Charm ROSA Technologie

Transkript

1 Rapid One Step Assay MCS Diagnostics BV Tel: Deutschland: Voorveld 16 Fax: Deutschland: NL-6071 RE Swalmen Web:

2 Antibiotika Arzneimittel, die gegen Bakterien und andere Mikroorganismen, nicht aber gegen Viren wirksam sind, indem sie sie entweder abtöten (bakterizide Antibiotika) oder in ihrem Wachstum hemmen (bakteriostatische Antibiotika).

3 Antibiotika Penicillin- Alexander Fleming 1928 Penicillin: Ursprüglich ein metabolisches Produkt von Penicillium Schimmelpilze

4 Antibiotika Antibiotikafamilien Betalaktame Tetracycline Macrolide Aminoglykoside Sulfonamide Amphenicole Gyrasehemmer Penicillin, Ampicillin, Cloxacillin Tetracyclin, Oxytetracyclin, Chlortetracyclin, Doxycyclin Erythromycin, Lincomycin, Spiramycin Streptomycin, dihydrostreptomycin, Gentamicin Sulfamethazin Chloramphenicol Enrofloxacin

5 Entwicklungszeitraum Antibiotika

6 Antibiotika Betalaktame Gemeinsames Kennzeichen ist der Betalaktamring

7 Antibiotika Peptidoglycan Betalaktam Peptidoglycan Synthese unterbrochen Zelle lysiert

8 Antibiotikafamilien Antibiotika

9 Antibiotika Penicillin Penicillinase (b Lactamase) Spaltet den Betalaktam Ring Antibiotikum wird unwirksam

10 Antibiotika Penicillin Die Gefahr Resistenzentwicklung Erhöhte Minimale HemmKonzentrationen Multi-Resistenz Methicillin, Vancomycin Antibiotikafamilien Resistenz Infektionen schwer zu bekämpfen Hohe Kosten

11 Antibiotika Resistenzbestimmung Agardiffusion Mikrodilution

12 Streifentechnologie Keine Probenvorbereitung Antibiotikanachweis nach internationalen Höchstmengen Aflatoxin M1 Nachweis 50ppt Mykotoxine DON, Zearalenone, Fumonisin, Aflatoxin B1 etc.

13 Testprinzip Kontrollinie Testlinie Kompetitive Rezeptortests Rezeptor Probekammer Antibiotika in der Probe und Antibiotika im Rezeptorgemisch konkurrieren um die Bindungsstellen des Rezeptors

14 Antibiotikum Milchprobe mit Antibiotikum Testlinie Kontrollinie T C Colloidales Gold Rezeptor Milchprobe OHNE Antibiotikum T C

15 Antibiotikum bindet am Rezeptor Milchprobe mit Antibiotikum T C Bindungsstellen Rezeptor nicht besetzt Milchprobe OHNE Antibiotikum T C

16 Milchprobe mit Antibiotikum T C Lateral flow Milchprobe OHNE Antibiotikum T C

17 Milchprobe mit Antibiotikum T C Lateral flow Milchprobe OHNE Antibiotikum T C

18 Milchprobe mit Antibiotikum T C Lateral flow Milchprobe OHNE Antibiotikum T C

19 Milchprobe mit Antibiotikum T C Lateral flow Milchprobe OHNE Antibiotikum T C

20 Milchprobe mit Antibiotikum T C Rezeptor bindet an Testlinie Milchprobe OHNE Antibiotikum T C

21 Milchprobe mit Antibiotikum T Rest Rezeptor bindet an Kontrollinie C Milchprobe OHNE Antibiotikum T C

22 Kann der Charm Test falsch negativ werden? T C Nein Keine Bindung am Rezeptor Test Positiv.

23 Schnelltests zum Nachweis von Antibiotika und Aflatoxin M1 Untersuchungszeit 1 8 Minuten Internationale Nachweisgrenzen EU MRL, USA SL, KIWI, Russland etc. Mehrere Gerätekonfigurationen EZ Reader, ROSA Reader

24 Nachweispriorität der Antibiotikafamilien 1. Betalaktame klassische und synthetische Antibiotika 2. Tetracycline Tetracyclin, Oxytetracyclin, Chlortetracyclin, Doxycyclin 3. Aminoglykoside Streptomycin, dihydrostreptomycin, Gentamicin 4. Makrolide 5. Sulfonamide Sulfamethazin 6. Chloramphenicol 7. Sonstige Antibiotika Enrofloxacin

25 Familie der Betalaktame Penicillin G Amoxicillin Ampicillin Cefacetril Cephalonium Cefazolin Cefoperazon Cefquinom Ceftiofur und Metaboliten Cephapirin Cloxacillin Dicloxacillin Oxacillin Klassisches Betalaktam Klassisches Betalaktam Klassisches Betalaktam Synthetisches Betalaktam Synthetisches Betalaktam Synthetisches Betalaktam Synthetisches Betalaktam Synthetisches Betalaktam Synthetisches Betalaktam Synthetisches Betalaktam Klassisches Betalaktam Klassisches Betalaktam Klassisches Betalaktam

26 Charm ROSA Betalaktam Tests Rezeptor Technologie Extrakt aus Bakterienzellwand PBP PBP = Penicillin Binding Protein Betalaktame zerstören die Zellwand von Mikroorganismen Alle Betalaktame besitzen einen Betalaktam Ring Vorteile Rezeptortechnologie: Alle Betalaktame werden in nur einem Untersuchungsvorgang nachgewiesen! Schnelle, spezifische Reaktion

27 (M)aximum (R)esidue (L)imit Maximal zulässige Konzentration eines Antibiotikums Betalaktam Codex/EU MRL Nachweisgrenze Amoxicillin Ampicillin Cefacetril Cephalonium Cefazolin Cefoperazon Cefquinom Ceftiofur und Metaboliten* Cephapirin Cloxacillin Dicloxacillin Oxacillin Penicillin G * metabolisiert sofort

28 Warum sollen Höchstmengen nicht überschritten werden? Resistenz klassische Betalaktame Resistenz synt. Betalaktame 2. Generation Resistenz synt. Betalaktame 3. Generation Resistenz Methicillin z.b. Penicillin, Ampicillin, Cloxacillin z.b. Cephapirin, Cefazolin z.b. Cefotaxim MRSA, ESBL

29 Charm ROSA Tetracycline Nach Betalaktamen die Nummer 2 in der Antibiotikastatistik Starke Resistenzentwicklung Resistenzproblem vorallem in Süd-Europa Erhöhte M(inimale) (H)emm (K)onzentrationen bzw. Resistenz der isolierten Mikroorganismen gegen Tetracycline

30 Anforderungen für Export nach Russland Betalaktame EU MRL = Rusland MRL Tetracycline Maximal 10ppb Gesamt-Tetracycline Streptomycin < 100 ppb Chloramphenicol < 0.1 ppb

31 Russland Export Tetracycline 2 Minutentest 3 Linien Kontrolle, Betalaktame und Tetracycline EU MRL (ppb) RF (ppb) Nachweisgrenze (ppb) Chlortetracyclin Doxycyclin Oxytetracyclin Tetracycline

32 Russland Export Streptomycin 8 Minutentest 2 Linien Kontrolle und Testlinie EU MRL (ppb) RF (ppb) Nachweisgrenze (ppb) Streptomycin

33 Russland Export Chloramphenicol 8 Minutentest 2 Linien Kontrolle und Testlinie EU MRL (ppb) RF (ppb) MRPL * (ppb) Chloramphenicol < < 0.3 * MRPL: Minimum Required Performance Limit

34 Antibiotikanachweis Milchgüteverordnung Monatlich mindestens zwei Untersuchungen zur Feststellung von Hemmstoffen nach den Bestimmungen der Amtlichen Sammlung von Untersuchungsverfahren nach 64 Abs. 1 des Lebensmittel- und Futtermittelgesetzbuches. Festgelegt vom Bundesamt für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit Rückstandshöchstgehalte werden in der EU in einem Gemeinschaftsverfahren festgesetzt EU MRL

35 Mikrobiologische Screeningtest Sporen von Bacillus Stearothermophilus Briljant Schwarz Redox Indikator BR Test Brilliantschwarz Reduktionstest Delvo Test Vergleichbar mit BR Test Copan Vergleichbar mit BR Test Charm Sciences Blue Yellow - Verbesserte Empfindlichkeit Alle Tests funktionieren nach dem gleichen Prinzip!

36 Charm ROSA Test vs Mikrob. Screeningtests Charm ROSA Test ist auf immunologischer Basis - Antigen ( Antibiotikum ) / Rezeptor Reaktion - z.b. Betalaktame und Tetracycline - Antigen ( Antibiotikum ) / Antikörper Reaktion - Chloramphenicol Screeningtests sind auf mikrobiologischer Basis Meistverbreitete Tests BR/Delvo

37 Milchgüteverordnung Charm ROSA Technologie Nachweis von Hemmstoffen in Sammelmilch; Agar-Diffusions-Verfahren ( z.b. Antibiotika, Immunglobuline, Lysozym ) (Brillantschwarz - Reduktionstest) 35 LMBG Begriffsdefinition: Eine Probe enthält Hemmstoffe, wenn sie nach dem festgelegten Verfahren das Wachstum des Testkeims und somit die Reduktion des dem Medium zugesetzten blauen Redoxindikators mindestens in gleicher Weise hemmt wie die Kontrolle mit 4 µg/kg Benzylpenicillin. Problem: Unterschiedliche MHK-Werte 4ppb Penicillin 200ppb Cefquinom ( MRL 20ppb )

38 Ergebnis mikrobiologische Screeningtests Wachstum Indikator nach gelb Hemmstoffe nicht nachweisbar Kein Wachstum Indikator ändert nicht Hemmstoffe nachweisbar

39 Positive Ergebnisse mikrob. Screening Tests u.a. durch: Antibiotika Immunologische Faktoren Erhöhte somatische Zellzahl Fettgehalt > 6% Interferenz durch natürliche Hemmstoffe Lysozym Lactoferrin Positive Ergebnisse nicht nur durch Antibiotika!

40 Nachweisgrenzen Charm ROSA und BR Test Betalaktam EU/ Codex MRL (ppb) Charm ROSA ( ppb ) BR ( ppb ) Amoxicillin Ampicillin Cefacetril N.D. Cefalexin Cephalonium Cefazolin Cefoperazon Cefquinom Ceftiofur und Metaboliten 100 / * Cefuroxim Cephapirin Cloxacillin Dicloxacillin Oxacillin Nafcillin Penicillin G * Keine Metaboliten ( Reybroeck ILVO)

41 Falsch negative Ergebnisse mikrob. Screening Tests u.a. durch: Nachweisgrenze für Antibiotika nicht ausreichend Synthetische Betalaktame u.a. Ceftiofur Metaboliten Cefquinom Cefalexin Cefuroxim

42 Falsch positive oder falsch negative Charm ROSA Ergebnisse? Falsch negative Ergebnisse nicht möglich wenn Antibiotikakonzentration >= Grenzwert ( limit of detection ) Falsch positive Ergebnisse können auftreten: Streifen ohne Deckel gelagert Luftfeuchtigkeit! Erhöhter Fettgehalt > 7%

43 Übereinstimmung von Hemmstoff positiven Milchproben Allgemein gute Übereinstimmung circa 97% Abweichung kann auftreten bei: Synthetische Betalaktam Antibiotika Nicht-Betalaktam Antibiotika Sonstige Hemmstoffe

44 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit