Hämoglobinopathien - Wann soll was abgeklärt werden? Dr. phil. nat. et sc. med. S. Brunner-Agten SwissMed Lab Bern, Juni 2012

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1 Hämoglobinopathien - Wann soll was abgeklärt werden? Dr. phil. nat. et sc. med. S. Brunner-Agten SwissMed Lab Bern, Juni 2012

2 Hämoglobin

3 Hämoglobin Gene h"p://amc- app1.amc.sara.nl/eduwiki/images/d/d8/hb- composi=on.gif

4 Hämoglobin Fraktionen (HPLC) α 2 β 2! α 2 γ 2! α 2 δ 2! α 2 β 2!

5 Hämoglobinopathie 3% der Weltbevölkerung sind Träger in der Schweiz leben betroffene Menschen mit schweren Hämoglobinopathien Gehört zu den häufigsten monogenetischen Erbkrankheiten (meist) rezessiv vererbt heterogene Gruppe von genetischen Erkrankungen Huber A et al, Swiss medical forum, 2004

6 Hämoglobinopathie- Klassifizierung Abnormales Hämoglobin qualitative strukturelle Veränderung des Hämoglobins Thalassämie quantitative Verminderung der Hämoglobinsynthese α-thalassämia β-thalassämia

7 Diagnostischer Algorithmus 1. Phase Allgemein Labor 2. Phase biochemische Analysen 3. Phase molekulare Analysen

8 Diagnostischer Algorithmus Hämogramm Blutausstich Retikulozyten-Zahl Eisenstatus Entzündungsparameter Hämolyseparameter 1. Phase Allgemein Labor 2. Phase biochemische Analysen 3. Phase molekulare Analysen

9 Diagnostischer Algorithmus Klinische Informationen Andere Informationen (FA, Ethnie, Transfusionen, SS) Hämoglobinstabilität 1. Phase Allgemein Labor 2. Phase biochemische Analysen 3. Phase molekulare Analysen

10 Diagnostischer Algorithmus Thalassämie vs. Eisenmangel! 1. Phase Allgemein Labor 2. Phase biochemische Analysen ZnPP (Zink-Protoporphyrin)! 3. Phase molekulare Analysen

11 Basis Untersuchungen Molbio Nachweis von deletionalen α-thalassemia gap-pcr (Multiplex PCR) α + ( α 3.7kb, α 4.2kb ) α 0 ( SEA, MED, THAI, (α) 20.5kb, FIL )

12 Basis Untersuchungen Molbio Nachweis der 22 häufigsten Hämoglobinopathien (β Globin Gen) β-strip assay

13 Basis Untersuchungen Molbio Nachweis der 5 häufigsten δβ- and HPFH- Deletionen im beta-globingen Cluster gap- PCR HPFH-1, HPFH-2, HPFH-3 (δβ) 0 -Sicilian/Mediterranean und Hb-Lepore

14 Basis Untersuchungen Molbio Nachweis von Hb-Varianten α- oder β- Globingen Sequenzierung

15 Erweiterung vom Algorithmus 1. Phase Allgemein Labor 2. Phase biochemische Analysen 3. Phase molekulare Analysen 4. Phase MLPA / Array CGH

16 Kriterien für MLPA / array CGH Analysen Alpha Globingen Array CGH! hypochrome microcytäre Anämia (MCH < 27 pg)! keine eisendefizienten Erythropoiese! keine Hämoglobinopathie (HbA 2 und HbF normal) Beta Globingen Array CGH! HbF deutlich erhöht (>5%)! mit oder ohne hypochrome mikrozytäre Anämie! keine Hämoglobinopathie (HbA 2 )! Nachweis von HbH Innenkörpern

17 Array CGH

18 Array CGH Auswertung Datenauswertung mittels GenPix Pro

19 Array CGH Auswertung Datenauswertung mittels SignalMap

20 Fall 1 - Blutbild 33% Unbek. Variante 36-jähriger Mann

21 Fall 1 - HLPC

22 Fall 1 - Routine Molekularbiologie Identifikation der Hb-Variante:! c.364g>c im beta-globingen!! Warum dann die Hypochromie?

23 Basis Untersuchungen Molbio Nachweis von deletionalen α-thalassemia gap-pcr (Multiplex PCR)! α 3.7kb (α + -Thalassämie) HbD Punjab in Kombination mit einer α+-thalassämie

24 Fall 2 - Blutbild 36-jährige Frau

25 Fall 2 - HLPC

26 Fall 2 - Routine Molekularbiologie Identifikation der β-thalassämie:! β+ Thalassämie (Thalassamia minor)

27 Fall 3 - Blutbild 28-jährige Frau Keine eisendefiziente Erythropoese

28 Fall 3 - HLPC

29 Fall 3 - Routine Molekularbiologie negative Resultate für:! α + -Thalassemia (-α 3.7kb, -α 4.2kb ) mit einem deletierten α-gen! α 0 -Thalassemia (--α SEA, --α TAI, --α FIL, -- α MED, -(α) 20.5kb )

30 Fall 3 - Array CGH 31.7 kb Deletion Heterozygote α 0 -Thalassämie (Thalassamia minor)

31 Fall 4 - Blutbild 33-jähriger Mann

32 Fall 4 - HPLC

33 Fall 4 - Routine Molekularbiologie negative Resultate für:! 5 häufigsten δβ- and HPFH-Deletionen im β- Globingen Cluster (HPFH-1, HPFH-2, HPFH-3, (δβ) 0 -Sicilian/Mediterranean and Hb-Lepore)! α + -Thalassemia (-α 3.7kb, -α 4.2kb )! α 0 -Thalassemia (--α SEA, --α TAI, --α FIL, --α MED, -(α) 20.5kb )

34 Fall 4 - Array CGH >1 Mb Deletion Heterozygote δβ Thalassämie (Thalassamia minor)

35 Zusammenfassung Stufendiagnostik ist wichtig Nicht immer alles, nicht immer nur 1 Test Diagnose = Kombination Molbio & Hämatologie

36 Schlussfolgerung Migration Hämoglobinopathie-Prävalenz steigt heute: mehr diagnostische Möglichkeiten, d.h. mehr definitive Diagnosen Keine Therapie ohne Diagnose Genetische Beratung

37 Herzlichen Dank für Ihre Aufmerksamkeit

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