Hong Kong Institute of Medical Laboratory Sciences Quality Assurance Programme Survey: Four (2013)

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1 Hong Kong Institute of Medical Laboratory Sciences Quality Assurance Programme Survey: Four (2013) Major Sponsors

2 HONG KONG INSTITUTE OF MEDICAL LABORATORY SCIENCES QUALITY ASSURANCE PROGRAMME Anatomical Pathology INSTRUCTIONS 1. All tests should be performed as soon as possible after the receipt of the specimens. 2. The survey material should be treated, as far as possible, like a patient specimen. 3. The survey material should be treated as potentially hazardous and standard laboratory safety precautions should be taken as usual in your laboratory. 4. The survey is consisted of two parts. The first part is to evaluate the technical performance of your laboratory. The second part is a questionnaire relating to the techniques used in the first part of survey. To complete the survey, you should send back the stained slides together with appropriate controls, and the questionnaire for statistical analysis and compilation of results. 5. Unless otherwise specified, all survey material had been fixed in 10% buffered formalin and paraffin embedded. 6. Do NOT forward any particulars of your laboratory except your assigned confidential Laboratory Code. Late return will be counted as not done and the results will NOT be accepted for assessment and statistical analysis. All stained slides should be placed inside the slide mailers provided. Return the slide mailers and completed questionnaire in the enclosed envelope to the following address not later than the date specified on the questionnaire: For further enquiry, please contact HKIMLSQAP Ltd. Phone: (852) Fax: (852) The Chairman Hong Kong Institute of Medical Laboratory Sciences Quality Assurance Programme Ltd. P.O. Box No KOWLOON CENTRAL POST OFFICE CONFIDENTIALITY HKIMLSQAP keeps all details of participants confidential and will not disclose them to a third party, unless required by legislation, without the prior consent of the participant.

3 SURVEY Four (2013) PART A - TECHNICAL PERFORMANCE HISTOLOGICAL STAINING OPTION Section I Histopathology You are provided with two paraffin sections, which had been fixed in 10% buffered formalin. Perform the following staining methods and return the STAINED SECTIONS for assessment. HC1319 HC1320 Stain with your routine H&E method Stain with Alcian Blue Method for demonstration of acid mucins Section II Cytopathology HC1321 You are provided with a liquid base smear, which had been 95% alcohol-fixed and stained with Papanicolaou s method. Please see the patient particulars provided (according to the Slide No.) on page 3 of the Return Form and complete Section II of the Part B - Questionnaire. Please return the smear together with the Return Form. IMMUNOHISTOCHEMISTRY OPTION Evaluation of SYN Demonstration HC1322 HC1323 You are provided with 25 l neat mouse monoclonal anti-syn antibody (R1). The recommended dilution is (1:10-1:20). Stain the slide provided with this diluted antibody and your routine immunohistochemistry detection system. You are provided with a paraffin section, stain the slide with your in-house anti-syn antibody and your routine immunohistochemistry detection system. Annual Continuous Assessment of Laboratory Performance Evaluation of AE1/3 Demonstration HC1324 You are provided with 25 l neat monoclonal mouse anti AE1/3 antibody (R2). The recommended dilution is (1:25-1:50). Stain the slide provided with this diluted antibody and your routine immunohistochemistry detection system. ** POSITIVE CONTROLS ARE REQUIRED BUT NOT FOR ASSESSMENT. Please label the slides with the corresponding test code and your confidential Laboratory Code for identification purposes. Put not more than two slides in one mailer in each return.

4 HONG KONG INSTITUTE OF MEDICAL LABORATORY SCIENCES QUALITY ASSURANCE PROGRAMME Histopathology and Cytology RETURN FORM Laboratory Code: Date of Return: on or before 20 November 2013 PART B - QUESTIONNAIRE SECTION I: HISTOPATHOLOGY Please answer the following questions: 1. What is the section thickness for your routine mucin stain? 3 µm 4 µm 5 µm 6 µm Others (please state) 2. Under usual practice in your laboratory, which ph of alcian blue solution will be used for staining acid mucins? Others (please state) 3. How long do you keep the working alcian blue solution? 1 month 6 months 1 year Others (please state) 4. What counterstain will be used for staining mucins? 5. What staining method does your laboratory currently used for the demonstration of acid mucins?

5 6. Your routine histochemical procedure : Alcian Blue method Reagent % / Composition Time Temp ( o C) Alcian Blue % min. ph Counterstain used: % min.

6 SECTION II: CYTOPATHOLOGY Laboratory Code: 1. Please state the slide number that you received and your diagnosis. Dot the suspicious cells (if any) on the slide. Slide HC1321 No. Diagnosis 2. What is your comment on the smear provided (if any)? Patients Clinical Data : Specimen Nature: sputum ThinPrep smear fixed in 95% ethanol and stained with Papanicolaou s method. No Sex Age Clinical History 1 F 60 cough 2 M 72 Lung shadow 3 F 67? Ca Lung 4 M 70? Lung mass 5 M 79? Ca lung 6 M 70 Lung shadow 7 F 78 Chest X-ray shadow 8 M 84 Lung shadow 9 F 58 BSS 10 F 72 Lung shadow 11 M 76? Ca Lung 12 F 58 Blood stained sputum 13 F 61 Lung shadow 14 M 79 cough 15 F 65 cough 16 M 74? Ca Lung 17 F 66 Chest X-ray shadow 18 M 55 BSS 19 M 69 PTB 20 F 33? Ca Lung

7 HONG KONG INSTITUTE OF MEDICAL LABORATORY SCIENCES QUALITY ASSURANCE PROGRAMME Histopathology and Cytology RETURN FORM Laboratory Code: Date of Return: on or before 20 November 2013 Your immunohistochemistry conditions: PART B - QUESTIONNAIRE STEP HC1322 (SYN Supplied) HC1323 (SYN in-house) HC1324 (AE1/3 antibody) Supplier DAKO DAKO Dilution 1: 1: 1: Peroxidase Blocking min. min. min. Antigen retrieval: Trypsinization Microwave YES / NO YES / NO YES / NO Pressure cooking PT module min. min. min. Detection System Duration of Colour Development DAB min. DAB min. DAB min. End product Colour Enhancement (if any) min. min. min. END

8 Monoclonal Mouse Anti-Synaptophysin Clone SY38 Code No./ Code/ Code-Nr. M 0776 Edition/ Edition/ Ausgabe ENGLISH Intended use For in vitro diagnostic use. Monoclonal Mouse Anti-Synaptophysin, Clone SY38, is intended for use on human tissue in immunocytochemistry. The antibody labels presynaptic vesicles of various kinds of neurons, and hence is well-suited for the demonstration of synapses (1). Additionally, the antibody is a useful tool for the identification of a wide spectrum of neuroendocrine neoplasms of the neural type, including neuroblastomas, ganglioneuroblastomas, ganglioneuromas, pheochromocytomas, and paragangliomas. Moreover, the antibody detects synaptophysin in neuroendocrine neoplasms of epithelial type, e.g. pancreatic islet-cell neoplasms, medullary thyroid carcinomas, pituitary and parathyroid adenomas, and bronchopulmonary and gastrointestinal tract carcinoids (2, 3, 4). In addition to bronchopulmonary carcinoids, the antibody also identifies neuroendocrine differentiation in lung cancer as demonstrated by its reactivity with cell lines, e.g. from small cell lung cancer, extrapulmonary small cell carcinomas, and non-small cell lung cancers (5). Differential identification is aided by the results from a panel of antibodies. Interpretation must be made within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist. Synonym for antigen Protein p38 (6). Introduction Reagent provided Synaptophysin is an acidic, homo-oligomeric, integral membrane glycoprotein (monomer = 38 kda), originally isolated from presynaptic vesicles of rat brain (1). The protein is a component of the classic, nerve-terminal exo-endocytotic recycled small synaptic vesicles (SSV), which are present in almost all neurons and regarded as neuron-specific organelles with no equivalent in non-neuronal cells (6). However, apart from the SSV-localization in neurons, synaptophysin is also widespread distributed on small pleiomorphic vesicles, but not on secretory granules, in a variety of neuroendocrine cells (3, 6). Monoclonal mouse antibody provided in liquid form as purified IgG from ascitic fluid. In 0.05 mol/l Tris/HCl, 15 mmol/l NaN 3, 1% bovine serum albumin, ph 7.2. Clone: SY38 (1). Isotype: IgG1, kappa. Mouse IgG concentration: see label on vial. Immunogen Crude fractions of coated vesicles from bovine brain (1). Specificity Precautions Storage In Western blotting of a fraction of synaptic vesicles of bovine brain, the antibody labels a band of Mr Similar results were obtained with corresponding fractions from human, mouse and rat brain (1). Electron microscopy shows that the antibody almost exclusively labels synaptic termini in brain and spinal cord, and specifically decorates the cytoplasmic surfaces of the presynaptic nm vesicles (1). The epitope recognized by the antibody is located to a pentapeptide repeat structure in the carboxy-terminal cytoplasmic tail of synaptophysin (7). As demonstrated by immunocytochemistry, the antibody cross-reacts with the synaptophysin-equivalent protein in man, cow, mouse, rat (1), guinea pig (8), and rabbit (9). 1. For professional users. 2. This product contains sodium azide (NaN 3), a chemical highly toxic in pure form. At product concentrations, though not classified as hazardous, sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build-ups of metal azides. Upon disposal, flush with large volumes of water to prevent metal azide build-up in plumbing. 3. As with any product derived from biological sources, proper handling procedures should be used. Store at 2-8 C. Do not use after expiration date stamped on vial. If reagents are stored under any conditions other than those specified, the user must verify the conditions. There are no obvious signs to indicate instability of this product. Therefore, positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens. If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected, contact our Technical Services. Specimen preparation Paraffin sections: The antibody can be used for labelling paraffin-embedded tissue sections fixed in formalin or Bouin s solution (2, 3, 10). Pre-treatment of tissues with heat-induced epitope retrieval is required. For tissues fixed in formalin, optimal results are obtained with 10 mmol/l citrate buffer, ph 6.0, or 10 mmol/l Tris buffer, 1 mmol/l EDTA, ph 9.0. Less optimal results are obtained with Dako Target Retrieval Solution, High ph, code No. S 3308, or Dako Target Retrieval Solution, code No. S Pre-treatment of tissues with proteinase K was found inefficient. The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunocytochemical staining procedure. Frozen sections and cell preparations: The antibody can be used for labelling frozen sections (2, 3). Staining procedure Performance characteristics Dilution: Monoclonal Mouse Anti-Synaptophysin, code No. M 0776, may be used at a dilution range of 1:10-1:20 when applied on formalinfixed, paraffin-embedded sections of human carcinoid, and using 20 minutes heat-induced epitope retrieval in 10 mmol/l citrate buffer, ph 6.0, and 30 minutes incubation at room temperature with the primary antibody. Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation method, and should be determined by each individual laboratory. The recommended negative control is Dako Mouse IgG1, code No. X 0931, diluted to the same mouse IgG concentration as the primary antibody. Unless the stability of the diluted antibody and negative control has been established in the actual staining procedure, it is recommended to dilute these reagents immediately before use, or dilute in Dako Antibody Diluent, code No. S Positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimen. Visualization: DAKO LSAB +/HRP kit, code No. K 0679, and DAKO EnVision +/HRP kits, code Nos. K 4004 and K 4006, are recommended. For frozen sections and cell preparations, the Dako APAAP kit, code No. K 0670, is a good alternative if endogenous peroxidase staining is a concern. Follow the procedure enclosed with the selected visualization kit. Automation: The antibody is well-suited for immunocytochemical staining using automated platforms, such as the Dako Autostainer. Cells labelled by the antibody display a cytoplasmic staining pattern, occasionally revealing a punctate or granular pattern. ( ) M 0776/EFG/HEW/ p. 1/4 Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tel Fax CVR No

9 Normal tissues: In human brain, spinal cord and muscle, the antibody labels neuronal structures, notably at the synapses (1). In pancreas, all islet cells (10), and in pituitary gland, all five adenohypophysial cell types are positive (4). With the exception of nervous and neuroendocrine tissue, and adrenal medulla, all tissues tested (kidney, liver, small intestine, oesophagus, muscle, thymus, testes and ovary) are negative (1, 2, 3). Abnormal tissues: In paraffin-embedded tissue, 10/12 neuroblastomas, 2/2 ganglioneuroblastomas, 6/6 ganglioneuromas, 14/14 pheochromocytomas, 12/12 paragangliogliomas and 3/4 medulloblastomas were labelled by the antibody (3). Additionally, 56/57 pancreatic neuroendocrine tumours (10), 9/9 medullary thyroid carcinomas, 15/17 bronchial and 8/18 gastrointestinal tract carcinoids were positive (3). In formalin-fixed paraffin-embedded pituitary adenomas of different types, 29/35 were positive (4). In lung cancer cell lines, 70% classic small cell lung cancer (SCLC), 57% of variant SCLC and 75% extrapulmonary SCLC were labelled by the antibody (5). All of a large number of benign and malignant non-neuroendocrine epithelial neoplasms, including malignant melanomas (0/11), were negative (3). FRANÇAIS Intérêt Pour diagnostic in vitro. Monoclonal Mouse Anti-Synaptophysin, Clone SY38, est destiné à être utilisé en immunocytochimie sur les tissus humains. L'anticorps marque les vésicules présynaptiques de différents types de neurones et il est donc bien adapté pour la mise en évidence des synapses (1). L'anticorps est également utile pour l'identification d'une grande variété de néoplasmes neuroendocriniens de type neural, notamment les neuroblastomes, les ganglio-neuroblastomes, les ganglioneuromes, les phéochromocytomes et les paragangliomes. En outre, l anticorps détecte la synaptophysine dans les néoplasmes neuroendocriniens de type épithélial, par exemple les néoplasmes des cellules de îlots pancréatiques, les carcinomes thyroïdiens médullaires, les adénomes hypophysaires et parathyroïdiens et les carcinoïdes des tractus broncho-pulmonaire et gastro-intestinal (2, 3, 4). En plus des carcinoïdes broncho-pulmonaires, l'anticorps permet également d'identifier la différentiation neuroendocrinienne dans le cancer du poumon, comme le montre sa réactivité avec les lignées cellulaires provenant par exemple du cancer du poumon à petites cellules, des cancers à petites cellules extrapulmonaires et des cancers du poumon non à petites cellules (5). L'identification différentielle est facilitée par les résultats d'un panel d'anticorps. L'interprétation des résultats doit être faite par un professionnel qualifié dans le contexte de l'histoire clinique du patient et des autres examens diagnostics. Synonyme de l'antigène Protéine p38 (6). Introduction Réactif fourni La synaptophysine est une glycoprotéine membranaire intégrale homo-oligomérique acide (monomère = 38 kda) isolée pour la première fois à partir de vésicules présynaptiques de cerveau de rat (1). La protéine est un élément des petites vésicules synaptiques recyclées exo-endocytotiques neuroterminales classiques (SSV), qui sont présentes dans presque tous les neurones et considérées comme des organites neurone-spécifiques sans équivalent dans les cellules non neuronales (6). Cependant, en plus de la localisation neuronale des SSV, la synaptophysine est aussi largement distribuée dans les petites vésicules pléomorphes, mais pas dans les granules sécrétoires, de diverses cellules neuroendocriniennes (3, 6) Anticorps monoclonal de souris à l'état liquide sous forme d'igg purifiée dans un liquide ascitique. Dans Tris/HCl à 0,05 mol/l, NaN 3 à 15 mmol/l, sérum-albumine bovine à 1%, ph 7,2. Clone: SY38 (1). Isotype: IgG1, kappa. Concentration en IgG de souris: Voir l'étiquette sur le flacon. Immunogène Fractions brutes de vésicules à manteau de cerveau de bœuf (1). Spécificité Précautions d'emploi Conservation Préparation de l'échantillon En transfert de type Western d'une fraction de vésicules synaptiques de cerveau de bœuf, l'anticorps marque une bande de Mr. Des résultats similaires ont été obtenus avec les fractions correspondantes de cerveau humain, de souris et de rat (1). La microscopie électronique montre que l'anticorps marque presque exclusivement les terminaisons synaptiques du cerveau et de la moelle épinière et colore spécifiquement les surfaces cytoplasmiques des vésicules présynaptiques de nm (1). L'épitope reconnu par l'anticorps est situé sur une structure pentapeptidique répétée de l'extrémité cytoplasmique carboxy-terminale de la synaptophysine (7). Comme on peut le démontrer par immunocytochimie, l'anticorps montre une réaction croisée avec la protéine équivalente à la synaptophysine chez l'homme, la vache, la souris, le rat (1) le cochon d'inde (8) et le lapin (9). 1. Pour utilisateurs professionnels. 2. Ce produit contient de l'azide de sodium (NaN 3), un produit chimique hautement toxique à l'état pur. Bien qu il ne soit pas classé comme dangereux aux concentrations présentes dans le produit, l'azide de sodium est susceptible de réagir avec les parties en plomb et en cuivre des tuyauteries pour former des dépôts hautement explosifs d'azides métalliques. Lors de l'élimination du produit, rincer avec de grandes quantités d eau pour éviter toute accumulation d'azides métalliques dans la tuyauterie. 3. Comme pour tout produit d'origine biologique, des procédures de manipulation appropriées doivent être utilisées. Conserver entre 2 C et 8 C. Ne pas utiliser après la date de péremption indiquée sur le flacon. Si les réactifs sont conservés dans des conditions autres que celles préconisées, les conditions doivent être vérifiées par l'utilisateur. Aucun signe visible n indique l instabilité du produit. Par conséquent, des contrôles positifs et négatifs doivent être traités simultanément avec les échantillons du patient. En cas de résultats imprévus qui ne peuvent pas être expliqués par des changements de procédures de laboratoire et si un problème avec le produit est suspecté, contacter nos Services Techniques. Coupes en paraffine: L'anticorps peut être utilisé pour marquer les coupes incluses en paraffine, fixées au formol ou par fixateur de Bouin (2, 3, 10). Le prétraitement des tissus par restauration de l'épitope induite par la chaleur est requis. Pour les tissus fixés au formol, des résultats optimaux sont obtenus avec un tampon citrate à 10 mmol/l, ph 6,0, ou un tampon Tris à 10 mmol/l, EDTA 1 mmol/l, ph 9,0. Des résultats moins optimaux sont obtenus avec Dako Target Retrieval Solution, High ph, code S 3308 ou Dako Target Retrieval Solution, code S Le pré-traitement des tissus par la protéinase K est inefficace. Les coupes de tissus ne doivent pas sécher pendant le traitement ou la procédure d'immunomarquage qui suit. Coupes congelées et préparations cellulaires: L'anticorps peut être utilisé pour le marquage des coupes congelées (2, 3). Procédure d'immunomarquage Dilution: Monoclonal Mouse Anti-Synaptophysin, code M 0776, peut être dilué entre 1:10 et 1:20 pour utilisation sur des coupes de carcinoïde humain incluses en paraffine, fixées au formol, avec une restauration de l'épitope induite par la chaleur pendant 20 minutes dans le tampon citrate à 10 mmol/l, ph 6,0, et 30 minutes d'incubation à température ambiante avec l'anticorps primaire. Les conditions optimales peuvent varier selon l'échantillon et la méthode de préparation, et elles doivent être déterminées par chaque laboratoire. Le contrôle négatif recommandé est Dako Mouse IgG1, code X 0931, ajusté à la même concentration en IgG de souris que l'anticorps primaire. A moins que la stabilité de l'anticorps dilué et du contrôle négatif n'ait été établie pour la procédure d'immunomarquage en cours, il est recommandé de diluer les réactifs juste avant l'utilisation ou de diluer dans Dako Antibody Diluent, code S Des contrôles positifs et négatifs doivent être traités simultanément avec les échantillons du patient. Révélation: La trousse DAKO LSAB +/HRP, code K 0679, et les trousses DAKO EnVision +/HRP, codes K 4004 et K 4006 sont recommandées. Pour les coupes congelées et préparations cellulaires, la trousse Dako APAAP, code K 0670, constitue une ( ) M 0776/EFG/HEW/ p. 2/4 Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tel Fax CVR No

10 bonne alternative si le marquage par la peroxydase endogène est à craindre. Suivre la procédure figurant dans la trousse de révélation choisie. Automatisation: L'anticorps est bien adapté au marquage immunocytochimique sur des plates-formes automatisées, telles que Dako Autostainer. Performances Les cellules marquées par l'anticorps montrent un profil de coloration cytoplasmique et présentent parfois un profil ponctué ou granulaire. Tissus normaux: Dans le cerveau, la moelle épinière et le muscle humains, l'anticorps marque les structures neuronales, notamment aux synapses (1). Dans les pancréas, toutes les cellules des îlots (10) et dans l'hypophyse, les cinq types de cellules antéhypophysaires sont positives (4). A l'exception des tissus nerveux et neuroendocriniens et de la médullosurrénale, tous les tissus testés (rein, foie, intestin grêle, œsophage, muscle, thymus, testicule et ovaire) sont négatifs (1, 2, 3). Tissus anormaux: Dans les tissus inclus en paraffine, 10/12 neuroblastomes, 2/2 ganglioneuroblastomes, 6/6 ganglioneuromes, 14/14 phéochromocytomes, 12/12 paragangliogliomes et 3/4 médulloblastomes ont été marqués par l'anticorps (3). De plus, 56/57 tumeurs neuroendocriniennes pancréatiques (10), 9/9 cancers médullaires de la thyroïde, 15/17 carcinoïdes bronchiques et 8/18 carcinoïdes du tractus gastro-intestinal ont été positifs (3). 29 cas sur 35 d adénomes hypophysaires de différents types, inclus en paraffine et fixés au formol se sont montrés positifs (4). Dans les lignées cellulaires de cancer du poumon, 70% des cancers du poumon classiques à petites cellules (SCLC), 57% de variants SCLC et 75 % de SCLC extra-pulmonaires ont été marqués par l anticorps (5). Un nombre important de néoplasmes épithéliaux non neuroendocriniens malins et bénins, y compris les mélanomes malins (0/11), ont tous été négatifs. DEUTSCH Zweckbestimmung Zur Verwendung für In-vitro-Untersuchungen. Monoclonal Mouse Anti-Synaptophysin, Clone SY38, ist zur immunzytochemischen Untersuchung menschlicher Gewebeproben bestimmt. Der Antikörper markiert präsynaptische Vesikel verschiedener Arten von Nervenzellen und eignet sich somit zum Nachweis von Synapsen (1). Darüber hinaus kann der Antikörper bei der Identifizierung eines breiten Spektrums neuroendokriner Neoplasmen des neuralen Typs nützlich sein, einschließlich von Neuroblastomen, Ganglioneuroblastomen, Ganglioneuromen, Phäochromozytomen und Paragangliomen. Außerdem weißt der Antikörper Synaptophysin in neuroendokrinen Neoplasmen des epithelialen Typus nach, wie z. B. Pankreasinselzell- Neoplasmen, medulläre Schilddrüsenkarzinome, hypophysäre Adenome, Nebenschilddrüsenadenome, bronchopulmonale Karzinoide und Karzinoide des Gastrointestinaltrakts (2, 3, 4). Neben bronchopulmonalen Karzinoiden identifiziert der Antikörper ebenso eine neuroendokrine Differenzierung bei Lungenkarzinom, was sich in seiner Reaktiviität mit Zelllinien zeigt, wie z. B. solchen von kleinzelligen Lungenkarzinomen, extrapulmonären kleinzelligen Karzinomen und nicht-kleinzelligen Lungenkarzinomen. Die Differenzialdiagnose wird durch die mit einem Antikörper-Panel erhaltenen Resultate unterstützt. Die Interpretation muss unter Berücksichtigung der klinischen Anamnese des Patienten und im Kontext weiterer diagnostischer Verfahren durch einen erfahrenen Pathologen erfolgen. Synonyme Bezeichnung Protein p38 (6). des Antigens Einleitung Geliefertes Reagenz Synaptophysin ist ein azidisches, homo-oligomeres, membranintegriertes Glykoprotein (Monomer = 38 kd), das ursprünglich aus den präsynaptischen Vesikeln des Rattenhirns isoliert wurde (1). Das Protein ist eine Komponente der klassischen kleinen synaptischen Vesikel (small synaptic vesicles, SSV), die in den Nervenendigungen durch Exo- und Endozytose recycled werden und die in fast allen Neuronen vorhanden sind und als für Nervenzellen spezifische Organellen angesehen werden, für die es in nicht-neuronalen Zellen kein Äquivalent gibt (6). Abgesehen von der SSV-Lokalisation in Nervenzellen, ist Synaptophysin jedoch bei unterschiedlichen neuroendokrinen Zellen ebenfalls ubiquitär auf kleinen pleomorphen Vesikeln verteilt, nicht jedoch auf sekretorischen Granula (3, 6). Der monoklonale Mausantikörper wird in flüssiger Form als gereinigtes IgG aus Aszitesflüssigkeit geliefert. In 0,05 mol/l Tris/HCl, 15 mmol/l NaN 3, 1 % bovinem Serumalbumin, ph 7,2. Klon: SY38 (1). Isotyp: IgG1, Kappa. Maus-IgG-Konzentration: Siehe Produktetikett. Immunogen Rohe Fraktionen beschichteter Vesikel aus Rinderhirn (1). Spezifität Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen Lagerung Probenvorbereitung Beim Westernblotting einer Fraktion synaptischer Vesikel aus Rinderhirn markiert der Antikörper eine Bande von Mr. Ähnliche Ergebnisse wurden mit entsprechenden Fraktionen aus Human-, Maus- und Rattenhirn erhalten (1). Elektronenmikroskopisch wird sichtbar, dass der Antikörper fast ausschließlich synaptische Termini im Gehirn und Rückenmark markiert und die zytoplasmatischen Oberflächen der präsynaptischen nm Vesikel spezifisch dekoriert (1). Das vom Antikörper erkannte Epitop befindet sich in der sich wiederholenden Pentapeptidstruktur im carboxyterminalen zytoplasmatischen Schwanz von Synaptophysin. (7). Es wurde der immunzytochemische Nachweis erbracht, dass der Antikörper beim Menschen, bei Kuh, Maus, Ratte (1), beim Meerschweinchen (8) und beim Kaninchen (9) mit dem Synaptophysin-äquivalenten Protein eine Kreuzreaktion eingeht. 1. Für geschultes Fachpersonal. 2. Dieses Produkt enthält Natrium-Azid (NaN 3), eine in reiner Form hochtoxische chemische Verbindung. Bei den in diesem Produkt verwendeten Konzentrationen kann Natrium-Azid, obwohl nicht als gefährlich klassifiziert, mit in Abflussrohren enthaltenem Blei oder Kupfer reagieren und zur Bildung von hochexplosiven Metall-Azid-Anreicherungen in den Abflussrohren führen. Nach der Entsorgung muss mit reichlich Wasser nachgespült werden, um Metall-Azid-Anreicherung in den Abflussrohren zu vermeiden. 3. Wie bei allen aus biologischen Materialien gewonnenen Produkten müssen die ordnungsgemäßen Handhabungsverfahren eingehalten werden. Bei 2 8 C lagern. Nicht nach dem auf dem Fläschchen angegebenen Verfallsdatum verwenden. Sollten die Reagenzien unter anderen Bedingungen als den beschriebenen aufbewahrt worden sein, so müssen diese vom Anwender verifiziert werden. Es gibt keine offensichtlichen Anhaltspunkte für die mögliche Instabilität dieses Produktes. Es sollten daher die Positiv- und Negativkontrollen gleichzeitig mit den Patientenproben mitgeführt werden. Wenn unerwartete Verfärbung beobachtet wird, welche durch Änderungen in den Labormethoden nicht erklärt werden kann, und falls Verdacht auf ein Problem mit dem Antikörper besteht, ist bitte Kontakt mit unserem technischen Kundendienst aufzunehmen. Paraffinschnitte: Der Antikörper kann für die Färbung von paraffineingebetteten, in Formalin oder Bouin-Fixativ fixierten Gewebeschnitten genutzt werden (2, 3,10). Eine Vorbehandlung der Gewebe mit hitzeinduzierter Epitopdemaskierung ist erforderlich. Für formalinfixierte Gewebe werden mit 10 mmol/l Citratpuffer, ph 6,0, oder mit 10 mmol/l Trispuffer, 1 mmol/l EDTA, ph 9,0, optimale Ergebnisse erzielt. Weniger gute Ergebnisse werden mit Dako Target Retrieval Solution, ph 9,9, Code Nr. S 3308, oder Dako Target Retrieval Solution, ph 6,1, Code-Nr. S 1700, erzielt. Die Vorbehandlung der Gewebe mit Proteinase K hat sich als ineffzient erwiesen. Während der Gewebevorbehandlung oder während der sich anschließenden immunzytochemischen Färbeprozedur dürfen die Gewebeschnitte nicht austrocknen. ( ) M 0776/EFG/HEW/ p. 3/4 Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tel Fax CVR No

11 Gefrierschnitte und zytologische Präparate: Der Antikörper kann zur Markierung von Gefrierschnitten verwendet werden (2, 3). Färbeprozedur Leistungseigenschaften Verdünnung: Monoclonal Mouse Anti-Synaptophysin, Code-Nr. M 0776, kann in einem Verdünnungsbereich von 1:10 1:20 eingesetzt werden, wenn es für formalinfixierte, paraffineingebettete Schnitte humaner Karzinoide genutzt wird und wenn 20 Minuten lang die hitzeinduzierte Epitopdemaskierung in 10 mmol/l Citrat-Puffer, ph 6,0, durchgeführt wird, gefolgt von 30minütiger Inkubation mit dem primären Antikörper bei Raumtemperatur. Die optimalen Bedingungen schwanken je nach Probe und Methode der Probenherstellung und sollten von jedem einzelnen Labor bestimmt werden. Als Negativkontrolle wird Dako Mouse IgG1, Code-Nr. X 0931 empfohlen, das auf dieselbe Maus-IgG-Konzentration wie der primäre Antikörper verdünnt worden ist. Solange mit dem eigentlichen Testsystem die Stabilität des verdünnten Antikörpers und der Negativkontrolle nicht sichergestellt ist, wird empfohlen, diese Reagenzien unmittelbar vor Gebrauch zu verdünnen oder die Verdünnung mit Dako Antibody Diluent, Code-Nr. S 0809, vorzunehmen. Die Positiv- und Negativkontrollen sollten gleichzeitig mit den Patientenproben mitgeführt werden. Visualisierung: Folgende Kits werden empfohlen: DAKO LSAB +/HRP-Kit, Code-Nr. K 0679, und DAKO EnVision +/HRP-Kits, Code- Nr. K 4004 und K Falls bei Gefrierschnitten und Zellpräparaten Probleme mit endogener Peroxidasefärbung auftreten, bietet der Dako APAAP Kit, Code-Nr. K 0670, eine gute Alternative. Dem Verfahren folgen, das in den Anleitungen des für die Visualisierung ausgewählten Kits beschrieben wird. Automatisierung: Der Antikörper ist gut für das immunzytochemische Färben unter Nutzung automatisierter Plattformen wie beispielsweise des Autostainer von Dako geeignet. Durch den Antikörper markierte Zellen zeigen ein zytoplasmatisches Färbemuster und erbringen gelegentlich ein punktförmiges oder granuläres Muster. Normalgewebe: Im menschlichen Gehirn, im Rückenmark und im Muskel markiert der Antikörper neuronale Strukturen, vor allem an den Synapsen (1). Im Pankreas, in allen Inselzellen (10) und in der Hypophyse sind alle fünf adenohypophysären Zelltypen positiv (4). Mit Ausnahme des Nervengewebes, des neuroendokrinen Gewebes und der adrenalen Medulla sind alle getesteten Gewebe (Niere, Leber, Dünndarm, Ösophagus, Muskel, Thymus, Testes und Ovarien) negativ (1, 2, 3). Anomales Gewebe: In paraffineingebetteten Geweben wurden 10/12 Neuroblastome, 2/2 Ganglioneuroblastome, 6/6 Ganglioneurome, 14/14 Phäochromocytome, 12/12 Paragangliogliome und 3/4 Medulloblastome durch den Antikörper markiert (3). Darüber hinaus waren 56/57 pankreatische neuroendokrine Tumoren (10), 9/9 medulläre Schilddrüsenkarzinome und 15/17 Bronchial- und 8/18 Magen-Darm- Trakt-Karzinome positiv. (3). In formalinfixierten, paraffineingebetteten Hypophysenadenomen verschiedenen Typs waren 29 von 35 Fällen positiv (4). In Lungentumorzelllinien markierte der Antikörper 70% des klassischen kleinzelligen Lungentumorgewebes (small cell lung cancer, SCLC), 57% verschiedener SCLC und 75% extrapulmonaler SCLC (5). Aus einer großen Anzahl benigner und maligner nichtneuroendikriner Neoplasmen, einschließlich maligner Melanome (0/11) waren alle Proben negativ (3). References/ Références/ Literatur 1. Wiedenmann B, Franke WW. Identification and localization of synaptophysin, an integral membrane glycoprotein of M r 38,000 characteristic of presynaptic vesicles. Cell 1985;41: Wiedenmann B, Franke WW, Kuhn C, Moll R, Gould VE. Synaptophysin: A marker protein for neuroendocrine cells and neoplasms. Proc Natl Acad Sci (USA) 1986;83: Gould VE, Wiedenmann B, Lee I, Schwechheimer K, Dockhorn-Dworniczak B, Radosevich JA, et al. Synaptophysin expression in neuroendocrine neoplasms as determined by immunocytochemistry. Am J Pathol 1987;126: Stefaneanu L, Ryan N, Kovacs K. Immunocytochemical localization of synaptophysin in human hypophyses and pituitary adenomas. Arch Pathol Lab Med 1988;112: Jensen SM, Gazdar AF, Cuttitta F, Russell EK, Linnoila RI. A comparison of synaptophysin, chromogranin, and L-dopa decarboxylase as markers for neuroendocrine differentiation in lung cancer cell lines. Cancer Res 1990;50: Navone F, Jahn R, Di Gioia G, Stukenbrok H, Greengard P, De Camilli P. Protein p38: An integral membrane protein specific for small vesicles of neurons and neuroendocrine cells. J Cell Biol 1986;103: Knaus P, Betz H. Mapping of a dominant immunogenic region of synaptophysin, a major membrane protein of synaptic vesicles. FEBS Lett 1990; 261: Metz J, Gerstheimer FP, Herbst M. Distribution of synaptophysin immunoreactivity in guinea pig heart. Histochemistry 1986;86: Hoog A, Gould VE, Grimelius L, Franke WW, Falkmer S, Chejfec G. Tissue fixation methods alter the immunohistochemical demonstrability of synaptophysin. Ultrastruct Pathol 1988;12: Chejfec G, Falkmer S, Grimelius L, Jacobsson B, Rodensjö M, Wiedenmann B, et al. Synaptophysin. A new marker for pancreatic neuroendocrine tumors. Am J Surg Pathol 1987;11: Explanation of symbols/ Légende des symboles/ Erläuterung der Symbole Catalogue number Référence du catalogue Bestellnummer Temperature limitation Limites de température Zulässiger Temperaturbereich Manufacturer Fabricant Hersteller In vitro diagnostic medical device Dispositif médical de diagnostic in vitro In-Vitro-Diagnostikum Consult instructions for use Consulter les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Batch code Code du Lot Chargenbezeichnung Use by Utiliser jusque Verwendbar bis ( ) M 0776/EFG/HEW/ p. 4/4 Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tel Fax CVR No

12 Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin Clones AE1/AE3 ENGLISH Code M3515 Intended use For In Vitro Diagnostic Use. Monoclonal mouse anti-human Cytokeratin, clones AE1/AE3 is intended for laboratory use to identify qualitatively by light microscopy two epitopes present on a majority of epithelial cytokeratins in acetone-fixed frozen and formalin-fixed, paraffin-embedded tissue using immunohistochemical (IHC) test methods. Positive results aid in the classification of normal and neoplastic tissue as epithelial in origin 1-3 and serve as an adjunct to conventional histopathology. The clinical interpretation of any positive staining or its absence should be complemented by morphological and histological studies with proper controls. Evaluations should be made within the context of the patient's clinical history and other diagnostic tests by a qualified individual. Summary and explanation Cytokeratins are a family of water-soluble proteins with molecular weights between kd that form the cytoskeleton of epithelial cells. At least 19 different cytokeratins have been identified and can be divided into two subfamilies. Subfamily A comprises relatively acidic cytokeratins (with a pi under 5.5) whereas members of subfamily B have a relatively basic pi of 6 or over. Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for: 1) Principle of Procedure, 2) Materials Required, Not Supplied, 3) Storage, 4) Specimen Preparation, 5) Staining Procedure, 6) Quality Control, 7) Troubleshooting, 8) Interpretation of Staining, 9) General Limitations. Reagent provided Monoclonal Mouse antibody provided in liquid form as tissue culture supernatant in 0.05 mol/l Tris-HCl, ph 7.2 and mol/l sodium azide. This product contains stabilizing protein. Clones: AE1/AE3 1,2 Isotype: IgG 1, kappa Mouse lgg concentration mg/l: See label on vial. M3515 may be used at a dilution of 1:50 when performing IHC using the EnVision, EnVision Doublestain or LSAB2 detection systems. These are guidelines only. Optimal antibody concentrations may vary depending on specimen and preparation method and should be determined by each individual laboratory. The protein concentration between lots may vary without influencing the optimal dilution. The titer of each individual lot is compared and adjusted to a reference lot to ensure a consistent immunohistochemical staining performance from lot-to-lot. Immunogen Human epidermal callus 1 Specificity AE1/AE3 is a cocktail of two monoclonal antibodies that were obtained by immunizing mice with human callus keratins. 2 AE1/AE3 has been shown to identify the majority of human cytokeratins and thus may be used as a tool for the positive IHC identification of cells of simple and stratified epithelial origin. 1,2,4 Antibody AE1 immunoreacts with an antigenic determinant present on most of the subfamily A cytokeratins, including cytokeratins with Moll's designation 4 10, 13, 14, and 19 (MWs of 56.5, 54', 50, 50', 48 and 40 kd, respectively) but not on Nos. 12, 17 and 18 (55, 47 and 45 kd). 4 Antibody AE3 reacts with an antigenic determinant shared by the subfamily B cytokeratins including Nos. 1 and 2, 3, 4, 5, 6, 7 and 8 (MWs of 65, 67, 64, 59, 58, 56, 54 and 52 kd, respectively). 5 Materials required, but not supplied Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining and/or the detection system instructions. Precautions 1. For professional users. 2. This product contains sodium azide (NaN 3), a chemical highly toxic in pure form. At product concentrations, though not classified as hazardous, NaN 3 may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build-ups of metal azides. Upon disposal, flush with large volumes of water to prevent metal azide build-up in plumbing As with any product derived from biological sources, proper handling procedures should be used. 4. Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin. 5. Unused reagents should be disposed of according to local, State, and Federal regulations. Storage Store at 2 8 C. Do not use after expiration date s tamped on vial. If reagents are stored under any conditions other than those specified, the conditions must be verified by the user. There are no obvious signs to indicate instability of this product. Therefore, positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens. If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected, contact Dako Technical Support. ( ) EFG_003 p. 1/7

13 Specimen preparation Paraffin Sections AE1/AE3 can be used on formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections. Tissue pretreatment for epitope enhancement is required. Either digestion using proteolytic enzymes or heat-induced epitope retrieval is effective. The following enzymes can be used for pretreatment of formalin-fixed, paraffin-embedded tissues: Proteinase K, RTU (code S3020), Pepsin (code S3002), or Proteolytic Enzyme, RTU (code S3007). Rinse thoroughly with distilled water and continue with the staining procedure of the detection system instructions. As an alternative to enzyme pretreatment, heat-induced epitope retrieval can be used. Heat-induced epitope retrieval involves immersion of tissue sections in a pre-heated buffer solution and maintaining heat, either in a water bath (95 99 C ), a steamer (95 99 C) or an autoclave (121 C). For greater adherence of tissue sections to glass slides, the use of Silanized Slides (code S3003) is recommended. Target Retrieval Solution (code S1700) or 10x Concentrate (code S1699) is recommended using a 20-minute heating protocol. After thermal treatment, allow the jar with buffer and slides to cool for 20 minutes at room temperature. Rinse well with buffer. Cryostat Sections and Cell Smears AE1/AE3 can be used for labelling acetone-fixed cryostat sections or fixed cell smears. Staining procedure Follow the procedure for the detection system selected. Staining interpretation The cellular staining pattern for AE1/AE3 is cytoplasmic. Product specific limitations 1. Extrafollicular reticulum cells of lymph nodes, tonsil and spleen have been shown to react with antibodies to cytokeratin The presence of cytokeratin 19 and possibly 8 has been confirmed in smooth muscle cells of the uterus Rare melanomas 9 and leiomyosarcomas 8 may stain positive. This finding is usually more pronounced on frozen tissue rather than formalin-fixed tissue. 10 Therefore; it is recommended that AE1/AE3 be used in a panel with HMB45 (when ruling out melanomas) and desmin (when ruling out leiomyosarcomas) as these latter antibodies lack specificity for epithelial cells. 4. False-positive staining of glial cells in tumors has been reported on formalin-fixed, paraffin-embedded tissue when proteolytic pretreatment was employed. It was shown by immunocytochemical and biochemical methods that these cells and tumors do not express cytokeratins Pinkus et al. 12 stressed the importance of proteolytic digestion of formalin-fixed tissues to be stained with AE1/AE3. Photos of stained tissues depicted include the results when digestion with trypsin II was omitted, other trypsin enzymes were used and/or when suboptimal digestion techniques were applied. In the latter cases, only 2/12 epithelial neoplasms of various types exhibited optimal staining for cytokeratin. By reviewing conflicting cytokeratin immunoreactivities in earlier publications and comparing the same with their own, Pinkus et al. 12 considered many previously false-negative cases attributable to one or several of these short-comings. 6. From a comparison of AE1/AE3 with an anti-epithelial membrane antigen (EMA) antibody in an IHC study of 87 neoplasms, including 48 adenocarcinomas of various types, Pinkus et al. 13 concluded that the cytokeratin proteins in proteolytically treated formalin-fixed tissues and as stained by AE1/AE3 were more reliable markers in 33% of the cases of epithelial derived neoplasms than anti-ema. However, because EMA was positive and AE1/AE3 negative in 9% of the cases, it was recommended that AE1/AE3 and anti-ema be used as complementary reagents. 7. Although no false-positive staining was reported by Listrom and Dalton, 14 faint cytoplasmic staining was observed in 2/2 plasmacytomas, 2/4 melanomas and 2/7 lymphomas and considered to be the result of nonspecific background staining. Performance characteristics Normal Tissues Testing of 30 different normal tissues demonstrated positive staining in the cytoplasm of squamous and columnar epithelium of the cervix, colon, esophagus, skin, small intestine, stomach and tonsil. Other tissues that stained included glandular tissue (mammary, parathyroid, prostate sweat and thyroid), astrocyte, white matter of the cerebellum, glial filaments of the cerebrum, distal tubule and Bowman s capsule of the kidney, bile duct, pneumocytes, bronchi, mesothelium, interlobular duct of the pancreas, anterior pituitary cell, interlobular duct and acinar cells of the salivary gland, reticular cells and Hassall s bodies of the thymus, and endometrium and smooth muscle of the uterus. 15 Negative staining was noted for adrenal, bone marrow, heart, pericardium, peripheral nerve, skeletal muscle, spleen and testis. AE1/AE3 reacts with keratinized (56.5/65-67) and corneal (55/64) epidermis, stratified squamous epithelia of internal organs (51/59), stratified epithelia (50/58), hyperproliferative keratinocytes (48/56) and simple epithelia (45/52 and 46/54). The 40 kd keratin is present in most epithelia except adult epidermis. 3,4 Abnormal Tissues In pathological tissues, Listrom and Dalton 14 tested clones AE1/AE3 on over 60 poorly differentiated epithelial neoplasms, lymphomas, melanomas and sarcomas. Except for staining of only 2/6 cases of small cell carcinoma and 3/5 transitional cell carcinoma, the study found all of 34 epithelial neoplasms to stain positively. When positive, AE1/AE3 stained transitional cell carcinomas only weakly and staining of the tumor cells was either diffusely cytoplasmic or perinuclear. Montag et al. 16 found AE1/AE3 to be a sensitive reagent for the differential diagnosis of diffuse malignant mesothelioma of the sarcomatoid (spindle-cell) type (positive in 30/30 cases) from other types of spindle cell neoplasms (0/49). When compared with anti-ema in a study of 87 neoplasms, including 48 adenocarcinomas of various types, Pinkus et al. 13 found AE1/AE3 to stain 33% of the cases more reliably than the anti-ema. Although 3/3 cases of chondroid chordoma and 1/8 cases of lymphoma were reactive with anti-ae1/ae3, no positive staining was observed among 25 non-epithelial neoplasms including 4 cases each of melanoma and glioblastoma. 14 No cytokeratin was detected in 8 cases of nonepithelial tumors, including melanoma, lymphoma, neurofibroma, and sarcoma when AE1/AE3 was used in the immunoblot technique. 17 However, it was recommended 14 that AE1/AE3 serve as a member of an antibody panel for the determination of cell lineage in cases of poorly differentiated small cell neoplasms. ( ) EFG_003 p. 2/7

14 FRANÇAIS Code M3515 Intérêt Pour diagnostic in vitro. Monoclonal mouse anti-human Cytokeratin, clone AE1/AE3 est destiné à être utilisé en laboratoire afin d identifier qualitativement par microscopie optique deux épitopes présents sur une majorité de cytokératines épithéliales dans les tissus inclus en paraffine, fixé à l'acétone, congelé et fixé au formol, ceci en utilisant les méthodes d analyse immunohistochimiques (IHC). Des résultats positifs facilitent la classification du tissu normal et néoplasique d origine épithéliale 1-3 et servent de complément à l histopathologie classique. L interprétation clinique de tout marquage positif ou de toute absence doit être complétée par des études morphologiques et histologiques à l aide de témoins appropriés. Les évaluations doivent être réalisées uniquement par un professionnel agréé dans le contexte de l'historique clinique du patient et d'autres examens. Résumé et explication Les cytokératines sont une famille de protéines solubles dans l eau de poids moléculaire allant de 40 à 70 kd formant le cytosquelette des cellules épithéliales. Au moins 19 cytokératines différentes ont été identifiées et peuvent être réparties en deux sous-familles. La sousfamille A comprend des cytokératines relativement acides (à un pl inférieur à 5,5) alors que les membres de la sous-famille B ont un pl relativement basique de 6 ou plus. Se référer aux Instructions générales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du système de détection concernant les procédures IHC pour : 1) Principe de procédure, 2) Matériaux requis mais non fournis, 3) Conservation, 4) Préparation des échantillons, 5) Procédure de coloration, 6) Contrôle qualité, 7) Dépannage, 8) Interprétation de la coloration, 9) Limites générales. Réactif fourni Anticorps monoclonal de souris fourni sous forme liquide comme surnageant de culture tissulaire dans un tampon Tris-HCl à 0,05 mol/l, de ph 7,2, contenant de l'azide de sodium à 0,015 mol/l. Ce produit contient une protéine stabilisante. Clone: AE1/AE3 1,2 Isotype: IgG 1, kappa Concentration en lgg de souris mg/l: Voir l étiquette sur le flacon. M3515 peut être dilué à 1:50 lorsque l HC est accompli en utilisant EnVision, EnVision Doublestain ou LSAB 2 detection systems. Ces informations ne sont délivrées qu à titre indicatif. Les concentrations d anticorps optimales peuvent varier selon l échantillon et la méthode de préparation et doivent être déterminées par chaque laboratoire particulier. La concentration en protéines peut varier d un lot à l autre sans que cela influence la dilution optimale. Le titre de chaque lot est comparé et ajusté par rapport à un lot de référence pour assurer des performances de coloration immunohistochimiques cohérentes d un lot à l autre. Immunogène Cal épidermique humain 1 Spécificité AE1/AE3 est un cocktail de deux anticorps monoclonaux obtenus en immunisant des souris avec des kératines calleuses humaines. 2 AE1/AE3 a montré pouvoir identifier la majorité des cytokératines humaines et par conséquent, il peut servir d outil pour l'identification positive par IHC des cellules simples et stratifiées d'origine épithéliale. 1,2,4 L'anticorps AE1 montre une immunoréaction à un déterminant antigénique présent sur la plupart des cytokératines de sous-famille A, y compris les cytokératines numérotées selon la désignation de Moll par 4 10, 13, 14, 15, 16 et 19 (Poids moléculaire de 56.5, 54', 50, 50', 48 et 40 kd, respectivement) mais non pour les numéros : 12, 17 et 18 (55, 47 et 45 kd). 4 L Anticorps AE3 montre une immunoréaction à un déterminant antigénique commun à la sous-famille des cytokératines B comprenant les numéros : 1 et 2, 3, 4, 5, 6, 7 et 8 (Poids moléculaire de 65, 67, 64, 59, 58, 56, 54 et 52 kd, respectivement). 5 Matériaux requis, mais non fournis Se référer aux Dako s Instructions Générales relatives à la procédure de Marquage Immunohistochimique et/ou aux instructions du système de détection. Précautions 1. Pour utilisateurs professionnels. 2. Ce produit contient de l azide de sodium (NaN 3), produit chimique hautement toxique dans sa forme pure. Aux concentrations du produit, bien que non classé comme dangereux, le NaN 3 peut réagir avec le cuivre et le plomb des canalisations pour former des azides métalliques hautement explosifs. Lors de l élimination, rincer abondamment à l eau pour éviter toute accumulation d azide métallique dans les canalisations Comme avec tout produit d origine biologique, respecter les procédures de manipulation appropriées. 4. Porter un vêtement de protection approprié pour éviter le contact avec les yeux et la peau. 5. Les réactifs non utilisés doivent être éliminés conformément aux réglementations locales et nationales. Conservation Conserver entre 2 et 8 C. Ne pas utiliser après la date de péremption imprimée sur le flacon. Si les réactifs sont conservés dans des conditions autres que celles indiquées, celles-ci doivent être validées par l utilisateur. Il n y a aucun signe évident indiquant l instabilité de ce produit. Par conséquent, les contrôles positifs et négatifs doivent être testés en même temps que des échantillons de patient. Si une coloration inattendue est observée, qui ne peut être expliquée par un changement des procédures du laboratoire, et en cas de suspicion d un problème lié à l anticorps, contacter l assistance technique de Dako. ( ) EFG_003 p. 3/7

15 Préparation de l échantillon Coupes en paraffine AE1/AE3 peut être utilisé sur des coupes de tissues incluses en paraffine, fixées au formol. Le prétraitement du tissu pour la restauration de l épitope est requis. La digestion utilisant les enzymes protéolytiques ou la restauration de l épitope par la chaleur sont toutes les deux efficaces. Les enzymes suivantes peuvent être utilisées dans le prétraitement des tissus inclus en paraffine, fixés au formol. Proteinase K, RTU (code S3020), Pepsin (code S3002), ou Proteolytic Enzyme, RTU (code S3007). Rincer minutieusement avec de l'eau distillée et poursuivre avec la procédure d'immunomarquage selon les instructions du système de détection. Comme alternative au prétraitement enzymatique, une restauration de l épitope par la chaleur peut être utilisé. La restauration de l épitope par la chaleur exige l immersion des coupes de tissus dans une solution tampon préchauffée et maintenue à température, soit dans un bainmarie (95 à 99 C), soit dans un four à vapeur (95 à 99 C), soit dans un autoclave (121 C). Pour une adhérence efficace des coupes de tissus aux lames de verre, l usage de Silanized Slides (code S3003) est requis. Target Retrieval Solution (code S1700) ou 10x Concentrate (code S1699) nécessite un protocole de chauffage de 20 minutes. Suite au traitement thermique, laisser refroidir la fiole avec tampon et lames pendant 20 minutes à température ambiante. Rincer parfaitement à l aide du tampon. Coupes Cryostat et Frottis Cellulaires AE1/AE3 peut être utilisé pour le marquage des coupes cryostat fixées à l acétone ou des frottis cellulaires fixés. Procédure d immunomarquage Suivre la procédure du système de détection choisi. L interprétation du marquage Le modèle de marquage cellulaire pour AE1/AE3 est cytoplasmique. Limites spécifiques du produit 1. Les Cellules réticulaires extrafolliculaires des ganglions lymphatiques, de l amygdale et de la rate ont montré une réaction aux anticorps à la cytokératine La présence de cytokératine 19 et probablement 8 a été confirmée sur les cellules du muscle lisse de l'utérus Des mélanomes rares 9 et léiomyosarcomes 8 peuvent être marqués positivement. Ce résultat est généralement plus prononcé sur le tissu congelé que sur le tissu fixé au formol. 10 Par conséquent, il est recommandé que AE1/AE3 soit utilisé dans un panel avec HMB45 (mélanomes exclus) et avec desmine (léiomyosarcomes exclus) étant donné que ces derniers anticorps manquent de spécificité pour les cellules épithéliales. 4. Un marquage faux-positif des cellules gliales dans les tumeurs a été observé sur tissu inclus en paraffine, fixé au formol lorsqu'un prétraitement protéolytique était utilisé. Il a été démontré par des méthodes immunocytochimiques et biochimiques que ces cellules et tumeurs n expriment pas de cytokératines Pinkus et Al. 12 ont souligné l importance de la digestion protéolytique des tissus fixés au formol à marquer au AE1/AE3. Des photos des tissus marqués présentent les résultats lorsque la digestion à la trypsine II était omise, lorsque d autres enzymes trypsine étaient utilisées et/ou lorsque des techniques de digestion sous-optimales étaient appliquées. Dans le dernier cas, seuls 2/12 des néoplasmes épithéliaux de types variés ont montré un marquage optimal à la cytokératine. En examinant les immunoréactivités contradictoires de la cytokératine dans les publications passées et en les comparant à la leur, Pinkus et Al 12 ont considéré plusieurs cas précédemment faux-négatifs comme attribuables à l une ou à plusieurs de ces imperfections. 6. En comparant AE1/AE3 avec un anticorps de l antigène de la membrane anti-épithéliale (EMA) dans une étude IHC de 87 néoplasmes, comprenant 48 adénocarcinomes de types variés, Pinkus et Al. 13 ont conclu que les protéines de cytokératine dans les tissus à traitement protéolytique fixés au formol et marqués par AE1/AE3 étaient des marqueurs plus fiables dans 33% des cas de néoplasmes à dérivation épithéliale que les anti-ema. Cependant, comme dans 9% des cas, EMA était positif et AE1/AE3 était négatif, il est recommandé d utiliser AE1/AE3 et anti-ema comme réactifs complémentaires. 7. Bien qu aucun marquage faux-positif n ait été reporté par Listrom et Dalton, 14 un marquage cytoplasmique faible a été observé dans 2 cas sur 2 de plasmacytomes, 2 cas sur 4 de mélanomes et 2 cas sur 7 de lymphomes et ce marquage a été considéré comme étant le résultat d un marquage de fond non spécifique. Caractéristiques de la performances Tissus Normaux L analyse de 30 tissus normaux variés a montré un marquage positif dans le cytoplasme de l épithélium squameux prismatique du col de l utérus, du côlon, de l œsophage, de la peau, de l intestin grêle, de l estomac et de l amygdale. D autres tissus ayant été marqués comprenaient le tissu glandulaire (mammaire, parathyroïdien, de la prostate sudoripare et de la thyroïde), l astrocyte, la substance blanche du cervelet, les filaments gliaux du cerveau, les tubes distaux et la capsule de Bowman du rein, les canaux biliaires, les pneumocytes, les bronches, le mésothélium, le canal interlobulaire du pancréas, la cellule pituitaire antérieure, le canal interlobulaire et les cellules acineuses de la glande salivaire, les cellules réticulaires et les corpuscules de Hassall du thymus et l'endométrium et le muscle lisse de l'utérus. 15 Un marquage négatif a été observé dans la glande surrénale, la moelle osseuse, le cœur, le péricarde, le nerf périphérique, le muscle squelettique, la rate et les testicules. AE1/AE3 réagit avec l épiderme kératinisé (56,5/65 à 67) et cornéen (55 à 64), l épithélium squameux stratifié des viscères (51 à 59), l épithélium stratifié (50 à 58), les kératinocytes hyperprolifératifs (48 à 56) et l épithélium simple (45 à 52 et 46 et 54). La kératine 40 kd est présente dans la plupart des épithéliums à l'exception de l'épiderme adulte. 3,4 Tissus Anormaux Dans les tissus pathologiques, Listrom et Dalton 14 ont testé les clones AE1/AE3 sur plus de 60 néoplasmes épithéliaux faiblement différenciés, des lymphomes, des mélanomes et des sarcomes. A l exception du marquage de 2 sur 6 cas de carcinomes à petite cellule seulement et 3 sur 5 carcinomes à cellule de transition, l étude a montré que les 34 néoplasmes épithéliaux étaient tous marqués positivement. Lorsque positivf, AE1/AE3 a marqué seulement faiblement les carcinomes à cellules de transition et le marquage des cellules tumorales était soit cytoplasmique de facon diffuse, soit périnucléaire. Montag et Al. 16 ont trouvé que AE1/AE3 est un réactif sensible pour le diagnostic différentiel du mésothéliome malin diffus du type (cellule fusiforme) sarcomatoïde (positif dans 30 cas sur 30) par opposition aux autres types de néoplasmes à cellule fusiforme (0 cas sur 49). Lorsque comparé à l anti-ema dans une étude de 87 néoplasmes, y compris 48 adénocarcinomes de types variés, Pinkus et Al. 13 ont montré que AE1/AE3 marquait 33% des cas plus faiblement que l anti-ema. ( ) EFG_003 p. 4/7

16 Bien que 3 cas sur 3 de chondromes chondroïdes et 1 cas sur 8 de lymphomes ont montré une réaction à l anti-ae1/ae3, aucun marquage positif n a été observé parmi 25 des néoplasmes non épithéliaux y compris chacun des 4 cas de mélanomes et glioblastome. 14 Aucune cytokératine n a été détectée dans 8 cas de tumeurs non épithéliales, y compris le mélanome, le lymphome, le neurofibrome et le sarcome lorsque AE1/AE3 était utilisé dans la technique d immunotransfert. 17 Cependant, il a été recommandé 14 de se servir d AE1/AE3 comme membre d un panel d anticorps pour la détermination du lignage cellulaire dans des cas de néoplasmes à petite cellule faiblement différenciées. DEUTSCH Code M3515 Zweckbestimmung Zur Verwendung für In-vitro-Untersuchungen. Monoclonal Mouse Anti-human Cytokeratin, Klone AE1/AE3 ist zum Laborgebrauch für den qualitativen Nachweis zweier Epitope mittels Lichtmikroskopie und immunhistochemischer (IHC-) Testmethoden bestimmt, die auf der Mehrzahl von Epithelcytokeratinen in azetonfixierten gefrorenen und formalinfixierten, paraffineingebetteten Geweben vorkommen. Positive Ergebnisse unterstützen bei der Klassifikation gesunder und neoplastischer Gewebe, die ihrer Herkunft nach Epithelien sind, 1-3 und dienen als Ergänzung zur konventionellen Histopathologie. Die klinische Bewertung einer vorhandenen oder fehlenden positiven Färbung sollte durch morphologische und histologische Studien mit entsprechenden Kontrollen ergänzt werden. Die Interpretation muss unter Berücksichtigung der klinischen Anamnese des Patienten und im Kontext weiterer diagnostischer Verfahren durch einen erfahrenen Pathologen erfolgen. Zusammenfassung und Erläuterung Cytokeratine sind eine Familie wasserlöslicher Proteine mit Molekulargewichten zwischen kd, die das Zytoskelett der Epithelzellen bilden. Mindestens 19 unterschiedliche Cytokeratine sind bis heute identifiziert worden und können in zwei Unterfamilien unterteilt werden. Unterfamilie A besteht aus relativ sauren Cytokeratinen (mit einem pi unter 5,5), wogegen die Mitglieder der Unterfamilie B einen relativ basischen pi von 6 oder mehr haben. Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen Färbung von Dako bzw. den Anweisungen des Detektionssystems für IHC-Verfahren entnehmen: 1) Verfahrensprinzipien, 2) Erforderliche, aber nicht mitgelieferte Materialien, 3) Aufbewahrung, 4) Vorbereitung der Probe, 5) Färbeverfahren, 6) Qualitätskontrolle, 7) Fehlerbehebung, 8) Auswertung der Färbung, 9) Allgemeine Beschränkungen. Geliefertes Reagenz Monoklonaler Maus-Antikörper in flüssiger Form als Gewebekulturüberstand in 0,05 mol/l Tris-HCI-Puffer, ph 7,2 und 0,015 mol/l Natriumazid. Dieses Produkt enthält ein Stabilisatorprotein. Klon: AE1/AE3 1,2 Isotyp: IgG 1, kappa Maus IgG-Konzentration mg/l: Siehe Produktetikett. M3515 kann bei der Durchführung von IHC-Tests unter Verwendung der Nachweissysteme EnVision, EnVision Doublestain oder LSAB 2 bei einer Verdünnung von 1:50 benutzt werden. Hierbei handelt es sich lediglich um Richtlinien. Die optimalen Antikörperkonzentrationen schwanken je nach Probe und Methode der Probenvorbereitung und sollten von jedem einzelnen Labor bestimmt werden. Die Proteinkonzentration kann bei den Chargen verschieden ausfallen, ohne die optimale Verdünnung zu beeinflussen. Der Titer wird bei jeder einzelnen Charge angeglichen, um vergleichbare immunhistochemische Färbeergebnisse zwischen den Chargen mit einer Referenzcharge zu gewährleisten. Immunogen Humaner epidermaler Kallus 1 Spezifität AE1/AE3 ist ein Cocktail aus zwei monoklonalen Antikörpern, die aus der Immunisierung von Mäusen mit humanen Kalluskeratinen gewonnen wurden. 2 AE1/AE3 weist die Mehrzahl humaner Cytokeratine nach und kann daher als Werkzeug für den positiven IHC-Nachweis von Zellen verwendet werden, deren Herkunft in einfachen und stratifizierten Epithelien liegt. 1,2,4 Antikörper AE1 zeigt eine Immunreaktion mit einer antigenen Determinante, die auf den meisten Cytokeratinen der Subfamilie A vorkommt, einschließlich Cytokeratinen mit der Mollschen Bezeichnung 4 10, 13, 14, 15, 16 und 19 (MG 56,5, 54', 50, 50', 48 bzw. 40 kd), jedoch nicht auf den Nummern 12, 17 und 18 (MG 55, 47 bzw. 45 kd). 4 Antikörper AE3 reagiert mit einer antigenen Determinante, die den Cytokeratinen der Subfamilie B gemeinsam ist, einschließlich der Nummern 1 und 2, 3, 4, 5, 6, 7 und 8 (MG 65, 67, 64, 59, 58, 56, 54 bzw. 52 kd). 5 Zusätzlich benötigte Reagenzien und Zubehör (außerhalb des Lieferumfangs) Siehe Allgemeine Richtlinien zur immunhistochemischen Färbung von Dako und/oder Anweisungen des Detektionssystems. Vorsichtsmaßnahmen 1. Nur für Fachpersonal bestimmt. 2. Dieses Produkt enthält Natriumazid (NaN 3), eine in reiner Form äußerst giftige Chemikalie. Ansammlungen von NaN 3 können auch in Konzentrationen, die nicht als gefährlich klassifiziert sind, mit Blei- und Kupferabflussrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden. Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachspülen, um Azidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen Wie alle Produkte biologischen Ursprungs müssen auch diese entsprechend gehandhabt werden. 4. Entsprechende Schutzkleidung tragen, um Augen- und Hautkontakt zu vermeiden. 5. Nicht verwendete Lösung ist entsprechend örtlichen, bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen. ( ) EFG_003 p. 5/7

17 Aufbewahrung Bei 2 8 C aufbewahren. Nach Ablauf des auf dem Flä schchen aufgedruckten Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Werden die Reagenzien nicht entsprechend den angegebenen Bedingungen aufbewahrt, müssen die Bedingungen vom Anwender geprüft werden. Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen für eine eventuelle Produktinstabilität. Positiv- und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden. Falls es zu einer unerwarteten Färbung kommt, die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erklären lässt und auf ein Problem mit dem Antikörper hindeutet, ist der technische Kundendienst von Dako zu verständigen. Probenvorbereitung Paraffinschnitte AE1/AE3 kann auf formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebeschnitten genutzt werden. Zur Epitopverstärkung ist eine Gewebevorbehandlung erforderlich. Zu diesem Zweck hat sich entweder eine Verdauung mittels proteolytischer Enzyme oder hitzeinduziertes Epitope-Retrieval als wirksam erwiesen. Die folgenden Enzyme können für die Vorbehandlung formalinfixierter, paraffineingebetteter Gewebe verwandt werden: Proteinase K, RTU (Kode S3020), Pepsin (Kode S3002), oder Proteolytisches Enzym, RTU (Kode S3007). Gründlich mit destilliertem Wasser spülen und mit der Färbeprozedur gemäß der Anleitung für das Nachweissystem fortfahren. Als Alternative zur Enzymvorbehandlung kann das hitze-induzierte Epitope-Retrieval angewandt werden. Das hitze-induzierte Epitope- Retrieval verlangt das Eintauchen der Gewebeschnitte in eine vorgeheizte Pufferlösung und gleichbleibende Hitze, entweder im Wasserbad (95 99 C) oder im Dampfgarer (95 99 C) oder im Au toklav (121 C). Um eine bessere Haftung der Gewebe schnitte an den Glasobjektträgern zu erzielen, wird der Gebrauch von silanisierten Objektträgern (Silanized Slides, Kode S3003) empfohlen. Unter Anwendung eines 20-minütigen Aufheizverfahrens wird Target Retrieval Solution (Kode S1700) oder Zehnfach-Konzentrat (Kode S1699) empfohlen. Nach der Hitzebehandlung muss das Gefäß mit dem Puffer und den Objektträgern 20 Minuten lang bei Raumtemperatur abkühlen. Mit dem Puffer gut spülen. Kryomikrotomschnitte und Zellabstriche AE1/AE3 kann zur Markierung azetonfixierter Kryomikrotomschnitte oder fixierter Zellabstriche verwendet werden. Färbeprozedur Folgen Sie der Prozedur für das ausgewählte Nachweissystem. Bewertung der Färbung Das zelluläre Färbemuster für AE1/AE3 ist zytoplasmatisch. Produktspezifische Beschränkungen 1. Extrafollikuläre Retikulumzellen von Lymphknoten, Tonsillen und Milz reagieren nachweislich mit den Antikörpern zu Zytokeratin Zytokeratin 19 und möglicherweise Zytokeratin 8 wurden in den glatten Muskelzellen des Uterus nachgewiesen Seltene Melanome 9 und Leiomyosarkome 8 könnten eine positive Färbung hervorrufen. Dieses Vorkommen ist gewöhnlich ausgeprägter auf gefrorenem Gewebe als auf formalinfixiertem Gewebe. 10 Daher wird die Verwendung von AE1/AE3 in einem Panel mit HMB45 (bei Ausschluss von Melanomen) und Desmin (bei Ausschluss von Leiomyosarkomen) empfohlen, da diese Antikörper keine Spezifität für Epithelzellen aufweisen. 4. Eine falsch-positive Färbung von Gliazellen in Tumoren wurde auf formalinfixiertem, paraffineingebettetem Gewebe bei einer proteolytischen Vorbehandlung beschrieben. Immunzytochemische und biochemische Methoden haben gezeigt, dass diese Zellen und Tumoren keine Cytokeratine exprimieren Pinkus et al. 12 hoben die Bedeutung einer proteolytischen Verdauung formalinfixierter Gewebe hervor, die mit AE1/AE3 gefärbt werden sollen. Fotos gefärbter Gewebe zeigen die Resultate, falls die Verdauung mit Trypsin II ausgelassen wurde, andere Trypsinenzyme verwendet und/oder keine optimalen Verdauungstechniken angewandt wurden. In letzteren Fällen zeigten nur 2/12 Epithelneoplasmen unterschiedlicher Typen eine optimale Färbung für Zytokeratin. Durch ihre Überprüfung widersprüchlicher Cytokeratin- Immunreaktivitäten in früheren Veröffentlichungen im Vergleich zu ihren eigenen Reaktivitäten konnten Pinkus et al. 12 viele zuvor aufgetretene falsch-negative Fälle einem oder mehreren dieser Mängel zuordnen. 6. Anhand eines Vergleichs zwischen AE1/AE3 und einem antiepithelialen Membranantigen-(Anti-EMA-)-Antikörper in einer IHC-Studie von 87 Neoplasmen, einschließlich 48 Adenokarzinomen unterschiedlicher Typen, kamen Pinkus et al. 13 zu der Schlussfolgerung, dass die Cytokeratinproteine in proteolytisch behandelten, formalinfixierten Geweben, die von AE1/AE3 gefärbt wurden, in 33% der Fälle im Vergleich zu Anti-EMA die zuverlässigeren Marker epithelabgeleiteter Neoplasmen waren. Da jedoch in 9% aller Fälle EMA positiv und AE1/AE3 negativ reagierten, wurde empfohlen, AE1/AE3 und Anti-EMA als komplementäre Reagenzien einzusetzen. 7. Obwohl von Listrom und Dalton 14 keine falsch-positive Färbung berichtet wurde, konnte eine schwache zytoplasmatische Färbung in 2/2 Plasmazytomen, 2/4 Melanomen und 2/7 Lymphomen beobachtet werden, die als Resultat einer unspezifischen Hintergrundfärbung betrachtet wurde. Leistungs-eigenschaften Normalgewebe Tests von 30 unterschiedlichen Normalgeweben zeigten eine positive Färbung im Zytoplasma von Platten- und Zylinderepithel von Cervix, Kolon, Ösophagus, Haut, Dünndarm, Magen und Tonsillen. Andere färbende Gewebe umfassten Drüsengewebe (Mamma, Parathyroidea, Prostataschweißdrüsen und Thyroidea), Astrozyten, weiße Substanz des Cerebellum, Gliafilamente des Cerebrum, distale Nierentubuli und Bowman-Kapseln der Niere, Gallenkanal, Pneumozyten, Bronchien, Mesothel, interlobularer Pankreaskanal, vordere Hyphophysenzellen, interlobularer Kanal und azinöse Zellen der Speicheldrüsen, retikuläre Zellen und Hassall-Körperchen des Thymus, Endometrium und glatter Muskel des Uterus. 15 Eine negative Färbung wurde für Nebennieren, Knochenmark, Herz, Perikard, periphere Nerven, Skelettmuskel, Milz und Hoden beobachtet. AE1/AE3 reagiert mit keratinisierter (56,5/65-67) und Kornealepidermis (55/64), geschichtetem Plattenepithel der inneren Organe (51/59), Schichtepithel (50/58), hyperproliferativen Keratinozyten (48/56) und einfachem Epithel (45/52 und 46/54). Das 40-kD-Keratin kommt in den meisten Epithelien mit Ausnahme der adulten Epidermis vor. 3,4 ( ) EFG_003 p. 6/7

18 Anomale Gewebe In pathologischen Geweben testeten Listrom und Dalton 14 die Klone AE1/AE3 auf mehr als 60 schwach differenzierten Epithelneoplasmen, Lymphomen, Melanomen und Sarkomen. Mit Ausnahme der Färbung von nur 2/6 kleinzelligen Karzinomen und 3/5 Übergangszellkarzinomen ergab die Studie, dass alle 34 Epithelneoplasmen eine positive Färbereaktion zeigten. Bei einer positiven Reaktion färbte AE1/AE3 Übergangszellkarzinome nur schwach, und die Färbung der Tumorzellen war entweder diffus zytoplasmatisch oder perinuklear. Montag et al. 16 entdeckten, dass AE1/AE3 ein empfindsames Reagenz für die Differentialdiagnose zwischen diffusen malignen Mesotheliomen des sarkomatoiden (Spindelzell-) Typs (positiv in 30/30 Fällen) und anderen Typen von Spindelzellneoplasmen (0/49) war. Beim Vergleich mit Anti-EMA in einer Studie von 87 Neoplasmen, einschließlich 48 Adenokarzinomen unterschiedlicher Typen, entdeckten Pinkus et al., 13 dass AE1/AE3 in 33% der Fälle zuverlässiger färbte als Anti-EMA. Obwohl 3/3 chondroiden Chordomen und 1/8 Lymphomen mit Anti-AE1/AE3 reagierten, wurde bei 25 Nichtepithelneoplasmen, einschließlich je 4 Fällen von Melanomen und Glioblastomen, keine positive Färbung beobachtet. 14 Bei der Verwendung von AE1/AE3 in der Immunblotting-Technik wurde in keinem von 8 Fällen von Nichtepitheltumoren, einschließlich Melanom, Lymphom, Neurofibrom und Sarkom, Cytokeratin gefunden. 17 Es wurde jedoch empfohlen, 14 AE1/AE3 als Mitglied eines Antikörper-Panels für den Nachweis von Zelllinien in Fällen schwach differenzierter kleinzelliger Neoplasmen einzusetzen. References Références Literatur 1. Tseng SCG, Jarvinen MJ, Nelson WG, Huang JW, Woodcock-Mitchell J, Sun TTl. Correlation of specific keratins with different types of epithelial differentiation: Monoclonal antibody studies. Cell 1982;30(2): Woodcock-Mitchell J, Eichner R, Nelson WG, Sun TT. Immunolocalization of keratin polypeptides in human epidermis using monoclonal antibodies. J Cell Biol 1982;95(2 Pt 1): Moll R, Franke WW, Schiller Dl. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982;31(1): Sun T-T, Eichner R, Schermer A, Cooper D, Nelson WG, Weiss RA. Classification, expression and possible mechanisms of evolution of mammalian epithelial keratins: A unifying model. In: Levine A, Topp W, Vande Woude G, Watson JD (eds.). Cancer cells 1 the transformed phenotype. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Eichner R, Bonitz P, Sun T-T. Classification of epidermal keratins according to their immunoreactivity, isoelectric point and mode of expression. J Cell Biol 1984;98(4): Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides. DHHS (NIOSH) Publ No , Current 13. August 16, Franke WW, Moll R. Cytoskeletal components of lymphoid organs. Differentiation 1987;36(2): Gown AM, Boyd HC, Chang Y, Ferguson M, Reichler B, Tippens D. Smooth muscle cells can express cytokeratins of simple epithelium. Amer J Pathol 1988;132(2): Zarbo RJ, Gown AM, Nagle RB, Visscher DW, Crissman JD. Anomalous cytokeratin expression in malignant melanoma: One- and twodimensional western blot analysis and immunohistochemical survey of 100 melanomas. Mod Pathol 1990;3(4): Brown DC, Theaker JM, Banks PM, Gatter KC, Mason DY. Cytokeratin expression in smooth muscle and smooth muscle tumors. Histopathol 1987;11(5): Bacchi CA, Zarbo RJ, Jiang JJ, Gown AM. Do glioma cells express cytokeratin? Appl Immunohistochem 1995;3(1): Pinkus GS, O Connor EM, Etheridge CL, Corson JM. Optimal immunoreactivity of keratin proteins in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue requires preliminary trypsinization. J Histochem Cytochem 1985(5);33: Pinkus GS, Etheridge CL, O Connor EM. Are keratin proteins a better tumor marker than epithelial membrane antigen? Amer J Clin Pathol 1986;85(3): Listrom MB, Dalton LW. Comparison of keratin monoclonal antibodies MAK-6, AE1:AE3 and CAM-5.2. Amer J Clin Pathol 1987;88(3): Report of Normal Tissue Immunohistochemical testing using DAKO Mouse Anti-Human Cytokeratin, Clone AE1/AE3. DAKO Corp June Montag AG, Pinkus GS, Corson JM. Keratin protein immunoreactivity of sarcomatoid and mixed types of diffuse malignant mesothelioma: An immunoperoxidase study of 30 cases. Hum Pathol 1988;19(3): Nelson WG, Battifora H, Santana H and Sun T-T. Specific keratins as molecular markers for neoplasms with a stratified epithelial origin. Canc Res 1984;44(4): Edition 03/10 ( ) EFG_003 p. 7/7

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