Validierung der Flüssigkulturmedien für die mikrobiologische Kontrolle gemäß Ph. Eur
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- Busso Harry Bach
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1 Validierung der Flüssigkulturmedien für die mikrobiologische Kontrolle gemäß Ph. Eur PD Dr. Karin Janetzko Institut für Transfusionsmedizin und Immunologie DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg Hessen Medizinische Fakultät Mannheim Heidelberg Universität
2 Vorgaben der Ph. Eur Medienvalidierung Matrixvalidierung
3 Medienvalidierung 2 geeignete Nährmedien zum Nachweis von Pilzen, anaeroben und aeroben Bakterien Jeweils 2 Prüfgefäße pro Nährmedium (Doppelansatz) 10 bis 100 vermehrungsfähige Mikroorganismen Bebrütungsdauer mindestens 7 Tage bei C bei automatisiertem Nachweis Bebrütungsdauer mindestens 14 Tage bei C bei visuellem Nachweis Nachweis von Wachstum der Mikroorganismen in allen Medien Jede Charge Prüfung durch den Entwickler und / oder Anwender auf Wachstumseigenschaften
4 Medienvalidierung Aerobe Nährmedien Staphylococcus aureus Bacillus subtilis Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Aspergillus brasiliensis Anaerobe Nährmedien Clostridium sporogenes Bacteroides fragilis
5 Matrixvalidierung ( ) Abhängig von der Art des Produktes, des Herstellungsverfahrens, dem Volumen des Inokulums und der Art des Prüfsystems muss die Notwendigkeit einer Matrixvalidierung in Betracht gezogen werden.
6 Matrixvalidierung Testung auf Spezifität Testung auf Sensitivität Testung im Hinblick auf eine Vergleichspräzision??? -> Laborvergleich insbesondere zur Bestimmung der Nachweisgrenze wird die Prüfung mit einer Zubereitung durchgeführt, die absichtlich in unterschiedlichem Grad mit den aufgeführten Mikroorganismen nach der Wahrscheinlichkeit einer mikrobiellen Kontamination und ihren Wachstumsanforderungen ausgewählten Mikroorganismen kontaminiert ist wie viele Blutpräparationen sind zu testen?
7 Matrixvalidierung Aspergillus brasiliensis Bacillus subtilis Candida albicans Clostridium sporogenes Propionibacterium acnes Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Streptococcus pyogenes Yersinia enterocolitica Negativkontrolle Eigene Keime Bacteroides fragilis Initialer Ausstrich eines Aliquots auf geeignetem Agar > KBE-Bestimmung Ausstrich aller pos. Nährmedien zur Keimidentifizierung Antibiogramm???
8 Matrixvalidierung Lt. Stellungnahme PEI für die Matrixvalidierung hämatopoetischer Stammzellen können für die Validierung 4 bis 5 der angegebenen Keime verwendet werden. Lt. RP Baden-Württemberg Warum nur 4 bis 5? Welche Begründung, warum diese
9 Matrixvalidierung hämatopoetischen Produkten Gesamtvolumen des Produkte in ml Volumen des Inokulums V 10 1 V < 10 V < 1 1 % des Gesamtvolumens 100 µl nicht auswertbar
10 Flüssigkulturmedien der Firma Biomerieux Es fehlen: CE Staph. Aureus Bacillus subtilis Aspergillus brasiliensis
11 Flüssigkulturmedien der Firma Biomerieux Es fehlen: CE Clostridium sporogenes
12 Flüssigkulturmedien der Firma Biomerieux Es fehlen: Staph. aureus CE Bacillus subtilis Aspergillus brasiliensis Lt. Beipackzettel nur für Thrombozytenkonzentrat
13 Flüssigkulturmedien der Firma Biomerieux Es fehlen: CE Clostridium sporogenes Lt. Beipackzettel nur für Thrombozytenkonzentrat
14 Flüssigkulturmedien der Firma Biomerieux Kein CE
15 Flüssigkulturmedien der Firma Biomerieux Kein CE Die iast und die inst Medien kosten ca. 1/3 mehr! Kein CE lt. Stellungnahme PEI (hämatop. Stammzellen) einsetzbar Wie sehen die RPs das?
16 Stellungnahme der Firma Biomerieux zu den Kulturmedien!
17 Praktische Umsetzung Wo kann die Abarbeitung erfolgen? Transfusionsmedizin oder Institut für Mirkobiologie Ist eine Vergleichstestung möglich? Transport der Proben Zeitverschiebung bei den Beginn der Inkubation Flaschen müssen zeitnah in den Inkubator eingebracht werden Woher stammen die Keime? Institut für Mikrobiologie Bioballs von Biomerieux
18 Praktische Umsetzung - Woher stammen die Keime? Institut für Mikrobiologie Lebendkulturen mit über Nachtanzüchtung Die Einstellung der Keime auf eine definierte Keimzahl gestaltet sich schwierig Die Einstellung auf eine niedrige Keimzahl gestaltet sich schwierig Die Einstellung aller Keime auf die gleiche Keimzahl ist unmöglich
19 Praktische Umsetzung Bakterien Bioballs von Biomerieux Unterschiedliche Keime ABER: Nicht alle Keime, die für die Validierung erforderlich sind Single shot : ± 3 KBE 20 Flaschen (single shot) pro Keim pro Packung
20 Praktische Umsetzung - Woher stammen die Keime? Multi shot 2 Flaschen á KBE 10% vom Mean - Preis pro Kit: ca. 1000,- Aspergillus brasiliensis Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Aspergillus brasiliensis Bacillus subtilis Candida albicans Clostridium sporogenes Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Alle Keime für die aerobe Medienvalidierung Für die anaerobe Medienvalidierung fehlt der Bacteroides fragilis Für die Matrixvalidierung fehlen: Strept. pyogenes Yersinia enterocolitica Propioni. acnes
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