Celikey (anti-ttg) Gliadin DP
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- Katrin Fürst
- vor 8 Jahren
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1 Celikey (anti-ttg) Gliadin DP
2 Das EliA System Bequem, sicher und zeitsparend Vollständig automatisiert (echter Walk-away-Modus, Übernacht-Läufe) Automatische Probenvorverdünnung Leichte Handhabung und benutzerfreundlicher Ablauf Bequeme Dateneingabe Einfaches Management des Instruments mit maßgefertigter Software Barcode-Lesegerät (optional bei Phadia 100) Protokolle, QC- und Rohdaten leicht zugänglich Optionaler Anschluss an die Laborsoftware Detailliertes QC-Management Kosteneffizient und flexibel Autoimmunität und Allergie auf demselben Instrument Keine Sammlung von Proben nötig Kosteneffiziente Abarbeitung auch kleiner Serienlängen Einmonatige Kalibrierung, Parameter-unabhängig Primär- und Sekundärröhrchen einsetzbar Serum oder Plasma verwendbar Mehrere Phadia Instrumente können verbunden werden Eine Verstärkung des Services für Ihr Labor und die behandelnden Ärzte EliA auf dem Phadia 250 hohe Kapazität für mittlere bis große Labors Ideal für Labors mit Autoimmuntests pro Tag Vollautomatischer Random Access-Betrieb Anbindung an Labor-EDV Positive Identifizierung und Rückverfolgbarkeit von Proben und Reagenzien Alle Reagenzien und bis zu Tests können on-board gelagert werden Bestandsmanager EliA auf dem Phadia 100 maximale Flexibilität für kleine bis mittlere Labors Bis zu 46 Bestimmungen in weniger als 2,5 Stunden Übernachtläufe möglich Mehrere Methoden in einem Lauf Als Einzelgerät einsetzbar oder als Cluster von bis zu 5 Geräten Anbindung an Labor-EDV möglich 2
3 EliA Celikey und EliA Gliadin DP Assays sicherere Diagnose von Zöliakie Quantitative Bestimmung von IgA- oder IgG-Antikörpern gegen Gewebstransglutaminase (ttg) und deamidierte Gliadinpeptide, der klinisch relevanten Antikörper bei der Diagnose von Zöliakie Hohe klinische Aussagekraft Hohe Spezifität der EliA Celikey und EliA Gliadin DP Assays erspart unnötige Darmbiopsien Hohe Sensitivität der EliA Celikey und EliA Gliadin DP Assays unterstützt die Diagnose Verwendung von rekombinantem Antigen ttg für EliA Celikey minimiert falsch positive Ergebnisse Verwendung von deamidierten Gliadinpeptiden für EliA Gliadin DP verbessert deutlich die klinische Aussagekraft EliA Celikey und Endomysium-Antikörpertest (EMA) sind gleichwertig Hohe technische Performance Geringe Varianzen und hohe Reproduzierbarkeit gewährleisten konstante Ergebnisse Hohe Chargenkonstanz durch validierte Produktionsverfahren Quantitative Ergebnisse basierend auf einer Sechs-Punkt-Standardkurve Durch große Chargen weniger Revalidierungen erforderlich Antigene auf dem neuesten Stand der Technik Humanes rekombinantes Antigen ttg für EliA Celikey Assays garantiert hohe Sensitivität und Spezifität Im eukaryontischen Baculovirus-/Insektenzellsystem produziertes ttg-antigen Synthetische deamidierte Gliadinpeptide Nachgewiesene Qualität EliA Celikey zeigt die gleiche klinische Performance wie der etablierte Celikey Test im Varelisa Format In vielen unabhängigen Veröffentlichungen wird Celikey favorisiert Bei zahlreichen bedeutenden klinischen Studien wird auf Celikey vertraut Celikey gilt als der Standard unter ttg-antikörpertests Automation Vollautomatisierte ttg- und deamidierte Gliadinpeptid-Antikörpertestung Zwei Phadia Instrumente verfügbar für geringen bis hohen Probendurchsatz IgA- und IgG-Bestimmung in einem Lauf Gespeicherte Standardkurve ermöglicht kosteneffiziente Läufe auch bei geringer Probenzahl 3
4 Zöliakie tritt häufiger auf als vermutet. Zöliakie Die Zöliakie (Glutensensitive Enteropathie, Einheimische Sprue) ist durch eine lebenslange Intoleranz gegenüber Gluten aus Weizen, Gerste oder Roggen gekennzeichnet. Die Krankheit ist zwar unheilbar, die Gluten-freie Ernährung stellt jedoch eine effektive Behandlung dar. Zum klassischen Erscheinungsbild der Erkrankung gehören Magen-Darm-Beschwerden wie Diarrhöe, Bauchschmerzen oder Blähungen. Ein hoher Anteil der Zöliakie patienten zeigt allerdings atypische Symptome wie allgemeine Schwäche, Menstruationsstörungen, Anämie, Miss launigkeit bis hin zur Depression. Alle diese Symptome sind die Folge pathogener Veränderungen der Dünndarmschleimhaut (Zottenatrophie), die zur Malabsorption der Nährstoffe führt. Bei der großen Mehrheit der Patienten wird eine Zöliakie spät oder nie festgestellt. Daher bilden die bereits diagnostizierten Patienten lediglich die Spitze des Eisbergs. Diese Situation lässt sich dadurch erklären, dass etwa die Hälfte der Zöliakiepatienten nicht die typischen Magen-Darm-Symptome zeigt, sondern vielmehr eine Oligosymptomatik im Vordergrund steht. Daneben kennt man so genannte latente oder silente Formen der Zöliakie, die eine eindeutige Diagnose erschweren. Die Prävalenz dieser Erkrankung wurde lange Zeit unterschätzt. Neuere Screening-Studien zeigen, dass es sich bei der Zöliakie um eine weit verbreitete Krankheit handelt, die etwa 1 % der Bevölkerung betrifft. Eine frühe Diagnose bei Kindern ist überaus wichtig, da die Krankheit zu einer Wachstums- und Entwicklungsverzögerung führen kann. Die Zöliakie stellt allerdings keine reine Kinderkrankheit dar, sondern betrifft auch Erwachsene. Die Lebensqualität ist erheblich verringert, es besteht ein erhöhtes Risiko hinsichtlich Osteoporose, Autoimmun erkrankungen oder sogar Malignität. Auch wenn Bevölkerungs-Screenings auf eine Zöliakie mit Hilfe serologischer Tests noch ein kontroverses Thema darstellen, wird die Untersuchung von Risikogruppen, wie z. B. Verwandte ersten Grades von Zöliakiepatienten, Patienten mit Osteoporose, Anämie, IgA-Mangel, Diabetes Typ I, Thyreoiditis oder anderen Autoimmunerkrankungen stark empfohlen. Die Diagnose von Zöliakie besteht aus drei Teilen: Serologie, Dünndarmbiopsie und Remission der Krankheit als Folge der Einhaltung einer Gluten-freien Diät. Bei den verfügbaren serologischen Tests werden Antikörper gegen Gliadin und Gewebstransglutaminase (ttg) festgestellt. Bei positivem Ergebnis folgt normalerweise eine Darmbiopsie. Humanes rekombinantes ttg und deamidierte Gliadinpeptide garantieren eine zuverlässige Diagnostik. Die Antigene Das Antigen, das zuerst mit Zöliakie in Verbindung gebracht wurde, ist das Gliadin, ein alkohollöslicher Bestandteil von Gluten, dem sogenannten Weizenklebereiweiß. Die Immunreaktion gegenüber Gliadin ist entscheidend für die Entwicklung der Zöliakie. Neuere Forschungsergebnisse zeigen, dass Gliadinpeptide, die bei Zöliakiepatienten die Darmschleimhaut passieren, von der Gewebstransglutaminase (ttg) deamidiert werden. Dadurch werden die Peptide immunogener als unprozessierte Gliadinpeptide und spezifischere Ziele für die in Zöliakiepatienten gebildeten Gliadin-Antikörper. Der EliA Gliadin DP Test verwendet die relevanten synthetischen deamidierten Gliadinpeptide, denen die Literatur eine exzellente Spezifität bescheinigt. Während der Deamidierung der Gliadinpeptide durch die Gewebstransglutaminase (ttg) wird ein Komplex gebildet, der nachfolgend nicht nur die Antikörperproduktion gegen Gliadinpeptide sondern auch gegen ttg anstößt. Bei der Gewebstransglutaminase handelt es sich um ein Ca 2+ -abhängiges Enzym mit zahlreichen Funktionen, z. B. Katalyse der Proteinvernetzung und Einführung von Aminen in Proteine. Im Jahr 1997 wurde ttg als Antigen der Endomysium-Antikörper (EMA) identifiziert, die mit Hilfe der indirekten Immunfluoreszenz auf Ösophagusschnitten festgestellt werden. Aus diesem Grund können bei Auswahl des richtigen Anti-tTG-Tests EMA und ttg als äquivalent betrachtet werden. Um einen hoch empfindlichen und spezifischen Immunoassay zu erhalten, dessen Ergebnisse identisch mit denen des EMA-Tests sind, muss das Antigen ttg bestimmte Anforderungen erfüllen. 4
5 Es muss von hoher Reinheit sein und dieselbe korrekte dreidimensionale Struktur aufweisen wie das EMA-Antigen. Wir erreichen dies, indem wir die in unseren Celikey Assays verwendete humane rekombinante ttg im eukaryontischen Baculovirus-/Insektenzellsystem produzieren. Dieses Verfahren garantiert ein sehr reines Antigen mit der richtigen Struktur und führt zu Assays mit höchstmöglicher klinischer Sensitivität und Spezifität. Zahlreiche unabhängige Veröffentlichungen legen die heraus ragende klinische Performance der Celikey Assays sowie ihre ausgezeichnete Übereinstimmung mit dem EMA-Test dar. Hohe klinische Aussagekraft Anders als bei anderen Autoimmunerkrankungen stehen bei der Zöliakie sehr empfindliche und spezifische serologische Marker zur Verfügung. Eine einfache Blutuntersuchung kann eine Zöliakie mit nahezu 100 %iger Sicherheit praktisch ausschließen oder bestätigen. Aus diesem Grund können diese Tests auch zu Reihenuntersuchungen (Screenings) von Kindern und von Risikogruppen, z. B. Verwandte ersten Grades von Zöliakiepatienten, Patienten mit Osteoporose, Anämie, IgA-Mangel, Diabetes Typ I, Thyreoiditis oder anderen Autoimmun erkrankungen eingesetzt werden. Da ein positives Ergebnis eines Screening-Tests normalerweise eine Biopsie zur Bestätigung nach sich zieht, ist eine hohe Spezifität der Tests auf Zöliakie besonders wichtig. Aufgrund der Prävalenz der Zöliakie von ungefähr 1 % innerhalb einer Screening-Population führt selbst eine leicht verminderte Spezifität zu einem dramatischen Anstieg an unnötigen Darmbiopsien. Dies wird anhand von zwei Beispielen mit einer Screening-Population von Personen deutlich (Abbildung 1): Hohe Spezifität erspart viele unnötige Biopsien. Screening-Population: Personen Anzahl falsch Positive Anti-tTG Assay 1 Anti-tTG Assay 2 Abbildung 1: Auswirkungen der unterschiedlichen Spezifität von Anti-tTG- Assays auf die Anzahl der falsch positiven Ergebnisse bei einer Screening-Population von Patienten. Der Assay mit der schlechteren Spezifität führte zur fünffachen Anzahl an Biopsien von Nicht- Zöliakiepatienten d innerhalb einer Screening-Population. Die meisten Biopsien wären dabei durch die Verwendung des Assays mit der höheren Spezifität zu vermeiden gewesen. Alle EliA Zöliakietests, EliA Celikey und EliA Gliadin DP, weisen höchste Spezifität auf und sind somit eine wertvolle Hilfe für die Diagnoseentscheidung. Prozent Positive EliA Celikey der Standard bei Anti-tTG-Tests Viele internationale Studien verlassen sich auf Celikey, um Zöliakiepatienten mit hoher Genauigkeit zu identifizieren. Zöliakiepatienten In der großen von der EU Kontrollen unterstützten multizentrischen PreventCD- Studie wurde die Entscheidung für eine Gastroskopie aufgrund des Celikey Ergebnisses getroffen ( Bis jetzt wurden mehr als 90 unabhängige Studien publiziert, die Celikey eingesetzt haben. Dies illustriert die hohe Aussagekraft des Celikey anti-ttg Tests. EliA Celikey zeigt die gleiche Performance wie der gut etablierte Celikey Test im Varelisa Format. Die Übereinstimmung beider Celikey Tests wurde durch Alessio et al. (2004) bestätigt. Deshalb können die mit den Celikey Tests im Varelisa Format erzielten Ergebnisse ohne weiteres auf die entsprechenden EliA Tests übertragen werden. Viele internationale Studien verlassen sich auf Celikey. 5
6 Celikey IgA identifiziert Zöliakiepatienten und verhindert falsch positive Ergebnisse. Celikey und EMA-Test sind gleichwertig. Aufgrund ihrer wachsenden Relevanz für die Diagnose der Zöliakie sind klinische Sensitivität und Spezifität bei einem Anti-tTG-IgA-Assay von großer Bedeutung. Im Rahmen einer extern durchgeführten klinischen Studie wurden 208 Zöliakiepatienten und 157 Kontrollpatienten mit negativer Diagnose bezüglich Zöliakie aber anderen gastrointestinalen Symptomen untersucht (Bürgin-Wolff et al., 2002). Dabei wurden Celikey ausgezeichnete Werte bescheinigt (Tabelle 1). Anzahl falsch Positive 208 Zöliakiepatienten, 157 Kontrollen Celikey Sensitivität 96,2 % Spezifität 99,4 % Tabelle 1: Positiver Vorhersagewert 99,5 % Klinische Sensitivität, Spezifität, positiver Vorhersagewert (PPV), negativer Negativer Vorhersagewert Screening-Population: 95,1 % Personen Vorhersagewert (NPV) und Effizienz von Effizienz 97,5 % Celikey (aus Bürgin-Wolff et al., 2002). Von einem Anti-tTG-Test der Spitzenklasse können Sie eine gute Korrelation zum Endomysium- Antikörpertest (EMA) erwarten. Der auf indirekter Immunfluoreszenz basierende EMA gilt nach wie vor als der Goldstandard unter den serologischen Zöliakietests. Das arbeitsintensive, subjektive und teure Immunfluoreszenzverfahren kann durch Celikey nun kosteneffizient und ohne Verlust von diagnostischer Genauigkeit Anti-tTG Assay ersetzt 1 Anti-tTG Assay 2 werden. Abbildung 2 veranschaulicht, dass Celikey hinsichtlich der klinischen Performance eine hervorragende Übereinstimmung von 99 % mit EMA erzielt (Bürgin- Wolff et al., 2002). d Prozent Positive Zöliakiepatienten Kontrollen Abbildung 2: Vergleich von EMA und Celikey in einer Untersuchungs population von 208 Biopsie-positiven Zöliakie patienten und 157 Biopsienegativen Krankheits kontrollen (Daten aus Bürgin-Wolff et al., 2002). Diese Daten wurden auch im Rahmen einer Screening-Untersuchung von Schulkindern bestätigt. Bei von Ergebnissen (99,9 %) war eine Übereinstimmung zwischen EMA und Celikey zu verzeichnen (Mäki et al., 2003). EliA Gliadin DP ist ebenso verlässlich wie EliA Celikey. EliA Gliadin DP die ideale Ergänzung zu EliA Celikey Mit synthetischen deamidierten Gliadinpeptiden als Antigen erweist sich der EliA Gliadin DP Test als sehr Krankheits-spezifisch und hilft unnötige Biopsien zu vermeiden. Dies wurde anhand einer Studie mit einem klinisch gut charakterisierten Serenkollektiv gezeigt, die 98 Seren von Patienten mit Biopsie-bestätigter Zöliakie (Marsh III), 102 Seren von Patienten bei denen Zöliakie anhand der Biopsie ausgeschlossen wurde (Marsh 0 und I) und 146 Kontroll-Seren von Patienten mit anderen Krankheiten (50 mit Morbus Crohn, 42 mit Colitis ulcerosa, 54 mit Infektionen) eingeschlossen hatte. Die Sensitivität bei dieser Studie war für alle Tests vergleichsweise niedrig, was auf die besondere Serenauswahl zurückzuführen ist. Der neue EliA Gliadin DP Test zeigte die höchste Spezifität aller deamidierten Gliadinpeptidtests (DGP), die in die Studie eingeschlossen waren (Tabelle 2). Nun kann man sich auch auf ein einzeln positives IgG-Ergebnis zur Zöliakiediagnose verlassen. EliA Gliadin DP IgA zeigt sich ähnlich leistungsfähig wie EliA Celikey IgA. Die niedrigere Sensitivität von EliA Celikey IgG ist für alle anti-ttg IgG-Tests bekannt und liegt daran, dass Serumproben mit normalen Gesamt-IgA getestet wurden. In IgA-defizienten Patienten hingegen ist der EliA Celikey IgG-Test sehr sensitiv, wie von Korponay-Szabó et al. (2003) gezeigt. 6
7 EliA Gliadin DP IgA DGP IgA Hersteller 1 DGP IgA Hersteller 2 EliA Celikey IgA Sensitivität in % 82,7 86,7 85,7 83,7 Spezifität in % 98,4 97,6 95,1 98,9 EliA Gliadin DP IgG DGP IgG Hersteller 1 DGP IgG Hersteller 2 EliA Celikey IgG Sensitivität in % 87,8 85,7 90,8 38,3 Spezifität in % 98,4 98,0 95,5 98,8 Tabelle 2: Klinische Sensitivität und Spezifität von EliA Gliadin DP im Vergleich zu anderen DGP-Tests und EliA Celikey. Tests, die gereinigtes Weizengliadin als Antigen verwenden, zeigen bei Kleinkindern eine höhere Sensitivität als anti-ttg-tests (Lagerqvist et al. 2008). Eine Studie mit 122 Seren von Kleinkindern mit Biopsie-bestätigter Zöliakie konnte dies auch für die EliA Gliadin DP Tests bestätigen (Tabelle 3). Interessanterweise ist der EliA Gliadin DP IgA-Test in dieser Patientengruppe noch sensitiver als der IgG-Test. Somit schließt der EliA Gliadin DP Test die Diagnoselücke, die der ttg IgA-Test offen lässt. EliA Gliadin DP ist bei Kleinkindern sensitiver. Sensitivität in % n Alter EliA Gliadin DP IgA EliA Gliadin DP IgG EliA Celikey IgA 29 < 12 Monate 100,0 96,6 72, Monate 98,5 95,6 92, Monate 100,0 100,0 100,0 122 Alle Kinder 97,5 96,7 86,1 Tabelle 3: Klinische Sensitivität von EliA Gliadin DP im Vergleich zu EliA Celikey IgA bei Kleinkindern unter 2 Jahren mit Zöliakie. EliA Celikey und EliA Gliadin DP die perfekte Kombination Jede Kombination der EliA Gliadin DP Tests mit EliA Celikey IgA steigert die Sensitivität wesentlich bei gleichbleibender hoher Spezifität (Tabelle 4). Eine Kombination von drei Tests zeigt die höchste Sensitivität und ist in der Lage alle Patientengruppen zu identifizieren: Kleinkinder, Erwachsene und Patienten mit IgA-Mangel. Das ist ein überzeugender Grund, EliA Gliadin DP IgA, EliA Gliadin DP IgG und EliA Celikey IgA parallel zu testen. Eine Kombination der EliA Zöliakietests findet noch mehr Zöliakiepatienten. 1 EliA Gliadin DP IgA 2 EliA Gliadin DP IgG 3 EliA Celikey IgA Sensitivität in % 82,7 87,8 83,7 92,9 Spezifität in % 98,4 98,4 98,9 96,8 1/2/3 kombiniert Tabelle 4: Klinische Sensitivität und Spezifität von EliA Gliadin DP IgA, EliA Gliadin DP IgG und EliA Celikey IgA und einer Kombination aller drei Tests. Literatur Alessio MG et al Poster presented at the 4th International Congress on Autoimmunity in Budapest, November 2004 Bürgin-Wolff A et al. 2002, Scand J Gastroenterol 37: Korponay-Szabó IR et al. 2003, Gut 52: Lagerqvist C et al. 2008, J Pediatr Gastroenterol Nutr 47 (4): Mäki M et al. 2003, N Engl J Med 348:
8 Technische Daten Produkt Antigene Kalibration Cut-off / Messbereich EliA Celikey IgA (ttg IgA) EliA Celikey IgG (ttg IgG) EliA Gliadin DP IgA EliA Gliadin DP IgG EliA Celikey Tests: humane rekombinante Gewebstransglutaminase (ttg), hergestellt im Baculovirus/Insektenzellsystem EliA Gliadin DP Tests: deamidierte Gliadinpeptide Sechs-Punkt-Standardkurve; Ergebnisse in U/ml negativ grenzwertig positiv Messbereich EliA Celikey IgA < 7 U/ml 7 10 U/ml > 10 U/ml 0,1 128 U/ml EliA Celikey IgG < 7 U/ml 7 10 U/ml > 10 U/ml 0,5 600 U/ml EliA Gliadin DP IgA < 7 U/ml 7 10 U/ml > 10 U/ml 0,1 142 U/ml EliA Gliadin DP IgG < 7 U/ml 7 10 U/ml > 10 U/ml 0,4 302 U/ml Verdünnung EliA Celikey IgA, EliA Celikey IgG, EliA Gliadin DP IgG: 1:100 EliA Gliadin DP IgA: 1:50 Probenmaterial EliA Celikey IgA, IgG: Serum, Plasma (EDTA, Citrat) EliA Gliadin DP IgA, IgG: Serum, Plasma (EDTA, Citrat, Heparin) Normalverteilung EliA Celikey IgA 3,2 / 7,4 (95 % / 99 % Percentile) EliA Celikey IgG 2,6 / 4,2 EliA Gliadin DP IgA 3,5 / 10,4 EliA Gliadin DP IgG 3,7 / 14,2 Reproduzierbarkeit Intra-Assay-Varianz 1,2 % 5,2 % Inter-Assay-Varianz 1,6 % 6,9 % Bestellinformationen Packungsgröße Artikelnummer EliA Celikey IgA ttg IgA-Antikörperassay 4 x 12 Bestimmungen EliA Celikey IgG ttg IgG-Antikörperassay 2 x 12 Bestimmungen EliA Gliadin DP IgA 4 x 12 Bestimmungen EliA Gliadin DP IgG 4 x 12 Bestimmungen Phadia Austria GmbH Donau-City-Str. 1 A-1220 Wien Tel. +43 (0)1 / Fax +43 (0)1 / Phadia AG Sennweidstr. 46 CH-6312 Steinhausen Tel. +41 (0) 43 / Fax +41 (0) 43 / phadia.ch@phadia.com Phadia GmbH Munzinger Str. 7 D Freiburg Tel. +49 (0)7 61/ Fax +49 (0)7 61/ info@phadia.com / 02 12/2009
Das EliA System. nn Protokolle, QC- und Rohdaten leicht zugänglich nn Optionaler Anschluss an die Laborsoftware nn Detailliertes QC-Management
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