers. 12 REFERENZEN / LITERATUR 1. Spencer K., Scouter V., Tul N., Snijders R., Nicolaides K.H. Ultrasound Obset Gynecol. 1999; 13: Sancken U. Deutsches Ärzteblatt 97 3.März 2000, Heft 9:A532-A Bayes-Genis A., Conover C.A., Overgaard M.T., et al. N. Engl. J. Med., Vol.345, No.14, 2001: Schaeffer H.-J., Sancken U., Eiben B., Opper C., Jung A. Fetal Diagn Ther. 2001; 16: Qiu-Ping Q., Christiansen M., Oxvig C., Pettersson K., Sottrup-Jensen L., Koch C., Norgaard-Pedersen B. Clinical Chemistry 43:12, 1997; Wald NJ, Rodeck C, Hackshaw AK, Walters J, Chitty L, Mackinson AM. Health Technol Assess. 2003; 7(11). First and second trimester antenatal screening for Down s Syndrom: the results of the Serum, Urine and Ultrasound Screening Study (SURUSS). 7. Bindra R, Heath V, Liao A, Spencer K, Nicolaides KH. Ultrasound Obstet Gynecol Sep;20(3): One-stop clinic for assessment of risk for trisomy 21 at weeks: a prospective study of pregnancies. Vers / 19

11 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International B.V. Zutphenseweg 55, 7418 AH Deventer, The Netherlands IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer. Symbols Version 3.5 /