Zwischenbericht: Research Project on Sebaceous Adenitis (SA) Dr. Ina Pfeiffer Institute of Veterinary Medicine University of Göttingen

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1 Zwischenbericht: Research Project on Sebaceous Adenitis (SA) Dr. Ina Pfeiffer Institute of Veterinary Medicine University of Göttingen

2 SA betroffene Akita Photograph: Joop & Astrid Ouwerkerk Photograph: Lotte Lekholm

3 Zur Anatomie der Talgdrüse Photo by Mewes Photo by Reichler

4 RNA-Status: Überblick Untersuchungen zur Genexpression im Blut und Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas DNA RNA Protein Geneexpression

5 RNA-Status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas Inhalt: 1. RNA- Extraktion : Biopsie - Methode - Ergebnisse 2. Differential-Display: RNA- Biopsie - Methode - Ergebnisse

6 RNA-Status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 1. RNA- Extraktion : Biopsie -Methode

7 RNA-status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 1. RNA- Extraktion : Biopsie -Methode? Biopsie RNA

8 RNA-Status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 1. RNA- Extraktion : Biopsie -Methode Neue Vorgehensweise 20 unterschiedliche Extraktionsschritte Biopsie Fetthaltiges Gewebe) Haut (30mg) wurde in kleine Fragmente zerschnitten RNA

9 RNA-Status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 2. Differential-Display: RNA- Biopsie - Methode - Ergebnisse RNA = RNAsen cdna

10 itel: Untersuchungen zur Genxpression in Biopsien bei A-positiven und SAegativen Akitas 2. Differential-Display: RNA- Biopsie - Methode - Ergebnisse RNA-Status:Biopsie RNA aus Biopsie

11 RNA-status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 2. Differential-Display: RNA- Biopsie - Methode - Ergebnisse PCR

12 RNA-Status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 2. Differential-Display: RNA- Biopsie - Methode - Ergebnisse PCR Auftrennung mittels Elektrophorese

13 RNA-Status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 2. Differential-Display: RNA- Biopsie - Methode - Ergebnisse 24 verschiedene Elektrophorese Gele Auftrennung mittels Elektrophorese Silberfärbung

14 RNA-status: Biopsie Legende: + - SA positiv SA negativ Gemeinsame Banden Banden-Unterschiede

15 RNA-status: Biopsie Untersuchungen zur Genexpression in Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas Zusammenfassung: - 18 informative Banden - Die informativen Banden wurden extrahiert - Nach einer erfolgreichen Reamplifikation sollen die PCR- Produkte sequenziert werden.

16 RNA-Status: Blut Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SA-negativen Akitas Inhalt: 1. RNA- Extraktion : Blut - Methoden 2. Differential-Display: RNA- Blut - Methoden - Resultate

17 RNA-Status: Blut Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 1. RNA- Extraktion : Blut - Methoden

18 1. RNA- Extraktion : Blut - Methoden RNA-Status: Blut Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SA-negativen Akitas Neue Vorgehensweise 21unterschiedliche Extraktionsschritte Blut Blut (200µl) wurden aufgeschlossen RNA

19 RNA-Status: Blut Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 2. Differential-Display: RNA- Blut - Methode RNA = RNAsen 60min cdna

20 2. Differential-Display: RNA- Blut - Methode RNA-status Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SAnegativen Akitas RNA aus Blut

21 2. Differential-Display: RNA- Blut - Methode RNA-Status Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SA-negativen Akitas PCR

22 2. Differential-Display: RNA- Blut - Methode RNA-Status:Blut Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SA-negativen Akitas PCR Auftrennung mittels Elektrophorese

23 RNA-status: Blood Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 2. Differential-Display: RNA- Blut - Methode 16 verschiedene Elektrophorese Gele Auftrennung mittels Elektrophorese Silberfärbung

24 Zusammenfassung: RNA-Status: Blut Untersuchungen zur Genexpression im Blut bei SA-positiven und SA-negativen Akitas - 12 informative Banden - Die unterschiedlichen Banden wurden extrahiert - Nach einer erfolgreichen Reamplifikation sollen die PCR- Produkte sequenziert werden.

25 RNA-Status Blut: Ergebnisse Legende: + SA positiv - SA negativ Gemeinsame Bande Banden- Unterschiede Spezial Bande

26 Zusammenfassung: RNA-Status Untersuchungen zur Genexpression im Blut und Biopsien bei SA-positiven und SA-negativen Akitas 1. Es konnten insgesamt 30 Genexpressions- Unterschiede im Blut und in Biopsien festgestellt werden 2. Um diese Unterschiede anhand einer umfangreicheren Stichprobe zu prüfen, werden dringend SA-positive und SA-negative Akitas als Spender benötigt. 3. Ausgehend von dem vorliegenden Probenmaterial konnte ein signifikanter Genexpressionsunterschied (RNA) aus Blut von SA-positiven Akitas gegnüber gesunden Akitas ermittelt werden.

27 Thank You!