Inhaltsverzeichnis. Vorwort zur 3. Auflage... Vorwort... VI Exkurse... XII Abkürzungen... XIII

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1 Inhaltsverzeichnis Vorwort zur 3. Auflage... Vorwort... VI Exkurse... XII Abkürzungen... XIII 1 Antikörper Des Antikörpers Eigenheiten Molekülstruktur von Antikörpern Die Antigen-Antikörper-Bindung Herstellung von Antikörpern Das Antigen Die Wahl der Spezies Antigenapplikation Polyklonale Antikörper Monoklonale Antikörper Rekombinante Antikörper Reinigung von Antikörpern Quick and dirty Präzipitationsmethoden Affinitätschromatographie Klassische Methoden der Proteinreinigung Aufreinigung von IgY aus Eigelb Aufreinigung rekombinanter Antikörper Wichtige analytische Techniken Chemische Kopplung und Markierung von Antikörpern Chemische Kopplung von Antikörpern an feste Phasen Kopplung von Markerenzymen an Antikörper Kopplung von Fluorochromen an Antikörper Kopplung von Biotin Markierung mit Gold Markierung mit radioaktiven Isotopen Zellseparation Trennung nach Zellgröße und Zelldichte Zentrifugationstechniken Differenzialzentrifugation Dichtegradienten-Zentrifugation Separationsmedien Gegenstromzentrifugation Trennung nach zellspezifischen Oberflächenmolekülen Adhäsion an Kunststoffoberflächen Adhäsion an Nylonwatte Erythrocyten-Rosettierung V

2 VIII Inhaltsverzeichnis Immunmagnetische Separation Lysierende Antikörper Durchflusscytometrie Wie funktioniert das eigentlich? Fluoreszenzen Probenvorbereitung Zellmarkierung Inbetriebnahme des Durchflusscytometers Kompensation und Messung Kompensation Messung Auswertung Histogramm-Plot Dot-Plot Dichteplot Konturplot Isometrische Darstellung Modelle und Ausstattungen Autosampler Zellsorter Quantitative Immunoassays Assaykonzepte Der kompetitive Assay Der Sandwich-Assay Welches Assaykonzept für welche Anwendung? Radioimmunoassay (RIA) Historisches Praktisches Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) Coaten, Blocken, Waschen Enzyme und Substrate ELISA in der Praxis ELISPOT-Assay Anwendung und Vergleich mit anderen Methoden Prinzip und Praxis Partikel-Immunoassay (PIA) Prinzip der Mini-Kugeln Trapping-Assay Multiplex-Assay Vergleich mit anderen Immunoassays Verstärkersysteme Erhöhung der Markerdichte

3 Inhaltsverzeichnis. IX Multi-Enzym-Kaskaden Immuno-PCR Western-Blot Probenvorbereitung Auftrennung eines Proteingemisches mittels Gelelektrophorese Die diskontinuierliche SDS-PAGE Native Gelelektrophorese und isoelektrische Fokussierung Transfer der Proteine auf eine Membran (Blot) Wet-Blot Semi-Dry-Blot Fehlerquellen Proteindetektion Blocking Antikörpermarkierung Visualisierung Stripping und Re-probing von Western-Blot-Membranen Fehlerquellen und Kontrollen Dot- und Slot-Blot in situ-immunlokalisation Untersuchung von Zellsuspensionen Zellsuspensionen Cytospins Zellausstriche Einbettung von Zellen Variationen und Details zur Behandlung von Zellsuspensionen Untersuchung von Geweben Vorbereitung Fixierung Paraffin-Einbettung Schneiden Nachbehandlung Immundetektion Eindeckung Immunelektronenmikroskopische Untersuchung von Geweben Fixierung Einbettung Mikrotomie Immundetektion Immunpräzipitation Die Klassiker Eindimensionale Immundiffusion Zweidimensionale Immundiffusion nach Ouchterlony Radiale Immundiffusion nach Mancini

4 X Inhaltsverzeichnis Immunelektrophoresen Limitierung und aktuelle Bedeutung Immunpräzipitation heute Die Präzipitationsmatrix Reduktion unspezifisch präzipitierender Proteine Analyse der Immunpräzipitate Die Zelle: leben, fressen, sterben Zellviabilitätsbestimmung Farbstoff-Exklusion Tetrazoliumsalz-Reduktion ATP-Assay Zellproliferation DNA-Markierung mit [3H]Thymidin DNA-Markierung mit 5-Brom-2 -desoxyuridin (BrdU) Durchflusscytometrische Bestimmung der Zellproliferation Phagocytose-Assays Die Testpartikel Futter für die Phagocyten Methoden der Partikelvisualisierung Zellvermittelte Cytotoxizität Chrom[ 51 Cr]-release-Assay Lactat-Dehydrogenase(LDH)-release-Assay Durchflusscytometrischer Cytotoxizitätsnachweis Apoptose-Assays Färbungen des Zellkerns DNA-Leiter Nucleosomen-Quantifizierungs-ELISA TUNEL-Technik Annexin V Messung von Caspase-Aktivität Sonstiges Spezielle Immuno-Assays Blutgruppenbestimmung HLA-Typisierung Lymphocytotoxizitätstest Lymphoblastentransformation Ein kurzer Ausflug in die ungeliebte Welt der Statistik Deskriptive Statistik Lokationsmaße Streuungsmaße Korrelationsmaße Prüfstatistik Skalen und ihre Daten Skizze des Ablaufs einer wissenschaftlichen Untersuchung Die Wahl eines geeigneten Signifikanztests

5 Inhaltsverzeichnis. XI 11 Naturwissenschaft vs. Übernatürliches Anhang 1: CD-Antigene Anhang 2: Cytokine Anhang 3: Chemokine Glossar Register

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