Viele Wege führen nach Rom

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1 Verfahren für die HbA1c-Bestimmung Viele Wege führen nach Rom Die bei Diabetikern erhöhte Hämoglobinfraktion HbA1c kann mit elektrophoretischen, chromatographischen und immunchemischen Verfahren quantifiziert werden. Aus der Beteiligung an den HbA1c-Ringversuchen (hier RfB 1/2012) lassen sich die Marktanteile grob abschätzen. Bei der Suche nach Hämoglobinvarianten mittels Elektrophorese fiel dem Iraner S. Rahbar Mitte der 1960er Jahre auf, dass bei manchen Patienten eine kleine, schnell wandernde Hämoglobinkomponente deutlich vermehrt auftrat. Genaue Untersuchungen zeigten, dass diese "HbA1c- Fraktion" am Ende der ß-Kette Glukose enthielt und für Diabetiker typisch war. In vielen Studien stellte sich HbA1c als geeigneter Biomarker für den mittleren Blutglukosespiegel der letzten zwei bis drei Monate heraus. Da der Zuckeranteil der ß-Kette die Ladung und Struktur des gesamten Moleküls beeinflusst, kann HbA1c durch unterschiedliche, insbesondere elektrophoretische, chromatographische und immunchemische Verfahren quantifiziert werden. Ladungsabhängige Verfahren Elektophorese oder Ionenaustauschchromatographie eignen sich zur Abtrennung und damit auch zur Messung des HbA1c aufgrund der Ladung. Die Hochdruckflüssig-Chromatographie (HPLC) hat sich für Routinezwecke besonders bewährt, weil sie die Trennung in Minuten durchführt und automatisierbar ist. Ein weiterer Vorteil besteht darin, dass das Gesamthämoglobin im selben Lauf als Bezugsgröße messbar ist, was eine gute Präzision gewährleistet. Weiterhin erkennt man Hämoglobinvarianten. Allerdings werden nicht-abgetrennte minore Hämoglobine miterfasst und müssen durch entsprechende Kalibration eliminiert werden. Immunologische Verfahren Strukturunterschiede erfasst man am besten immunchemisch mit Antikörpern, die nur das Glukose enthaltende Ende der Hämoglobin-ß-Kette erkennen. Diese Tests sind folglich sehr spezifisch für HbA1c und bleiben auch von den meisten Hämoglobinvarianten unbeeinflusst. Für Immunoassays sind verschiedene Variationen im Einsatz, die sich durch die Antikörperauswahl, das Detektionsprinzip (Trübungszunahme durch Präzipitation, Farbtests, Fluoreszenzmessungen) usw. unterscheiden. Allerdings muss das als Bezugsgröße benötigte Gesamthämoglobin stets mit einem unabhängigen Test bestimmt werden, wodurch sich die Präzision des Endresultats verschlechtern kann. Das gilt vor allem für die patientennahe Sofortdiagnostik (S. 15). Prof. Dr. Erwin Schleicher Univ. Tübingen, Zentrallabor des Klinikums HbA1c-Bestimmung an klinisch-chemischen Analysensystemen von Beckman Coulter Testprinzip: Colorimetrische Gesamthämoglobin-Bestimmung Immunturbidimetrischer Inhibitionstest für A1c-Bestimmung HbA1c-Kit OSR6192 für AU-Systeme HbA1c-Kit und HbA1c2*-Kit A17836 für SYNCHRON UniCel- Systeme (*online Hämolyse) Beckman Coulter GmbH Gabriele Moos Europark Fichtenhain B Krefeld Tel / trilliumreport (1):34

2 HbA1c: Testkits und Analysensysteme Für jedes Einsatzgebiet die richtige Lösung Die Anforderungen an Verfahren zur HbA1c-Bestimmung sind extrem breit gestreut von der Einzelmessung bis zur Großserie, vom Speziallabor bis zur Hausarztpraxis, von der Primärdiagnostik bis zur Verlaufskontrolle. Derzeit befi nden sich mehr als 70 Testverfahren im Markt, von denen wir hier beispielhaft eine kleine Auswahl präsentieren, um die Vielfalt des Angebots zu demonstrieren. Forschung und Routine Gleich auf dieser ersten Doppelseite stecken wir die Eckpunkte des Spektrums ab: Links ein immunturbidimetrisches Verfahren für Automationssysteme der AU- und UniCel-Serie von Beckman Coulter, rechts die kapillarelektrophoretische Methode von Sebia, die für wissenschaftliche Untersuchungen den Fokus auf trennscharfe Peaks der diversen Hämoglobinfraktionen legt. Auf der nächsten Doppelseite stellen zwei Große der Branche, Roche und Siemens, methodische Details ihrer homogenen Immunoassays für die Hochdurchsatzanalyzer der cobas- bzw. ADVIA-Serie vor. Der Dimension von Siemens wurde für mittelgroße Labore konzipiert und setzt eine empfi ndliche Immunfl uoreszenzmethode ein. Bei den Geräten auf S. 38 stehen geringe Reagenzkosten und analytische Trennschärfe für Speziallabore im Vordergrund. Die Geräte der Adams Familie von Axon Lab und der HLC-723 G8 von Tosoh gehören zu den führenden Systemen für die Hochdruckflüssigkeitschromatografie (HPLC); sie ist die derzeitige Referenzmethode und gilt vielen trotz aller Fortschritte der Immunchemie als Goldstandard der HbA1c-Bestimmung. Stoffwechseleinstellung mit POCT-Geräten Ganz andere Ansprüche haben POCT-Geräte für die routinemäßige Stoffwechselkontrolle von Diabetikern. Sie werden vor allem in Diabetes- Ambulanzen, Arztpraxen und kleineren Krankenhauslaboren eingesetzt, wo der Durchsatz weniger bedeutsam ist. Dafür sind sie dank Kassettentechnik sehr einfach zu bedienen. Als Beispiele fi nden Sie den DCA Vantage von Siemens auf S. 37, den Super ID von Hitado auf S. 39 und den Quo-Test von EKF auf S. 40. In der Regel kommt HbA1c im Paket mit anderen Diabetesparametern zum Einsatz. So bietet der DCA Vantage zusätzlich Mikroalbumin an, Hitado und EKF haben auch Glukose, Laktat und Gesamt-Hb auf POCT-Geräten im Programm. re CAPILLARYS TM 2 Flex Piercing HbA1c Bestimmung mittels Kapillarelektrophorese Sollte ihr HbA1c Resultat nicht genauso klar und präzise aussehen wie hier, kontaktieren sie uns umgehend sebia@sebia.de Münsterfeldallee, Fulda Deutschland Tel. : +49 (0) Fax : +49 (0) sebia@sebia.de

3 Das dreifach Hoch der HbA1c-Bestimmung Der Roche Tina-quant [a] HbA1c-Test Roche zeichnet eine jahrzehntelange Erfahrung im Diabetes- Bereich aus. Dazu gehört neben der Forschung und Entwicklung auch das umfassende Management der Erkrankung, angefangen von der Patienten-Selbstkontrolle der Blutzuckerwerte bis zur Bestimmung der relevanten Parameter im Labor. Eine kontinuierliche Weiterentwicklung der Reagenzien gegenwärtig steht bereits die dritte Generation des HbA1c- Immunoassays von Roche zur Verfügung sowie die Anpassung der Geräte an die Kundenwünsche, die mit einer steigenden Anzahl von Diabetikern und damit wachsenden Anforderungszahlen für HbA1c korrelieren, sind die Eckpfeiler unseres Engagements im Bereich der Labordiagnostik. Darüber hinaus unterstreicht die Anerkennung des Parameters als Diagnostikum durch die Deutsche Diabetesgesellschaft auch die medizinische Relevanz: Für die Labore wird es somit immer wichtiger, HbA1c mit hoher Qualität, aber auch mit hoher Effi zienz, richtig und schnell zu bestimmen. Der immunologische Tina-quant [a] HbA1c-Test erfüllt alle diese Anforderungen mit einem dreifach Hoch : Er vereint die hohe Spezifi tät der immunologischen Testmethode mit hoher Präzision und dem hohen Durchsatz an den klinisch-chemischen Routine-Systemen und bietet somit effi ziente Laborabläufe ohne Qualitätskompromisse. Hohe Spezifität Per Defi nition der IFCC ist HbA1c Hämoglobin, das am N-Terminus seiner β-kette glykiert ist [β-(n-deoxyfructosyl) hemoglobin]. Der Roche-Antikörper erkennt spezifi sch die letzten vier Aminosäuren dieser β-kette. Wenn keine strukturelle Veränderung dieser Aminosäuren vorliegt, wird die immunologische Bestimmung von HbA1c nicht durch genetisch bedingte Hämoglobinvarianten (z. B. HbS, HbC, HbE) oder chemisch verändertes Hämoglobin (z. B. carbamyliertes oder acetyliertes Hb) gestört. Hohe Präzision Gleichzeitig bietet unsere Methode auf den verschiedenen Analyzern eine sehr gute Präzision (VK < 2%). Für die Zertifi zierung durch die NGSP (National Glycohemoglobin Standardization Program) ist dies ein entscheidendes Qualitätsmerkmal. Hohe Spezifität: Per Definition der IFCC ist HbA1c Hämoglobin, das am N-Terminus seiner β-kette glykiert ist. Der Antikörper im Tina-quant Test erkennt spezifi sch die letzten vier Aminosäuren am N-Terminus dieser β-kette. Hohe Effizienz Die Vorteile der Roche Analysensysteme cobas modular platform und COBAS INTEGRA wie z. B. hoher Durchsatz, einfaches Reagenzhandling, Bestimmung aus Vollblut und bei COBAS INTEGRA zusätzlich closed tube sampling ersparen einen separaten HbA1c- Arbeitsplatz und führen in Verbindung mit der Test-Qualität dazu, dass HbA1c-Ergebnisse schnell und sicher an den Einsender berichtet werden können. Der immunologische Tina-quant [a] HbA1c-Test ist seit 2003 auf die IFCC-Referenzmethode rückführbar. Diese Referenzmethode und damit der Goldstandard der HbA1c-Bestimmung besteht aus drei aufeinanderfolgenden Schritten: Zuerst erfolgt eine enzymatische Spaltung des Hämoglobins, danach erfolgt die Auftrennung der Hb-Fraktionen mittels HPLC und schließlich die Quantifi zierung der Fraktionen der glykierten und nicht-glykierten Hb-Peptide mittels Kapillarelektrophorese oder Electrospray-Ionisation/ Massenspektroskopie. Schließlich unterstützen die Roche Analysensysteme das Ergebnis- Reporting in den von der Bundesärztekammer geforderten SI-Einheiten mmol/mol. Martin Steinmetz Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Straße Mannheim Tel. 0621/ martin.steinmetz@roche.com 36 trilliumreport (1):36

4 Diabetesdiagnostik im Wandel der Zeit Bedarfsgerechte Lösungen von Siemens Healthcare Diagnostics Im ständigen Bemühen, Verbesserungen in der Patientenversorgung sicherzustellen, hat es sich Siemens Healthcare Diagnostics GmbH zur Aufgabe gemacht, bestehende Verfahren zu optimieren und den gehobenen Ansprüchen moderner Diagnostik zu entsprechen. So hat Siemens in den letzten Jahren die auf allen Plattformen angebotenen HbA1c-Assays kontinuierlich weiterentwickelt und verbessert. Diese Weiterentwicklung gewährleistet eine zuverlässige Analytik, die sowohl sichere als auch präzise Aussagen in der Diabetesdiagnostik bietet. Qualität und Sicherheit Bereits seit Jahren kommt die Bestimmung des HbA1c in der Diabetesdiagnostik zum Einsatz; seit 2009 mit Methoden, die durch das National Glycohemoglobin Standardization Program (NGSP) zertifiziert und auf die IFCC Referenzmethode rückführbar sind. Dies hat in hohem Maße zur Vergleichbarkeit der unterschiedlichen Methoden beigetragen. Der neue HbA1c_3-Assay für ADVIA Klinische Chemie, der nach NGSP zertifi ziert ist und die von der Bundesärztekammer geforderte Ergebnisausgabe in SI-Einheiten (mmol/mol) bietet, überzeugt nicht nur durch hervorragende Präzision, sondern zeigt auch, dass uns die bekannte Thematik der interferierenden Faktoren wie zum Beispiel genetische oder hämatologische Erkrankungen, die das HbA1c beeinfl ussen können, besonders wichtig ist. Der HbA1c_3-Assay für ADVIA Klinische Chemie zeigt keine Interferenzen in Gegenwart von heterozygoten Hämoglobinvarianten C, E oder S und des Weiteren eine präzise Wiederfi ndung bei Hämoglobin-D-Varianten. Ebenso wurde keine Beeinträchtigung durch die labile Fraktion des glykosylierten Hämoglobins (bis zu mg/dl Glukose) und durch carbamylierte Hämoglobine bei urämischen Patienten festgestellt. Auch bei Proben mit Bilirubin bis zu 60 mg/dl und Triglyceriden bis zu mg/dl traten keine signifi kanten Interferenzen auf. Effizienz Je nach laborspezifischen Bedürfnissen kann der HbA1c_3-Assay als manuelle oder auch als Version mit automatischer Probenvorbehandlung durch das Analysesystem ausgewählt werden. Wegen des geringen Probevolumens von nur 2 µl eignet sich der Assay besonders für pädiatrische und geriatrische Proben. Die kurze Reaktionszeit des HbA1c_3-Assays und die daraus resultierende schnelle Ergebnisverfügbarkeit gepaart mit den an ADVIA klinisch-chemischen Analysesystemen bewährten Überwachungen der Kalibration, der Reagenzien und der Reaktionsabläufe stehen für Anwenderfreundlichkeit und höchste Effi zienz. Klinischer Nutzen Eine der wesentlichen Bemühungen in der Behandlung von Diabeteserkrankungen besteht unter anderem in der Verhinderung bzw. Reduktion von mikro- und makrovaskulären Komplikationen. Studien, wie die DCCT (Diabetes Control and Complications Trial) und UKPDS (United Kingdom Prospective Diabetes Study) belegen, wie durch die Reduktion des HbA1c dieses Ziel erreicht werden konnte und bestätigen somit die Wichtigkeit der Verlaufsbetrachtung des HbA1c. Siemens Healthcare Diagnostics wir leisten unseren Beitrag. DCA Vantage Schnell und anwenderfreundlich für Diabetes- Ambulanzen und niedergelassene Praxen Dimension Integrierte Systeme Idealer Partner für Krankenhäuser ADVIA Klinische Chemie Bewährte Zuverlässigkeit in Universitätskliniken und Privatlaboren Donia Dronka Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Ludwig-Erhard-Straße Eschborn Tel / donia.dronka@siemens.com trilliumreport (1):37 37

5 Weltweit schnellste HbA1c-Analytik mit HPLC-Technologie In nur 48 Sekunden zum Ergebnis ARKRAY ist der erste Hersteller, der die HPLC-Technologie für die HbA1c-Analytik entwickelt und produziert hat. Mit der nunmehr achten Gerätegeneration dem neuen ADAMS HA-8180 konnte das weltweit schnellste HPLC-System für die HbA1c-Analytik realisiert werden. Einzigartige Eigenschaften keine säulengebundenen Reagenzien Die Reagenzien können unabhängig von der Chargenzuordnung jederzeit ausgewechselt werden. Das bringt entscheidende Vorteile: Sehr geringer logistischer Aufwand Beim Reagenzwechsel ist keine Kalibration notwendig Kalibration nur bei Säulenwechsel! Geringere Reagenzienkosten Weitere Eigenschaften der ADAMS-Geräte HbA1c-Analytik in nur 48 Sekunden Hervorragende Auftrennleistung der Säule Alle gängigen Probenröhrchen sind in einem Rack gemischt verwendbar Cap-Piercing Kapillarblutproben hämolysiert ohne Geräteumstellung messbar Einfache und intuitive Bedienung Ergänzende Gerätemerkmale der ADAMS-Modelle ADAMS A1c HA-8180 FM Fast Mode Die schnellste HbA1c-Analytik: Hochpräzise und in nur 48 Sekunden. ADAMS A1c HA-8180 V Variant Mode Umstellung zwischen Fast Mode und Variant Mode per Knopfdruck. In diesem werden selbst bei Patienten mit Hb-Varianten korrekte HbA1c- Werte ermittelt. ADAMS TM A1c HA-8180 T Thalassämie Mode Axon Lab AG Heinrich-Otto-Str Reichenbach Tel / info@axonlab.de Axon Lab AG Täfernstr. 15 CH-5405 Baden Tel / info@axonlab.ch HPLC der Goldstandard der HbA1c-Bestimmung HPLC-Systeme stellen den Gold-Standard* unter den Methoden der HbA1c-Bestimmung dar. Mit mehr als 35 Jahren Erfahrung ist TOSOH eines der weltweit führenden Unternehmen im Bereich HPLC. HbA1c-Messung und gleichzeitige Hämoglobinvarianten-Erkennung - Hb-Varianten führen in der Regel zu keinen Einschränkungen, da gängige Varianten wie HbD, HbS, HbC, (HbE in Vorbereitung) erkannt werden Zuverlässige, präzise Ergebnisse durch einen einzigartigen VK < 1% Einfache Handhabung - Vollautomatische Wartung - Einfacher Säulen- und Filterwechsel innerhalb einer Minute - Einzigartige Datenverwaltungs-Software *Diabetes Control and Complications Trial (DCCT) USA Tosoh Automated Glycohemoglobin Analyzer HLC-723 G8 TOSOH EUROPE N. V. Büro Berlin Kurfürstendamm Berlin Tel. 030/ vertrieb.tbe@tosoh.com 38 trilliumreport (1):38

6 Maßstab für zuverlässige Diagnostik von HbA1c Hitado Super ID Schon lange ist die Standardisierung des HbA1c Parameters wesentlicher Bestandteil der nationalen und internationalen Fachgesellschaften. Genauigkeit und Rückführbarkeit auf den IFCC Standard gelten gerade für HbA1c Tests, damit die Messunterschiede zwischen den einzelnen Systemen und den Methoden möglichst gering bleiben. Ziel bei der Entwicklung des Super ID war es, exakt diese Anforderungen zu erfüllen. Das Messsystem wurde deshalb unter anderem mit einem Spektralphotometer ausgestattet und es wurden hochwertige Komponenten ähnlich denen analytischer Großsysteme verwendet. Einfache Handhabung Das Super ID System ist nicht nur präzise, schnell und kosteneffi zient, sondern erfüllt auch die Richtlinien der RiliBÄK. Der Reagenzieneinsatz im Unit-Use-Verfahren ermöglicht schnelles und anwenderfreundliches Arbeiten. Die einfache Handhabung in nur drei Schritten bis zum Ergebnis bietet den Vorteil geringer Vorbereitungszeit, keiner Probenvorbereitung und keines besonderen Trainings: Die Probenentnahme erfolgt anhand von Open-End- Kapillaren und gewährleistet ein exaktes Probenvolumen. Nach der Entnahme wird die Kapillare an der Sollbruchstelle gebrochen und in den mit einer Hämolysatlösung gefüllten Probenbecher gegeben. Der Probenbecher muss gut geschüttelt werden, bevor er anschließend zusammen mit dem Reagenzienriegel in das Rack gesetzt wird und die Messung beginnt. Diese erfolgt mittels einer immunturbidimetrischen Bestimmung aus einem Zweikomponentenreagenz. Das Ergebnis liegt bereits nach sieben Minuten vor und kann sowohl in Prozent (DCCT) als auch in mmol/mol (IFCC) angezeigt werden. Die Bestimmung von Gesamthämoglobin und glykiertem Hämoglobin mit nur einem Reagenz verhindert Ungenauigkeiten, wie sie bei der prozentualen Berechnung aus Gesamthämoglobin und HbA1c in unterschiedlichen Kanälen auftreten können. Gesicherte Qualität Die Nachverfolgbarkeit der Super ID Ergebnisse wird durch ein hohes Qualitätsmanagementkonzept gesichert. Das beinhaltet sowohl die Teilnahme am IFCC Traceabilty Programm für HbA1c als auch die Zertifizierung durch NGSP akkreditierte Referenzlaboratorien. Darüber hinaus werden alle Reagenz-Chargen und Qualitätskontroll-Chargen durch ein externes unabhängiges Labor permanent überwacht. Auch die Teilnahme an externen Ringversuchen stellt eine gute Übereinstimmung zu anderen Labormethoden sicher. Permanente Einsatzbereitschaft Die Verwendung von vorbereiteten Unit-Use-Liquidreagenzien trägt zur schnellen, sicheren und vor allem auch wirtschaftlichen Handhabung bei. Gemäß der Richtlinien der Bundesärtzekammer ist dadurch auch eine vereinfachte, wöchentliche Qualitätskontrolle ausreichend. Um dem Anwender die Bedienung des Systems so einfach wie möglich zu machen, entfällt eine benutzergeführte Kalibration. Vielmehr wird das System mit Hilfe einer Softwarekarte für die jeweilige Reagenzien- Charge in vorgegebenen Abständen autokalibriert. Das ist möglich, weil sowohl die Messsysteme einheitlich gefertigt sind als auch das Reagenz über eine hohe Kalibrationsstabilität von ca. fünf Monaten verfügt. Falls das Reagenz noch nicht aufgebraucht ist, können sogar über die gesamte Reagenzienhaltbarkeit Rekalibrationscodes eingegeben werden, deren Kalibrationskurven über das Referenzsystem ermittelt wurden. Eine eigene Gerätekalibration entfällt somit, was das System besonders zeitsparend und kosteneffi zient macht. Sysmex Deutschland GmbH Britta Engler Tel. 040/ Hitado GmbH Hans Hermann Droest Tel / trilliumreport (1):39 39