Polizei sucht Täter FALL: MISSION:
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- Gert Beck
- vor 7 Jahren
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2 Polizei sucht Täter FALL: Polizei hat ein Photo des Täters veröffentlicht Polizei sucht einen Mann der Dienstag früh in einer Maske ein Laboratorium ausgeraubt hat. Er hat einen Medizinstudenten getötet, der mehrmals ins Gesicht und in den Rücken geschossen wurde. Über die Waffe hat die Polizei keine Mitteilung gemacht. Die Polizei hat den Täter als einen Mann in seiner frühen 20er Jahren beschrieben, der etwa 190 cm hoch ist und eine Make, graue Jeans und ein schwarzes Shirt getragen hat. Diese Tiere müssen von den Strassen verschwinden, sie sollten gehängt werden," sagte der Sicherheitswachmann der die Leiche gefunden hat. Detektive haben aus 5 Verdächtigen Blutproben genommen. MISSION: Ihre Aufgabe ist den Tatort unterzusuchen und die dort genommenen DNA- Proben mit den Proben der Verdächtigen zu vergleichen.
3 Menschen lügen aber Beweise lügen nicht Arten der Beweise: - indirekt (z.b. Photo) - direkt (z.b. Haare) - kalter Beweis (Textilien) - heisser Beweis (DNA)
4 Quellen der biologischen Beweise Blut Sperma Speichel Harn Haare Zähne Knochen Gewebe Blut Nur sehr wenig Blut (3 l) wird gebraucht um das DNA-Profil zu bestimmen
5 ORGANIC DNA-Extraktion aus Blut Filter Paper Blood stain SDS, DTT, EDTA and proteinase K CHELEX-Methode Blut Wasser Apply blood to paper and allow stain to dry INCUBATE (56 o C) VORTEX QUANTITATE DNA PERFORM PCR Centrifuge Phenol, chloroform, isoamyl alcohol Centrifuge TRANSFER aqueous (upper) phase to new tube TE buffer CONCENTRATE sample (Centricon/Microcon-100 or ethanol precipitation) Centrifuge INKUBATION Überstand wegwerfen 5% Chelex INKUBATION (65 o C) INKUBATION (100 o C) Bestimmung der DNA Konz. PCR Zentrifugieren Zentrifugieren PUNCH WASH Multiple Times with extraction buffer REMOVE supernatant PCR Reagents (NO DNA QUANTITATION TYPICALLY PERFORMED WITH UNIFORM SAMPLES) PERFORM PCR Figure 3.1, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2 nd Edition 2005 Elsevier Academic Press
6 Praktikumsaufgabe: 0. Probenahme am Tatort 1. DNA-Isolierung 2. DNA-Amplifikation (PCR) 3. Gelelektrophorese 4. Analyse der Proben
7 1. Aufgabe: DNA-Isolierung aus Lymphozyten Probe: Blut auf einem Stück Textil Schneiden Sie die Hälfte des Blutflecks aus und legen Sie es in ein Eppendorf-Röhrchen Geben Sie 1000 l sterilem Wasser zur Probe Vortexen Inkubation bei Raumtemperatur für wenigen Minuten Vortexen Zentrifugieren für 2 min mit 1500 rpm Pipettieren Sie daraus 950 l Geben Sie 150 l 1% Chelex Lösung + 50 l ProtK Enzyme zu den Proben Inkubieren Sie das Röhrchen in Ihren Händen für wenigen Minuten Vortexen 65 C o 2 min, (ProtK Inaktivierung) Egen Sie die Probe auf Eis
8 2. Was für eine Komponenten brauchen wir zur PCR? Geben sie die folgenden Komponenten zu 5 l DNA- Probe: 26,5 l destilliertes Wasser 5 l PCR Puffer Mix Primer 1 (forward) 2,5 l Primer 2 (reverse) 2,5 l 5 l dntp Mix 2,5 l MgCl 2 letztlich: 1 l Ultra Fast DNA Polymerase (auf Eis zu lagern) LASSEN SIE DIE PCR REAKTION LAUFEN!
9 PCR Program: CSI C o 2 min C o 10 sec C o 15 sec C o 20 sec 30x: Schritt2-Schritt4 1 min 72 C o 4 C o (Gesamtzeit: ca. 30 min)
10 Was sind die Schritte der PCR?
11 Die verschiedene Methoden die in Gerichtsmedizin bekannt sind Was bedeutet RFLP? Was bedeutet Multiplex PCR? Hoch Statistischer Kraft der genetischen Diskrimination Langsam Langsam RFLP Multi-Locus Probes RFLP Single Locus Probes mtdna PCR: HV1, HV2 Speed of Analysis (Technology) Multiplex PCR of STRs PolyMarker D1S80 single STR DQ ABO Blut Gruppe Schnell Figure 1.1, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2 nd Edition 2005 Elsevier Academic Press
12 Minisatellite Marker (D1S80) Flanking Regione Repeat Region GAGGACCACCAGGAAG 16 bp repeat unit STR Marker (TH01) Flanking Regione Repeat Region TCAT 4 bp Repeat Untereinheit Figure 5.1, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2 nd Edition 2005 Elsevier Academic Press
13 Polymorphismen auf den homologen Chromosomen (A) Length polymorphism: VNTR oder STR Technik: (VNTR-PCR) (AATG)(AATG)(AATG) (AATG)(AATG) Repeats 2 Repeats (B) Sequence polymorphism: SNP Technik: (AS-PCR) AGACTAGACATT AGATTAGGCATT Figure 2.5, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2 nd Edition 2005 Elsevier Academic Press
14 Erste Fälle der DNA-Identifizierung
15 Probleme mit RFLP: relativ viel DNA wird gebraucht (50 ng = tausende von Zellen). Nicht ideal für Gerichtsmedizin, da oft nur wenige, degradierte Proben zur Verfügung stehen Kurze Geschichte der gerichtsmedizinischen DNA-Methoden 1900s: Landsteiner: Entdeckte die ABO Blutgruppen: Revolution in der gerichtsmedizinischen Methodologie. Kraft der Methode: 10 3 Sir Alec Jeffreys 1980s: RFLP+DNA detektiert durch Southern blotting. Alec Jeffreys entwichelte das erste DNA Profiling für Krankheitsmarker. Kraft der Methode: 10 6 Mitte der 1980er: Der Colin Pitchfork Fall in England: der erste DNA-Beweis benutzt vom Gericht. Zwei junge Frauen vergewaltigt und ermordet in Narborough, England. 5,000 lokale Menschen wurden nach Blu/Speichelproben gefragt. Erster Freispruch und Verurteilung an Hand vom DNA-Beweis von Jeffreys
16 Kurze Geschichte der gerichtsmedizinischen DNA-Methoden 1984: Entwicklung der PCR von Karry Mullis Funktioniert mit kleineren Mengen (1-2ng), mit Proben schlechter Qualität 1986: PCR von STR: Nicht-kodierende, 4-7 Nukleotid-langee Sequenzen, welche hoch variabel in der Anzahl der Wiederholungen zwischen Menschen ist! Braucht <1ng of DNA um STR Loci zu untersuchen. Kraft der Methode: FBI mit NIH hat kollaborative Forschung begonnen um Techniken der DNA-Identifizierung auszuarbeiten: der Combined DNA Index System (CoDIS) ist ein Datenbank von DNA-Profilen aus Verbrechern und Tatortproben. 1990er: DNA Analyse wurde als unfehlbar gesprochen beim Strafverfahren.
17 Der O.J. Simpson Fall Prozess des Jahrhunderts: Dollars gegen DNA oder California vs OJ Simpson. 1995: OJ Simpson Urteil: unschuldig'
18 CODIS Combined DNA Index System (FBI und NIH) 13 CODIS STR Loci mit chromosomalen Positionen Geschlechtsspezifisches Marker
19 FBI s STR LOCI
20 Neue, erweiterte STR Loci verwendet von FBI, InterPol, usw.
21 Im Fall von 13 Markern ist die Wahrscheinlichkeit dass zwei Proben identisch sind : ca.1: In welchen Fällen ist diese Wahrscheinlichkeit grösser?
22 Was sind die technische Grundlagen der STR produkt- Analyse? Laser Kapillar Elektrophorese Capillary filled with polymer solution - + (cathode) 5-20 kv (anode) Detecti on window Inlet Buffer Outlet Buffer Sample Sample tray moves tray automatically beneath the cathode end of the capillary to deliver each sample in succession Data Acquisition Kapillarrohr Primers sind markiert mit Fluoreszenzstoff Elektrode für Probeinjektion
23 (RFU) (A) Simultane Amplifikationen der drei Allelen auf dem homologen Chromosomenpaar Locus A Deletion of Locus B Locus C Locus A Locus B Locus C (B) Multiplex PCR Produkte werden mit Kapillar Elektrophorese separiert A B C Wie liegen die Produkte auf dem Chromatogram RFU: relative fluorescence unit t: time 10min small 15 min large (t) 50 bp 70 bp Modified Figure 4.3 J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2 nd Edition 2005 Elsevier Academic Press
24 D8S1179 (12 alleles) D21S11 (24 alleles) D7S820 (10 alleles) CSF1PO (10 alleles) Blue panel D3S1358 (8 alleles) TH01 (10 alleles) D13S317 (8 alleles) D16S539 (9 alleles) D2S1338 (14 alleles) Green panel D19S433 (15 alleles) VWA (14 alleles) TPOX (8 alleles) D18S51 (23 alleles) Yellow panel AMEL (2 alleles) D5S818 (10 alleles) FGA low (19 alleles) FGA high (9 alleles) Red panel 100 bp 139bp 150 bp 160 bp 200 bp 250 bp* Orange panel 300 bp 340 bp 350 bp LIZ-labeled GS500 DNA sizing standard Figure 5.6, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2 nd Edition 2005 Elsevier Academic Press
25 (A) Mendelsche Vererbung Mutter A,B Vater C,D B,C Kind (B) Beispiel Vaterschaftsteste mit STRs 8,12 11,14 Was sind die Genotypen der Kinder? 12,14 8,14 11,12 12,14 8,11 Väterliche Allele Figure 23.2, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2 nd Edition 2005 Elsevier Academic Press
26 (A) Direct comparison of STRs with related objects DNA Profil Des Opfers D5S818 D7S820 D13S317 CSF1PO D16S539 Penta D DNA Profil Von dem Direkten Evidenz (zb eine Zahnbürste) (B) Indirect comparison: kinship analysis Betroffener D5S818 D13S317 D7S820 D16S539 CSF1PO Penta D? Frau 11,13 8,12 8,12 8,9 10,12 8,10 Frau Sohn 11,13 8,14 8,9 9,13 10,10 9,10 Sohn Vorausgesgtes Profil 11,? or?,13?,14 9,??,13?,10 9,? Vater Profil des Betroffenes 12,13 11,14 9,9 11,13 10,10 9,12 Figure 24.1, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2 nd Edition 2005 Elsevier Academic Press
27 Einfache Vaterschaftsteste D1 = Biologische Tochter von den beiden Eltern D2 = Kind der Mutter und ihr voriges Mann Alle Menschen haben VNTRs S1 = Biologisher Sohn des Ehepaars S2 = adoptierter Sohn VNTRs kommen aus der genetischen Information von den Eltern. Kinder haben VNTRs der Mutter, des Vaters oder eine Kombination der beiden keine VNTRs die nicht von einem der beiden Eltern stammen
28 3. Gelelektrophorese Geben Sie 5 l PCR Probe zur vorbereiteten blauen Laufpuffer Tragen sie die ganze Probe (10 l) auf das Gel gefärbt mit GelRed auf Lassen sie das Gel für 30 min bei 100V laufen!
29 PRAKTIKUMSAUFGABE - VNTR ANALYSE UNTERSUCHUNG VON EINEM, AUCH VON FBI BENUTZTEN VNTR LOCUS (FGA) IN 5 MITARBEITERN DES BIOLOGISCHEN INSTITUTS Die PCR-Primers haben wir auf die Konsensussequenzen an den beiden Seiten der wiederholenden Region geplant: P1: gctagtaacggcattaccag P2: catcgcataagaatttcacg LÄNGE DER WIEDERHOLENDEN EINHEIT: 4 bp, SEQUENZ: TTTC ANZAHL DER WIEDERHOLUNGEN: 5-250, ALSO WIR ERWARTEN PRODUKTE ZWISCHEN: bp (die Länge der beiden Primer sind natürlich eingerechnet).
30 PRAKTIKUMSAUFGABE - VNTR ANALYSE BESTIMMEN SIE, WIEVIELE WIEDERHOLUNGEN DIE AMPLIFIZIERTEN ALLELE ENTHALTEN! Lösung: Nach dem Abziehen von der Länge der beiden Primern (40bp), teilen wir die DNA-Fragmentlängen mit 4, so bekommen wir die Anzahl der Wiederholungen Anzahl der tandemartigen Wiederholungen in den beiden Allelen
31 1. AUFGABE Ella SUCHT Sie mit ihrer Tochter, Linda auf. Ella erzählt, das der Vater von Linda ist einer der Mitglieder der Beatgruppe Freude. Basierend auf die DNA-Proben entnommen von den Mitgliedern der Gruppe machen Sie eine VNTR-Analyse. Wer ist der Vater von Linda? Warum? Warum ist B-Mikrosatellit speziell? VNTR Ella Linda Thomas Johann Peter Uwe Franz A 7 & 8 2 & 7 3 & 7 2 & 7 2 & 8 3 & 7 3 & 2 B 4 & 5 6 & C D 11 & 8 7 & & 9 9 & & & 12 9 & & 7 21 & 7 7 & 9 21 & 7 15 & 8 21 & 15 E 10 & 6 12 & 6 6 & 9 12 & 9 17 & 10 6 & & 12
32 1. AUFGABE VNTR Ella Linda Thomas Johann Peter Uwe Franz A 7 & 8 2 & 7 3 & 7 2 & 7 2 & 8 3 & 7 3 & 2 B 4 & 5 6 & C 11 & 8 11 & 9 9 & & & 12 9 & 13 D 7 & & 7 21 & 7 7 & 9 21 & 7 15 & 8 21 & 15 E 10 & 6 12 & 6 6 & 9 12 & 9 17 & 10 6 & & 12 Ella SUCHT Sie mit ihrer Tochter, Linda auf. Ella erzählt, das der Vater von Linda ist einer der Mitglieder der Beatgruppe Freude. Basierend auf die DNA-Proben entnommen von den Mitgliedern der Gruppe machen Sie eine VNTR-Analyse. Wer ist der Vater von Linda? Warum? FRANZ Warum ist B-Mikrosatellit speziell? ES IST X-CHROMOSOM GEKOPPELT
33 Die Sequenz oben ist Wildtyp (+), die Sequenz unten ist mutant (-). Suchen sie die Mutation! Zu welchem Typ gehört diese Mutation? 2. AUFGABE (+) CCT GAC TTT AGC ATG CCG GGA TCG GTT CTT AAT... CTA GCG CCA TCC CTT CTA ACT (-) CCT GAC TTT AGC ATG CCG GGA TCG GTT CTT AAA... CTA GCG CCA TCC CTT CTA ACT
34 Die Sequenz oben ist Wildtyp (+), die Sequenz unten ist mutant (-). Suchen sie die Mutation! Zu welchem Typ gehört diese Mutation? Punktmutation, eine andere Aminosäure wird eingebaut, Missense Was für eine Methode kennen Sie für die Identifizierung von Punktmutationen/SNPs? (+) CCT GAC TTT AGC ATG CCG GGA TCG GTT CTT AAT... CTA GCG CCA TCC CTT CTA ACT (-) CCT GAC TTT AGC ATG CCG GGA TCG GTT CTT AAA... CTA GCG CCA TCC CTT CTA ACT
35 ASA (Allelspezyfische Amplifikation) PCR PRODUKTE 5 ATG CCG GGA TCG GTT CTT AAT 3 5 AGT TAG AAG GGA TGG CGC TAG 3 (+) 5 ATG CCG GGA TCG GTT CTT AAT... CTA GCG CCA TCC CTT CTA ACT 3 3 TAC GGC CCT AGC CAA GAA TTA GAT CGC GGT AGG GAA GAT TGA 5 (-) 5 CCT GAC TTT AGC ATG CCG GGA TCG GTT CTT AAA... CTA GCG CCA TCC CTT CTA ACT 3 3 GGA CTG AAA TCG TAC GGC CCT AGC CAA GAA TTT GAT CGC GGT AGG GAA GAT TGA 5 5 CCT GAC TTT AGC ATG CCG GGA TCG GTT CTT AAA3 5 AGT TAG AAG GGA TGG CGC TAG 3
36 GELELEKTROPHORESE DER PCR-PRODUKTE +/+ -/- +/-
37 Gerichtsmedizin in der Zukunft? Eine Assoziationsforschung identifizierte fünf Loci (PRDM16, PAX3, TP63, C5orf50 und COL17A1), welche die Gesichtmorphologie bei Europäern beeinflussen: z.b.: PAX3 beeinflusst die Position des Nasions. Citation: Liu F, van der Lijn F, Schurmann C, Zhu G, Chakravarty MM, et al. (2012) A Genome-Wide Association Study Identifies Five Loci Influencing Facial Morphology in Europeans. PLoS Genet 8(9): e
38 Bestimmen Sie bitte die Augen- und Haarefarbe der Täter, wenn sein DNA-Profil aus den folgenden SNPs besteht: Gen/SNP HERC2 Rs Oca2 Augen Blue/green Brown Blond/red Brown GG/CC HAAR AA/TT GG/CC AA/TT Ergebnisse der Sequenzierung: Rs : Rs : AA GG rs AA/TT GG/CC AA/TT GG/CC Tyr Rs : GG Rs AA/TT GG/CC AA/TT GG/CC IRF4 rs TT/AA CC/GG TT/AA CC/GG SLC24A5 rrs GG/CC CC/GG GG/CC CC/GG Rs : CT Rrs : CC Rs : AC ExoC2 rs AA/TT CC/GG AA/TT CC/GG The HIrisPlex system for simultaneous prediction of hair and eye colour from DNA Forensic Science International: Genetics Volume 7, Issue 1, January 2013, Pages IrisPlex: A Sensitive DNA Tool for Accurate Prediction of Blue and Brown Eye Colour in the Absence of Ancestry Information Journal:
39 Vergleichen Sie die Proben der Verdächtigen mit den amplifizierten Proben und bestimmen Sie die Anzahl der Wiederholungen in den amplifizierten Proben! Referenzgel 1 Verdächtigen 2 3 Opfer Marker Wer ist der Täter vermutlich?
40 Wichtige Begriffe Die Schritten der PCR Identifizierungstechniken der Personen: RFLP, VNTR, STR, SNP, ASA, Kapillar Gelelektrophorese, CODIS, DNA Fingerabdruck
Dendrogramm der Primaten
Arbeitsblatt 1 Dargestellt ist ein Ausschnitt der DNA-Sequenz für das Enzym NAD- Polymerase, dass bei den Primatenarten Mensch(M), Schimpanse(S), Gorilla(G), Orang-Utan(O) und Gibbon(Gi) vorhanden ist.
Molekulare Genetik und Zellbiologie. Versuch 5 Präparation und Amplifikation menschlicher DNA. DNA Fingerprint VNTR-Analyse
Molekulare Genetik und Zellbiologie Versuch 5 Präparation und Amplifikation menschlicher DNA DNA Fingerprint VNTR-Analyse Menschliche Genom 3000 Mb Gene und Gen-verwandte Sequenzen 900 Mb (30%) Extragene
Bezeichnung Sequenz Verwendung
8 ANHANG i 8 ANHANG I Oligonukleotide Bezeichnung Sequenz Verwendung D256 5 -ATGGCAGACGGTGAGGATATTCA-3 5 Aktin AC1 (neu) D257 5 -GCCTTTGCAATCCACATCTGTTG-3 3 Aktin AC2 (neu) D98 5 -AT CC ATG GCA ATG TCA
A- Zugabe von 180µl Pufferlösung und Proteinase K, Inkubation bei 56 C. B- Zugabe von 200µl einer zweiten Pufferlösung, Inkubation bei 70 C
3 Methoden 3.1 Extraktion der DNA aus den Paraffinschnitten 3.1.1 Extraktions-Kit Das QIAamp DNA Mini Kit- System beruht auf dem Prinzip der Auflösung der Eiweiße mit Proteinase K, DNA Bindung an eine
1.3 Begründe kurz, ob mit Hilfe der fünf in der vereinfachten ID-Card verwendeten Marker aus Aufgabe 1.1 das Geschlecht mit bestimmt werden kann.
Übungsaufgaben zum DNA-Fingerprinter 1/6 1. In der EU wird die Einführung einer ID-Card (Nachfolger des Personalausweises, Entwurf s. Abb. 1) diskutiert, die neben Foto, äußeren Merkmalen und Fingerabdruck
HLA-READY GENE A Low SSP HLA-A low resolution
IN VITRO DIAGNOSTICUM LOT G950085 Arbeitsprotokoll / PCR Protocol 2006-12 0123 Test-Durchführung / -Performance Datum / Date Unterschrift / Signature Bemerkungen / Comments Probe / Sample 1 5 9 13 17 2
Human Identification
Human Identification Wolfgang R. Mayr wolfgang.mayr@meduniwien.ac.at wolfgang.mayr@roteskreuz.at Blutbestandteile Plasma Zellen Erythrocyten Thrombocyten Granulocyten Lymphocyten etc Plasma Antigene an
MODUL 2.36 KLINISCHE CHEMIE UND LABORDIAGNOSTIK. TAG 6: HLA-Typisierung
MODUL 2.36 KLINISCHE CHEMIE UND LABORDIAGNOSTIK TAG 6: HLA-Typisierung Diese Anleitung bitte ausdrucken, vor dem Praktikumstag durcharbeiten und mitbringen! Inhalte der Einführungsvorlesung und der Anleitung
HLA-READY GENE ABC Low
LOT G953085 Arbeitsprotokoll / PCR Protocol 2006-12 Test-Durchführung / -Performance Datum / Date Unterschrift / Signature Bemerkungen / Comments Probe / Sample 1 2 3 4 5 Thermocycler 1 Thermocycler 2
Material MATERIAL 3.1 Oligonukleotide
Material 13 3 MATERIAL 3.1 Oligonukleotide AGK34 LINE1 Ale1 Ale3 LIS1 LIS2 UR UL RA2 LS2 pbst7 sp6 DOP (6-MW) pcypac2-01 pcypac2-02 SD2 SA2 SA4 SD6 D11S2164 (CP5) forward D11S2164 (CP5) revers M16 forward
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Produktion, Vertrieb und Serviceleistung im Bereich der Molekularbiologie und Medizin Produktkatalog 2010 Molekularbiologische Reagenzien Molegene GmbH Bienenweg 28 35764 Sinn Tel. 02772-570952 Fax 02772-570945
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Etablierung einer Homemade - PCR Anja Schöpflin Institut für Pathologie Universitätsklinikum Freiburg Überblick: Anwendungsgebiete der PCR Anforderungen an Primer Auswahl geeigneter Primer / Primerdesign
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2. MATERIAL UND METHODEN 2.1 Material 2.1.1 Proben zur DNA-Analytik Blutproben zur Gewinnung von DNA aus Leukozyten wurden uns freundlicherweise von Dr. Ramaekers, Universität Aachen, überlassen. Ein positives
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Funktionelle Genomik praktische Anwendungen Schmelzpunkt der DNA Einzelsträngige DNA absorbiert UV-Licht effektiver SYBR Green fluoresziert nur wenn es an doppelsträngiger DNA bindet Fluoreszenz erhöht
Merkmal "Amelogenin" ist geschlechtsspezifisch, für eine zusätzliche Kontrolle des Ergebnisses.
Vaterschaftstest 1. Methode Ausgangspunkt Ausgangspunkt der Untersuchung ist die Erstellung des genetischen Profils ("Fingerprints"), der bei jedem Mensch einzigartig ist. Hierfür werden sogenannte STR
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Gentechnik/Gentechnologie Bei zelltechnischen Verfahren werden Gene wenn überhaupt, dann nur im Gesamtverband, also als ganzes Genom verschoben oder kombiniert. Bei Gentechnologischen Verfahren wird in
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3. Methoden Aufgabenstellung: Ziel der Arbeit war es eine eigene Multiplexreaktion zu erstellen, die im Rechtsmedizinischen Institut der Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg zur Durchführung von
Primer zum Nachweis eukaryoter DNA (Kontroll-PCR) Primer Sequenz Ziel-Gen Produktgröße T a
7 Anhang 7.1 Primersequenzen Alle Oligonukleotide sind in 5-3 -Orientierung aufgelistet. 7.1.1.1.1 Primer zum Nachweis eukaryoter DNA (Kontroll-PCR) 258 s CCA TCC AAC ATC TCA GCA TGA TGA AA GCC CCT CAG
7. Anhang. 7. Anhang. Abbildung 7.1: Aminosäuresequenz AtMYC2 im Wildtyp und in jin1. Unterschiede zwischen den Sequenzen sind rot unterlegt.
7. Anhang 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 jin1 MTDYRLQPTMNLWTTDDNASMMEAFMSSSDISTLWPPASTTTTTATTETTPTPAMEIPAQAGFNQETLQQRLQALIEGTHEGWTYAIFWQPSYDFSGASV AtMYC2 MTDYRLQPTMNLWTTDDNASMMEAFMSSSDISTLWPPASTTTTTATTETTPTPAMEIPAQAGFNQETLQQRLQALIEGTHEGWTYAIFWQPSYDFSGASV
Versuch 2: Polymerasekettenreaktion. Betreuer: Knut Jahreis. Versuchsinhalt. Polymerasekettenreaktion, Gelelektrophorese auf Agarosegelen
Versuch 2: Polymerasekettenreaktion Betreuer: Knut Jahreis Versuchsinhalt Polymerasekettenreaktion, Gelelektrophorese auf Agarosegelen Zwei verschiedene Plasmide werden als Matrizen für eine Polymerasekettenreaktion
TCC CCA GTG AAG ACC TCC TCA GAG TCC GAC TCT. 56 C 67 siehe oben siehe oben siehe oben 56 C 66 CCG GCG CCA TTC TAT CC CGA GAA TCT GAC GCA GG 56 C 738
128 9. Anhang 9.1. Tabelle der verwendeten Primerpaare Nr. Name Sequenz 5 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 rcar. 981s rcar. 981s GAPDH. 682s GAPDH. 826a GAPDH. 381s GAPDH. 826a 18S-rRNA. 216s 18S-rRNA.
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