Molekulare Allergiediagnostik mittels ImmunoCAP ISAC. PD Dr. J. Huss-Marp ImmunoDiagnostics Thermo Fisher Scientific

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1 Molekulare Allergiediagnostik mittels ImmunoCAP ISAC PD Dr. J. Huss-Marp ImmunoDiagnostics Thermo Fisher Scientific

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3 Gliederung 1) Molekulare Allergiediagnostik & ImmunoCAP ISAC 2) Fallbeispiele 3) Interpretation & Indikationen 4) Zusammenfassung

4 Grundlage der Molekularen Allergiediagnostik Mal d 1 Mal d 2 Mal d 3 Mal d 4 Apfel (Mallus domesticus) Tausende Substanzen Einzelne Allergene

5 Grundlage der Molekularen Allergiediagnostik

6 Klinischer Nutzen Molekularer Allergiediagnostik Identifiziert Allergene, nicht Allergenträger Risikoabschätzung für schwere Reaktionen Kreuzreaktivität vs. Spezies-spezifischer Sensibilisierung Hilft bei Auswahl der richtigen Therapie

7 Molekulare Grundlage der Allergie PR-10-Proteine: Kristallographische Struktur Majorallergen Birke (Betula verrucosa) Bet v 1 Majorallergen Mal d 1 (Apfel)

8 Cor a 1 Cor a 8 Cor a 9 Ara h 1 Ara h 2 Ara h 3 Ara h 8 Ara h 9 Gal d 1 Gal d 2 Gal d 3 Bos d 4 Bos d 5 Bos d 8 Pen a 1 Pen a 2 Pen a 3 Bet v 1 Bet v 2 Bet v 4 Bet v 6 Phl p 1 Phl p 2 Phl p 4 Phl p 5 Phl p 6 Phl p 7 Phl p 11 Phl p 12 Fel d 1 Fel d 2 Fel d 3 Fel d 4 Ves v 1 Ves v 2 Ves v 5 Der p 1 Der p 2 Der p 10 Der f 1 Der f 2

9 Einteilung in Proteinfamilien Cor a 1 Cor a 8 Cor a 9 Bos d 4 Gal d 1 Ves v 1 Bos d 5 Gal d 2 Ves v 2 Bos d 8 Gal d 3 Ves v 5 Pen a 1 Pen a 2 Pen a 3 Bet v 1 Bet v 2 Bet v 4 Bet v 6 Ara h 1 Ara h 2 Ara h 3 Ara h 8 Ara h 9 Fel d 1 Fel d 2 Fel d 3 Fel d 4 Phl p 7 Phl p 11 Phl p 12 Api m 1 Api m 2 Api m 3 Phl p 1 Phl p 2 Phl p 4 Phl p 5 Phl p 6 Der p 1 Der p 2 Der p 10 Der f 1 Der f 2

10 Einteilung in Proteinfamilien LTP PR 10- Proteine CCDs Speicherproteine Profiline

11 !!

12 ISAC

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14 ImmunoCAP ISAC - Praktische Durchführung

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16 Seit Oktober 2011 ist neue verbesserte Version des ImmunoCAP ISAC verfügbar

17 Allergenkomponenten Panel 51 Allergenquellen 20 neue Allergenkomponenten 4 Allergenkomponenten getauscht Von 103 zu 112: Alte Version 103 Neue ISAC Komponenten + 20 Alte Komponenten entfernt - 11 Gesamt 112

18 20 neue ImmunoCAP ISAC Komponenten Aus 8 neuen Allergenquellen: Aus 7 alten Allergenquellen: Walnuss (f256) njug r 1, njug r 2, njug r 3 Buchweizen (f11) nfag e 2 Weißer Gänsefuß (w10) rche a 1 Spitzwegerich (w9) rpla l 1 Blomia tropicalis (d201) rblo t 5 Lepidoglyphus destructor (d71) rlep d 2 Wespe (i3) rves v 5 Feldwespe (i4/ i77) rpol d 5 Erdnuss (f13) nara h 6, rara h9 Weizen (f4) rtri a14 Shrimp (f24) npen m2, npen m4 Olivenbaum (t9) nole e 7, nole e 9 Platane (t11) rpla a 3 Hund (e5) rcan f 5 Pferd (e3) requ c 1

19 Allergenkomponenten Panel 11 Komponenten wurden entfernt: Dau c 1 PR10 (Karrotte) abgedeckt durch andere PR 10-Proteine und kaum alleine positiv Ole e 2 profilin (Olivenbaum) abgedeckt durch andere Profiline, nie allein positiv Cyp c 1 parvalbumin (Karpfen) abgedeckt durch Gad c 1 vom Dorsch Pen a 1 Pen i 1 (Shrimp) abgedeckt durch Pen m 1 Eur m 2 (Hausstaubmilbe) abgedeckt durch Der p 2 und Der f 2 Asp f 2, Asp f 4 (Aspergillus) niedrige Prävelenz Bla g 4 (Schabe) niedrige Prävalenz, kaum die alleinig positive Schabenkomponente Tri a 18, Tri a gliadin (Weizen) niedrige Prävalenz 4 Komponenten wurden ausgetauscht: Bienengift (i1): rapi m 1 (CCD frei) statt napi m 1 CCD-Marker: MUXF3 statt nana c 2, bessere Performance nact d 8: ract d 8 npru p 3: rpru p 3

20 Performance ImmunoCAP ISAC Präzision Linearität Nachweisgrenze Spezifität Probenmaterial (Serum, Plasma) Interferenz bei hohem tige, hämolytischen und lipämischen Seren Vergleichbarkeit ISU - ku A /l Stabilität

21 Veränderungen ImmunoCAP ISAC Assay Mehr Probenvolumen notwendig (20µl 30µl) gleiche Waschlösung wie bei Phadia 250 Kürzer Kürzere Waschschritte Kürzere Inkubation Assayzeit ca. 3,7 Stunden (vorher 5,5 Stunden) Verlängerte Haltbarkeit (6 Monate nach Öffnung bei 2-8 C, wenn Folienbeutel wiederverschlossen und mit beigelegtem Trockenbeutel versehen wird.)

22 Gliederung 1) Molekulare Allergiediagnostik & ImmunoCAP ISAC 2) Fallbeispiele 3) Interpretation & Indikationen 4) Zusammenfassung

23 Nahrungsmittelallergie

24 21-jährige spanische Patientin: Ganzjährige Rhinoconjunctivitis allergica. Anaphylaxie nach Verzehr von verschiedenen Nahrungsmitteln.

25 21-jährige spanische Patientin: Ganzjährige Rhinoconjunctivitis allergica. Anaphylaxie nach Verzehr von verschiedenen Nahrungsmitteln. Lipid-Transfer-Proteine: Pfirsich Pru p 3 Haselnuss Cor a 8

26 Follow-up eines polysensibilisierten Patienten mit atopischem Ekzem über 18 Jahre mittels ImmunoCAP ISAC Borres M, 2011

27 Follow-up eines polysensibilisierten Patienten mit atopischem Ekzem über 18 Jahre mittels ImmunoCAP ISAC Borres M, 2011

28 Gliederung 1) Molekulare Allergiediagnostik & ImmunoCAP ISAC 2) Fallbeispiele 3) Interpretation & Indikationen 4) Zusammenfassung

29 Interpretationshilfen für ImmunoCAP ISAC Literatur (Artikelserie MA Allergo J; Sastre J Allergy 2010; etc. > 40 ImmunoCAP ISAC Publikationen) ImmunoCAP ISAC Xmap ImmunoCAP ISAC Xplain

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31 ImmunoCAP ISAC Xplain Alle ImmunoCAP ISAC Allergene Informationen zur Spezies-spezifität und Kreuzreaktivität Informationen zu typischerweise assoziierten Symptomen Angaben zu Verdauungs- und Hitzestabilität Ca. 100 Kommentare koordiniert von ca. 350 Regeln

32 Ziele von ImmunoCAP ISAC Xplain Reduktion des Interpretationsaufwand Zeitersparnis Qualitätskontrolle

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34 Indikationen

35 Indikationen komplizierte Patienten mit unklarer Befundlage Patienten mit Polysensibilisierung (Aufklärung von Kreuzreaktivitäten) V.a. IgE-vermittelte Allergie ohne anamnestischen Anhaltspunkt Anaphylaxieabklärung Pädiatrische Patienten (Kapillarblut!) expliziter Patientenwunsch

36 Zusammenfassung 1. Molekulare Allergiediagnostik = Verfeinerte Diagnostik auf Allergenebene 2. Liefert Informationen zu Sensibilisierungsprofilen, Risikoabschätzung & Kreuzreaktivitäten 3. Klinischer Nutzen von ImmunoCAP ISAC bei Screening komplizierter, polysensibilisierter Patienten, bei Kindern und bei Anaphylaxieabklärung 4. Xplain und Xmap sind als Interpretationshilfen verfügbar

37 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!

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