Zellblöcke und feste Bestandteile: Lösung L Problemfällen llen in der Zytologie

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1 Zellblöcke und feste Bestandteile: Lösung L von Problemfällen llen in der Zytologie Sonja Urdl und Sigurd Lax Institut für f r Pathologie LKH Graz West sonja.urdl@lkh-grazwest.at; sigurd.lax@lkh-grazwest.at

2 Gewinnungsarten - Zytologie Exfoliativzytologie: Bürstenabstriche oder Organabklatsche Ergüsse seröser Höhlen Liquor Spontangewinnung (Sputum, Harn) Lavagen (Bronchialsystem, Harnblase,...) Punktionszytologie: FNA von soliden Organen (Schilddrüse, Speicheldrüse, Lymphknoten etc.) EBUS (= endoskopischer bronchialer Ultraschall)

3 Methodenvergleich Zytologie Schonende Gewinnung Typisierung von Tumoren nur eingeschränkt möglich Begrenzte Möglichkeiten für weiterführende Analysen Histologie Genauere Aufarbeitung Morphologie oft aussagekräftiger Mehr Möglichkeiten für weiterführende Analysen (Fixierung, Einbettung,) Archivierung der Blöcke Ziel: Nützen der Vorteile beider Methoden

4 Zytologisches Material Verarbeitung in zytologischer Präparation Verarbeitung als histologische Probe Zellblock Fester Bestandteil (z.b. Erguss) Gerinnsel aus einer FNA (z.b.: EBUS)

5 Ergüsse Sind wechselnd zellreich (zellarm bis sehr zellreich) Werden primär zytologisch untersucht Können feste Bestandteile enthalten Zellblock für weiterführende Untersuchungen

6 Zytologische Verarbeitung: Zytospin 100µl in Kammer pipettieren 3 min. bei 960 RPM zentrifugieren Aufsatz abnehmen Zytospin lufttrocknen oder fixieren Zytospin lufttrocknen oder fixieren

7 Histologische Verarbeitung Einbetten eines festen Bestandteils in Paraffin, nach Formalinfixierung Anfertigen eines Zellblocks

8 Herstellung eines Zellblocks Bereitstellen des Gegengewichts Auswahl der Probe Zentrifugieren für 5 min. bei 4000RPM Plasma und Thrombin auf Raumtemperatur bringen

9 Herstellung eines Zellblocks Aussehen des Pellets Überstand abpipettieren und im Originalgefäß asservieren Pellet mit Öse quirlen Zugabe von 3gtt Plasma und 4gtt Thrombin

10 Herstellung eines Zellblocks Gerinnsel mit Formalin überschichten Probe gerinnt Gerinnsel Von der Wand lösen Gerinnsel in Kapsel einbetten

11 Durchführung: hrung: EBUS Nadel im Lymphknoten sichtbar Aufsetzen der Spritze Lockern der Nadelschraube Lockern der Nadelschraube Saugwirkung ein Aufsetzen der Spritze Saugwirkung aus

12 Durchführung: hrung: EBUS Nadel Biopsiekanal mit Nadel Material aus der Nadel Material aus der Nadel

13 Zytologische Verarbeitung Material wird auf OT ausgestrichen Ausstriche werden fixiert

14 Histologische Verarbeitung Gerinnsel wird mit der Pinzette in Formalin überführt Gerinnsel in 4%igem Formalin Gerinnsel wird eingebettet

15 Die Lösung..

16 Exakte Diagnose: Schlüssel zur optimalen Therapie Metastasen bzw. Ergüsse können sich vor dem Primärtumor manifestieren Metastasen können erst nach Jahren auftreten Zweitmalignome auszuschließen Exakte Diagnose ist die Basis für die optimale Therapie

17 Frage 1: Dignität Zytologie Benigne (A) Suspekt (B) Maligne (C) Keine weitere Maßnahme Zellblock + Immunhistochemie

18 Fortsetzung Frage 1: Dignität DD Benigne/ maligne Zellblock + Immunhistochemie Calretinin Reaktiv verändertes Mesothel Mesotheliom Karzinom Ber-EpB4 (Adeno-) Karzinom Ki-67

19 Frage 2: Herkunft der Tumorzellen (Primärtumor) DD Maligne Zellblock + Immunhistochemie Antikörper CK7, CK20 TTF1, Napsin Cdx2 NCAM (CD56) WT1 CK5/6, p63 ER, Mammaglobin, GCDFP 15 Herkunft Organsysteme Lunge (Schilddrüse) Colon,, DünndarmD neuroendokrin Ovar,, Tube Plattenepithel, Myoepithelien Mamma

20 Zytokeratine (CK) Wesentliche Bestandteile des Zytoskelets Verschiedene Subtypen (1-20; Katalog nach R. Moll; nach Molekulargewicht) Organspezifische Verteilung: CK5/6: Basalzellen, Plattenepithel CK7: Drüsenepithel CK 8: Leber, Niere CK20: intestinal CK1,5,6,14: HMW; CK8,18: LMW Hilfreich bei Typisierung von Karzinomen

21 Weitere Marker: Beispiele TTF1: Thyroid transcription factor 1 Pneumozyten, Follikelepithel Schilddrüse; pulm. Adenokarzinome (>90%), foll.+pap. Schilddrüsenkarzinome Cdx2: caudal type homöobox transcription factor Intestinale Tumoren (colorektal), Magenkarzinome NCAM (CD56): neural cell adhesion molecule Neuroendocrine Tumoren (SCLC), Ewing, etc. GCDFP-15, Mammaglobin: Proteine in Mammaepithel- und Mammakarzinomzellen WT1: Wilms tumor 1 Tubenepithel, Peritoneum, Pleura Seröse Adenoca (>Uterus); Mesotheliome Mart1 (Melan A): melanoma antigen recognized by T cells Nävuszellen, Maligne Melanome

22 Maligner Pleuraerguß (Pleurakarzinose) Primäre Lungenkarzinome Adenoca, Kleinzeller, Plattenepithelca Karzinommetastasen Gastrointestinaltrakt Colon, Magen, Pankreas Ovarien, Mamma Maligne Lymphome Malignes Mesotheliom Malignes Melanom

23 Fall 1: w, 91 J., einseitiger Pleuraerguss rechts, langsam progredient, makroskopisch hämorrhagisch Zytologie: Zellen eines Adenokarzinoms Diff-Quick Diff-Quick

24 Zellblock für weiterführende Untersuchungen Immunhistochemie: CK7+/ TTF-1+/CK20-/cdx2- Adenokarzinom der Lunge CK7 TTF-1

25 EGFR Testing aus Zellblock: Basis für targeted therapy Mutation L858R im Exon 21 (aktivierend)

26 Fall 2: w, 83 J., St.p. lobuläres Mammakarzinom vor 4 J., ÖR+++/PR+, Her2 nicht amplifiziert, einseitiger Pleuraerguss links Zytologie: reichlich Karzinomzellen Diff-Quick Diff-Quick

27 Fall 2: Zellblock für weiterführende Untersuchungen Zellblock H.E.

28 Fall 2: Pleurakarzinose des Mammakarzinoms Immunhistochemie am Zellblock Calretinin GCDFP-15

29 Fall 2: Biomarker am Zellblock ÖR und PR negativ, Ki %, Her2 Score 2+, nicht amplifiziert Ki67 (MIB1) Her-2 neu

30 Maligner Aszites (Peritonealkarzinose) Metastasen Gastrointestinaltrakt (Colon, Magen, Pankreas, Gallenwege) Weibliches Genitale (Ovar/Tube, Uterus) Mamma Primäres Peritonealkarzinom ( Ovar) Malignes Mesotheliom Maligne Lymphome

31 Fall 3: m, 57 J., Aszites unklarer Genese Zytologie: maligne Tumorzellen Diff-Quick Diff-Quick

32 Fall 3: Siegelringzellkarzinom Zellblock: Bestätigung der Siegelringzellen HE

33 Fall 3: Magenkarzinom, diffuser Typ nach Lauren Zellblock PAS BerEp4

34 Fall 4 w, 64 J. Dickdarmkarzinom (pt4g2n1m1) intraoperativ Aszites mit atypischen Zellen Diff-Quick

35 Fall 4: atypische Zellen im Aszites Zellblock HE

36 Fall 4: Colonkarzinomzellen im Aszites Immunhistochemie am Zellblock BerEp4 CK20

37 Fall 5 m, 74 J. dialysepflichtige Niereninsuffizienz einseitiger Pleuraerguss Zytologie Giemsa

38 Fall 5: Zytologisch atypische lymphoide Zellen Zellblock

39 Diagnose mittels Immunhistochemie: Diffuses großzelliges B-Zell Lymphom CD20 Ki-67 Bcl-2 c-myc

40 Tumoren in mediastinalen Lymphknoten (EBUS Material) Karzinommetastasen Lunge Gastrointestinaltrakt Genitale (Ovarien, Uterus, Prostata) HNO Bereich, Schilddrüse Harntrakt Maligne Lymphome

41 Lymphknotenmetastasen aus der Lunge (EBUS Material) Adenokarzinome Kleinzellige Karzinome Plattenepithelkarzinome Großzellige Karzinome Hochdifferenzierte neuroendokrine Karzinome (Karzinoid/atypisches Karzinoid)

42 Fall 1: Zytologie EBUS w, 72 J. Verdacht auf zentrales Bronchuskarzinom rechts Lymphknotenbulk Eingang zum Mittellappenbronchus PAP

43 Fall 1: Fester Bestandteil Lungenmetastase eines Mammakarzinoms (OP vor 10 J.) ÖR Mammaglobin

44 Fall 2: Zytologie w, 74 J., St. p. Melanom-OP Expansion im Oberlappen der rechten Lunge Bronchoskopisch- bioptisch: Adenokarzinom, G2 Vergrößerte Lymphknoten

45 Fall 2: Fester Bestandteil Metastase des bekannten Adenokarzinoms der Lunge

46 Fall 3 w, 71J., Expansion im Oberlappen rechts vergröß ößerte Lymphknoten rechts hilär klin. susp.. N. bronchi Durchführung hrung eines EBUS Zytologie PAP

47 Fall 3: Fester Bestandteil

48 Fall 3: Fester Bestandteil EBUS Metastase eines Adenokarzinoms der Lunge TTF-1

49 Diagnostische Hilfe durch Immunhistochemie Adenokarzinom Lunge Kleinzelliges Karzinom CK7+, CK20-(+), TTF1+ NCAM+, CK dot-like Plattenepithelkarzinom CK5/6+, p63+ Mesotheliom Metastase Colonca Calretinin+, BerEpB4-, WT1+, D2-40+, CK5/6+ CK7-, CK20+, cdx2+ Metastase Magenca Metastase Mammaca Metastase Ovarialca Metastase Melanom CK7+, CK20+(-), cdx2+/- CK7+, CK20-, ER+(-), Mammaglobin+(-), GCDFP15+(-) CK7+, CK20-(+), WT1+, ER+(-) Melan A+, HMB45+, S100+, CK-

50 Cave: Immunhistochemie ist kein Schwarz-Weiss Muster!

51 Es gibt Ausnahmen

52 Immunhistochemie für r die DD der Lungenkarzinome: Tumortyp CK7 TTF-1, Napsin CK5/6 P63 NCAM Chromo Synapto Adeno Plattenepithel Kleinzeller (+) (+) Großzeller -/ /+ - Karzinoid

53 Molekulare Diagnostik am FB/ Zellblock: Prädiktiv für r Therapie Her2/neu ISH (FISH, CISH, SISH) Mammakarzinom, Magenkarzinom K-RAS Kolorektales Karzinom EGFR nicht-kleinzelliges Lungenca Diverse Translokationen (FISH) Lymphome Sarkome

54 Pathologie LKH Graz West: Zunehmende Bedeutung des Zellblocks ( emerging( market ) Diagramm Zellblock Entwicklung

55 Take Home Message Untersuchung aller festen Bestandteile Zellblock hilft bei der Lösung von Problemfällen in Zytologie (Ergänzung) Zellblock ermöglicht weiterführende Untersuchungen (IHC, Molekularpatho) IHC am Zellblock und festen Bestandteil ist wichtige diagnostische Hilfe Molekularpatho am Zellblock und FB: Basis für zielgerichtete Tumortherapie

56 Danke für f r Ihre Aufmerksamkeit!