Blutgruppen, AB0-Systems, Antigen, Rhesus-Antigen, monoklonale Antikörper

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1 Bestimmung der AB0- und Rhesus-n TEAS - 00 Themen n, AB0-Systems, Antigen, Rhesus-Antigen, monoklonale Antikörper Prinzip Seit der Entdeckung der n des AB0-Systems durch Karl Landsteiner im Jahr 1900 und im Jahre 1940 des Rh-Systems konnten erstmals Bluttransfusionen mit einer großen Erfolgsquote durchgeführt werden. Vor der Transfusion ist eine genaue Bestimmung der n lebensnotwendig für den Empfänger, eine nicht passende Blutkonserve kann eine Hämolyse der Erythrozyten hervorrufen und zum Tod des Empfängers führen. Die ELDONCARDTM2511 ist ein primärer Test auf Erythrozyten- Antigene. Material Schülerset 1 Mikroliterpipette µl Spitzen palettiert in der Box Einweghandschuhe, mittel, Latex Einweg-Rührspatel, 500 Stk Wasser, destilliert 5 l Eldon-Karten zur nbestimmung Aufgaben 1. Bestimmen Sie die in einer EDTA-Blutprobe 2. Bestimmen Sie die in einer Kapillarblutprobe Abb. 1: P P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 1

2 TEAS Bestimmung der AB0- und Rhesus-n Durchführung Untersuchungsmaterial: EDTA-Blut Aufgabe 1: Untersuchung von Kapillarblut Öffnen Sie die Verpackung und entnehmen Sie eine Karte. Prüfen Sie, ob alle Testfelder farbige Flecken gleicher Größe zeigen. 1. Beschriften Sie die Karte mit den Patientendaten (wichtig - ansonsten Gefahr der Verwechslung!) Abb. 2: Wasser pipettieren 2. Pipettieren Sie 10 µl Wasser auf jedes Testfeld (Abb. 2) 3. Pipettieren Sie jeweils 30 µl der Blutprobe auf jedes Testfeld (Abb. 3). 4. Nehmen Sie einen Rührspatel und verrühren Sie Wasser und Patientenprobe gründlich auf dem ersten Testfeld, um die getrockneten Antikörper zu lösen. Dann verteilen Sie die Mischung auf dem ersten Testfeld (Abb. 4). Abb. 3: Blutprobe pipettieren Abb. 4: a) Mischen der Blutprobe b) Verteilen auf dem Testfeld 5. Verfahren Sie mit den Blutproben auf den anderen Testfeldern ebenso 6. Schwenken Sie die Eldoncard 40 sec vorsichtig kreisförmig, dann lesen Sie das Ergebnis ab (Abb. 5). Aufgabe 2: Untersuchung von Kapillarblut Abb. 5: Schwenken der Eldonkarte 2 PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P

3 Bestimmung der AB0- und Rhesus-n TEAS Es ändern sich nur die Schritte 2 und 3, siehe Abb. 6: 2. Pipettieren Sie 20 µl Wasser auf jedes Testfeld der Eldoncard. 3. Verfahren Sie bei der kapillären Blutentnahme nach der Anleitung im Kapitel Präanalytik. Nehmen Sie einen ausgetretenen Blutstropfen mit dem Rührstäbchen (Eldonstick) auf und übertragen ihn auf das erste Testfeld. Verfahren Sie mit jeweils einem neuen Rührstäbchen (Eldonstick) und den anderen Testfeldern genauso. Die folgenden Schritte sind die gleichen wie bei Methode 1 Abb. 6: Bestimmung mit Kapillarblut Grundlagen Seit der Entdeckung der n des AB0-Systems durch Karl Landsteiner im Jahr 1900 und im Jahre 1940 des Rh-Systems konnten erstmals Bluttransfusionen mit einer großen Erfolgsquote durchgeführt werden. Landsteiner benannte die von ihm entdeckten n nach den Antigenen, die sich auf der Oberfläche der Erythrozyten befinden, mit A, B, AB und 0 (keine n-antigene). Er fand heraus, dass im Blut immer Antikörper gegen die fehlenden Antigene gebildet werden (Landsteiner-Regel) A Antikörper gegen B-Antigene B Antikörper gegen A-Antigene AB keine Antikörper 0 Antikörper gegen A- und B-Antigene Als Rhesus-positiv bezeichnet man das Vorhandensein von Rhesus-Antigen D, z. B. A pos. (+). Vor der Transfusion ist eine genaue Bestimmung der n lebensnotwendig für den Empfänger, eine nicht passende Blutkonserve kann eine Hämolyse der Erythrozyten hervorrufen und zum Tod des Empfängers führen. Transfundiert werden in der heutigen Zeit fast ausschließlich gewaschene Erythrozyten-konzentrate, im Bedarfsfall kann natürlich auch eine Plasma- bzw. Thrombozytenspende erfolgen. Auch hierbei ist wegen der Antikörper auf eine sorgfältige Bestimmung zu achten! Die ELDONCARDTM2511 ist ein primärer Test auf Erythrozyten-Antigene. Je nach Landes- Gesetzgebung muss ein weiterer hiervon verschiedener Test zur Bestätigung durchgeführt werden. Die ELDONCARDTM2511 erfasst nicht die im Plasma vorhandenen Antikörper, für eine korrekte nbestimmung müssen auch diese zwingend mit einem weiteren Test bestimmt werden! Methode: P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 3

4 TEAS Bestimmung der AB0- und Rhesus-n Direkte Antigen-Antikörper-Reaktion. Die auf der Eldoncard aufgebrachten monoklonalen Antikörper (Typ IgM) reagieren direkt mit den Antigenen, auf den Erythrozyten der Blutprobe Auswertung Eine Agglutination beweist das Vorhandensein des Antigens: Wie auf Abbildung 7 deutlich zu sehen ist, gibt es nur auf dem ersten Feld (mit den Antikörpern gegen A) eine Agglutination, sowohl Anti-B, Anti-D und auch das Kontrollfeld zeigen keine Reaktion. Die gestestete Blutprobe hat also die A Rhesus negativ (A Rh neg.) Abb. 7: Auswertung und Dokumentation Das Kontrollfeld enthält keinen Antikörper sondern nur einen Phosphatpuffer, so wie er auf den anderen Testfeldern aufgebracht ist. Eine Agglutination auf diesem Kontrollfeld ist unspezifisch und bedeutet, dass der Test nicht ausgewertet werden kann. Eine nbestimmung kann in diesem Fall nur mit einem anderen System erfolgen. Da der Test nicht alle D-Varianten erfasst, muss die Patientenprobe im Falle eines Rhesus-negativen Ergebnisses mit weiteren Analysen untersucht werden. Testfeld Anti-A Testfeld Anti-B Testfeld Anti-D Kontrolle 0 pos + A pos + + B pos + + AB pos neg A neg + B neg + AB neg + + Das Ergebnis ist nicht gültig PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P

5 Bestimmung der AB0- und Rhesus-n TEAS Abb. 8: Beispiele für nbestimmungen mit der Eldoncard Fragen: - Welche n können mit der Eldoncard nachgewiesen werden? A B AB 0 Rhesus positiv Rhesus negativ - Welche Plasma-Antikörper werden von der ELDONCARD TM 2511 erfasst? Es werden keine der im Plasma vorkommenden Antikörper erfasst, nur die Erythrozyten-Antigene des AB0-Systems und das Rhesus-Antigen D. - Wozu dient das Kontrolltestfeld? Funktionsweise? P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 5

6 TEAS Bestimmung der AB0- und Rhesus-n Auf dem Kontrolltestfeld befindet sich kein Antikörper sondern nur farblich markierter Phosphatpuffer. Ist auf dem Kontrollfeld eine Agglutination der Blutprobe zu sehen, handelt es sich um eine unspezifische Reaktion, der Test ist ungültig. - Was bedeutet eine Agglutination auf dem Testfeld Anti-B, wenn alle anderen Testfelder eine homogene Verteilung der Blutprobe zeigen? Eine Agglutination auf dem Testfeld Anti-B zeigt die Reaktion der auf dem Testfeld aufgebrachten Antikörper gegen das n-antigen B an. Da auf den anderen Testfeldern keine Reaktion angezeigt wird, hat die Blutprobe die B Rh negativ. 6 PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P

7 Bestimmung der AB0- und Rhesus-n TEAS Protokoll Sie können Ihre Ergebnisse in die folgende Tabelle eintragen Patient Testfeld Anti-A Testfeld Anti-B Testfeld Anti-D Kontrolle Ergebnis Fragen - Was bedeutet eine Agglutination auf dem Testfeld Anti-B, wenn alle anderen Testfelder eine homogene Verteilung der Blutprobe zeigen? - Wozu dient das Kontrolltestfeld? Funktionsweise? P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 7

8 TEAS Bestimmung der AB0- und Rhesus-n - Welche Plasma-Antikörper werden von der ELDONCARD TM 2511 erfasst? - Welche n können mit der Eldoncard nachgewiesen werden? 8 PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P