CAPILLARYS PROTEIN(E) 6

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1 CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 Ref Ref. 2023* 2015/05

2 VERWENDUNGSZWECK Der CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Kit dient der trennung von humanem Serum- und urinproteinen in alkalischem Puffer (ph 9,9) durch Kapillarelektrophorese mit dem CAPIllArYS System. normale Serumproteine werden in sechs Hauptfraktionen getrennt. urinproteine werden, nach der Vorbereitung der urinproben mit dem CAPIllArYS / MInICAP urine Kit, in fünf verschiedene Zonen aufgetrennt (siehe die Arbeitsanleitung des CAPIllArYS / MInICAP urine Kit, SEBIA, Pn 2013). CAPIllArYS führt alle Schritte automatisch durch und man erhält ein Proteinprofil für qualitative und quantitative Analysen. Die in Silica-Kapillaren aufgetrennten Proteine, werden direkt bei einer Absorption von 200 nm nachgewiesen. Die Elektropherogramme können visuell interpretiert werden, um sie nach abnormen Mustern zu untersuchen. Der direkte nachweis ermöglicht eine genaue relative Quantifizierung individueller Proteinfraktionen. nur für den in vitro Diagnostik gebrauch. HINWEIS : In dieser sanweisung wird der Name "CAPILLARYS" für automatische CAPILLARYS-, CAPILLARYS 2- und CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING-Geräte benutzt. TESTPRINZIP Die Protein Elektrophorese ist eine gut etablierte routinemethode in klinischen laboratorien, für das Screening auf Proteinabnormalitäten. CAPIllArYS wurde für eine vollständig automatische testung entwickelt, mit schneller trennung bei guter Auflösung. unter vielen gesichtspunkten kann die Methode als eine technik zwischen klassischer Zonenelektropherese und Flüssigkeitschromatographie betrachtet werden. Das CAPIllArYS System verwendet das Prinzip der Kapillarelektrophorese in freier lösung. Mit dieser technik werden geladene Moleküle durch ihre elektrophoretische Beweglichkeit in alkalischem Puffer bei einem spezifischen ph-wert getrennt. Die trennung erfolgt gemäß des ph-wertes des Elektrolyten und des elektroosmotischen Flusses. Das CAPIllArYS System besitzt 8 Kapillaren, die parallel arbeiten und acht gleichzeitige Analysen ermöglichen. Eine Probenverdünnung mit Puffer wird vorbereitet und durch Einsaugen am anodischen Ende der Kapillare injiziert. Anschließend wird eine Proteintrennung bei hoher Spannung durchgeführt und die Proteine werden am kathodischen Ende der Kapillare bei 200 nm nachgewiesen. Die Kapillaren werden sofort mit einer Waschlösung gewaschen und für die nächste Analyse mit Puffer vorbereitet. Proteine werden in der folgenden Anordnung nachgewiesen: gammaglobuline, Beta-2-globuline, Beta-1-globuline, Alpha-2-globuline, Alpha-1- globuline und Albumin in jeder Zone, die ein oder mehrere Proteine enthält. IM LIEFERUMFANG DER CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 KITS ENTHALTENE MATERIALIEN WARNUNG : Siehe Sicherheitsdatenblätter. ARTIKEL ART.-Nr ART.-Nr. 2023* Puffer (gebrauchsfertig) 2 Fläschchen, jeweils 700 ml 8 Fläschchen, jeweils 700 ml Waschlösung (Stammlösung) 1 Fläschchen, 75 ml 4 Fläschchen, jeweils 75 ml Verdünnungssegmente 1 Packung von 90 4 Packungen von 90 Filter 3 Filter 12 Filter * CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 MAXI-KIT FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE : Alle Reagenzien eines Kits müssen immer zusammen, gemäß den Instruktionen der Packungsbeilage benutzt werden. BITTE DIE PACKUNGSBEILAGE SORGFÄLTIG LESEN. ACHTUNG : Kein deionisiertes Wasser für den Hausgebrauch wie zum Beispiel Wasser für Bügeleisen verwenden (Gefahr größerer Kapillarschäden). Ausschließlich Wasser der Qualität "Ultrapur" verwenden, wie zum Beispiel Wasser zur Injektion. 1. PUFFER Vorbereitung Der Puffer ist gebrauchsfertig. Er enthält : Pufferlösung, ph 9,9 ± 0,5 ; Additive, die in den eingesetzten Konzentrationen ungefährlich und für eine optimale leistung erforderlich sind. Puffer für die Proteinanalyse bei Kapillarelektrophorese. Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall Puffer bei raumtemperatur (15 bis 30 C) oder kühl (2 bis 8 C) lagern. Er ist bis zu dem auf der Kitverpackung oder dem Etikett des Pufferfläschchens angegebenen Verfallsdatum stabil. nicht in der nähe eines Fensters oder einer Wärmequelle lagern. ZU BEACHTEN: Wird der Analysepuffer bei 2 8 C gelagert, ist es empfehlenswert, das Reagenz erst nach Erwärmen auf Raumtemperatur zu verwenden. nicht EInFrIErEn. nachdem das Puffer-Fläschchen geöffnet und in das CAPIllArYS-gerät eingesetzt wurde, ist es maximal 2 Monate lang stabil (insgesamt). Wenn geplant ist, das Puffer-Fläschchen länger als 2 Monate zu verwenden, muss es nach jedem gebrauch aus dem gerät genommen und bei raumtemperatur (15 bis 30 C) oder gekühlt (2 bis 8 C) aufbewahrt werden. Auf diese Weise bleibt der Puffer bis zu dem auf dem Etikett des Puffer- Fläschchens angegebenen Haltbarkeitsdatum stabil. Den Puffer verwerfen, wenn sich sein Aussehen verändert, z. B., wenn er durch mikrobielle Kontamination trübe wird SEBIA ArBEItSAnlEItung - Deutsch

3 2. WASCHLÖSUNG Vorbereitung Die Ampulle mit der Stammwaschlösung muss mit destilliertem oder vollentsalztem Wasser auf 750 ml verdünnt werden. nach Verdünnung enthält die Waschlösung eine lauge mit ph 12. Zum Waschen der Kapillaren des CAPIllArYS-Systems. WICHTIG : Es wird empfohlen, vor dem Befüllen des Waschlösungsbehälters die Behälteröffnung, den Anschluss und den Schlauch mit reichlich destilliertem oder deionisiertem Wasser abzuwaschen, um Salzablagerungen zu verhindern. Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall Die Stammlösung und die verdünnte lösung in geschlossenen Behältern bei raumtemperatur oder gekühlt lagern. Die Stammlösung ist bis zum Verfallsdatum auf der Verpackung und auf dem Etikett des Waschlösungsfläschchens haltbar. Die verdünnte Waschlösung ist für 3 Monate haltbar. Die verdünnte Waschlösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert, z. B., wenn sie durch mikrobielle Kontamination trübe wird. 3. VERDÜNNUNGSSEGMENTE Verdünnungssegmente für den einmaligen gebrauch. WARNUNG: Mit biologischen Proben befüllte Verdünnungs-Segmente vorsichtig behandeln. 4. FILTER Einweg-Filter für die Filtration des Analysen-Puffers, der gebrauchsfertigen Waschlösung und des destillierten Wassers (verwendet für die Spülung der Kapillaren). WICHTIG: Beim Austausch des Kits alle Filter systematisch auswechseln. Einen Filter am Verbindungsstück der Schlauchenden, das in die Fläschchen mit Puffer, Waschlösung und destilliertes bzw. deionisiertes Wasser eintaucht, anschrauben. Vor dem Installieren der Filter auf dem CAPIllArYS-System sind die Verbindungsstücke und Schläuche mit destilliertem bzw. deionisiertem Wasser zu spülen. Lagerung Die Filter können vor gebrauch in ihrer verschweißten Verpackung im trockenen bei raumtemperatur oder gekühlt gelagert werden. BENÖTIGTE REAGENZIEN (NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN) WARNUNG : Siehe Sicherheitsdatenblätter. 1. DESTILLIERTES ODER ENTIONISIERTES WASSER Anwendung Zur Spülung der Kapillaren mit dem automatischen System CAPIllArYS von SEBIA. Es wird empfohlen, gefiltertes destilliertes oder deionisiertes Wasser (Filter mit Porengröße von 0,45 µm) mit einer leitfähigkeit von unter 3 μs/cm, was einem Widerstand von über 0,33 MΩ.cm entspricht, zu verwenden. um bakterielle Kontaminationen zu vermeiden, ist das Wasser täglich zu wechseln. Für einen optimalen Betrieb 35 µl/dl ClEAn PrOtECt (SEBIA, Bestellnummer 2059, 1 Fläschchen, 5 ml) zugeben. WICHTIG: Es wird empfohlen, den Spülbehälter vor dem Füllen mit ausreichend entionisiertem oder destilliertem Wasser zu reinigen. 2. CAPICLEAN Zusammensetzung Ein Fläschchen CAPIClEAn Konzentrat (SEBIA, Art.-nr. 2058, 25 ml) enthält in gelöster Form: proteolytische Enzyme, oberflächenspannungssenkende Substanzen und Additive, in den verwendeten Konzentrationen nicht giftig, nötig für die optimale leistung. Zur reinigung der Probensonde im automatisierten CAPIllArYS-System von SEBIA für die Kapillarelektrophorese im rahmen der CAPIClEAnreinigungssequenz. WICHTIG: - Wenn pro Woche weniger als 500 Proben analysiert werden, führen Sie mindestens einmal pro Woche eine CAPIClEAn-reinigungssequenz aus. - Wenn weniger als 500 Proben pro tag aber mehr als 500 Proben pro Woche analysiert werden, führen Sie immer nach jeweils 500 Analysen eine CAPIClEAn-reinigungssequenz aus. - Wenn pro tag mehr als 500 Proben analysiert werden, führen Sie einmal pro tag eine CAPIClEAn-reinigungssequenz aus. Sie die Bedienungsanleitung von CAPICLEAN, SEBIA. WICHTIG: Das Verdünnungssegment nach der reinigung der Probensonde nicht wiederverwenden. Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall CAPIClEAn wird gekühlt (2-8 C) gelagert. Es bleibt bis zu dem auf dem Etikett des Fläschchens angegebenen Datum haltbar. nicht EInFrIErEn. In der CAPIClEAn-Ampulle können niederschlag oder kombinierte suspendierte Partikel (Flocken) zu beobachten sein, die aber keine nachteiligen Auswirkungen auf die Anwendung haben. lösen Sie diesen niederschlag bzw. diese Partikel nicht auf. Es wird empfohlen, nur den Überstand zu sammeln. 3. NATRIUM-HYPOCHLORID-LÖSUNG (zur Reinigung der Probennadel) Vorbereitung um eine natriumhypochloritlösung (2 bis 3 % Chlorid) herzustellen, 250 ml 9,6%-ige, konzentrierte Chloridlösung mit kaltem destilliertem oder vollentsalztem Wasser auf 1 liter verdünnen. Zur reinigung der Probennadel des CAPIllArYS-Systems (wöchentliche Wartung zur Beseitigung von Proteinablagerungen an der nadel). Beachten Sie die SEBIA Anleitung für CAPILLARYS

4 Benutzen Sie das spezielle Probenrack für die Wartung (nr. 100). Stellen Sie ein vorbereitetes röhrchen mit 2 ml verdünnter chlorinierter lösung in Position 1 des Probenracks. Schieben Sie das Probenrack nr. 100 in das CAPIllArYS-System. Im auf dem Bildschirm erscheinenden Fenster "PFlEgE" die Option "reinigung der Probensonde (chlorierte natriumhypochloritlösung) starten" auswählen und bestätigen. Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall Die chlorierte Arbeitslösung bei raumtemperatur in einem geschlossenen Behälter aufbewahren; sie ist 3 Monate lang stabil. Eine lagerung bei direkter Sonneneinstrahlung und in der nähe von Wärme- und Zündquellen sowie Säuren und Ammoniak vermeiden. 4. CAPILLARYS / MINICAP WASCHLÖSUNG Vorbereitung Jedes Fläschchen der Stamm-CAPIllArYS / MInICAP-Waschlösung (SEBIA, Art.-nr. 2052, 2 Fläschchen, 75 ml) muß auf 750 ml mit destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser aufgefüllt werden. nach Verdünnung enthält die Waschlösung eine lauge mit ph 12. Zum Waschen der Kapillaren nach der elektrophoretischen Proteintrennung. Dieses zusätzliche reagenz wird benötigt, wenn die Analysen in Serien mit weniger als 40 Proben durchgeführt werden. WICHTIG : Es wird empfohlen, vor dem Befüllen des Waschlösungsbehälters die Behälteröffnung, den Anschluss und den Schlauch mit reichlich destilliertem oder deionisiertem Wasser abzuwaschen, um Salzablagerungen zu verhindern. Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall Die Stammlösung und die verdünnte Waschlösung in geschlossenen Behältern bei raumtemperatur oder gekühlt lagern. Die Stammlösung ist bis zum Verfallsdatum auf der Kit-Packung bzw. auf dem Etikett des Waschlösungsfläschchens haltbar. Die verdünnte Waschlösung ist für 3 Monate haltbar. Die verdünnte Waschlösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert, z. B., wenn sie durch mikrobielle Kontamination trübe wird. HINWEISE : Die zur Validierung der Reagenzien durchgeführten Proben zeigten, dass für die verschiedenen Lösungen und bei Anwendung einer angepassten Ausrüstung für das Rekonstitutionsvolumen eine Abweichung von ± 5 % am Endvolumen keine negative Auswirkung auf die Analyse hat. Das zur Rekonstitution der Lösungen eingesetzte destillierte oder deionisierte Wasser muss frei von Bakterienproliferation und Schimmelpilz sein (benutzen Sie Filter 0.45 µm) und eine Leitfähigkeit von unter 3 μs/cm haben, was einem Widerstand von über 0,33 MΩ.cm entspricht. BENÖTIGTE AUSRÜSTUNG UND ZUBEHÖR 1. CAPIllArYS-System von SEBIA : CAPIllArYS Bestell-nr. 1220, CAPIllArYS 2 Bestell-nr oder CAPIllArYS 2 FlEX-PIErCIng Bestell-nr Probenracks im lieferumfang des CAPIllArYS. 3. Behälter Kit im lieferumfang des CAPIllArYS: Spüllösung (zum Füllen mit destilliertem oder deionisiertem Wasser), Waschlösung und Abfallbehälter. PROBEN FÜR DIE ANALYSE ANALYSE DER SERUMPROBEN Probensammlung und -lagerung Für die Analyse wird die Verwendung frischer Serumproben empfohlen. Diese müssen nach den etablierten, in klinischen labortests angewendeten Methoden entnommen werden. Die Proben können bis zu 10 tage bei 2 bis 8 C aufbewahrt werden. Im Fall längerer lagerung sollten Proben bei 18 / 30 C 8 Stunden nach der Entnahme eingefroren werden. gefrorene Sera sind 1 Monat stabil. Proteine von Proben, die bei 2-8 C oder C gelagert werden, werden abgebaut, insbesondere das C3-Komplement, für das die Abbaukinetik bei C sehr schnell erfolgt und länger als 3 tage deutlich sichtbar ist. Ein Serum, das zwischen 2-8 C oder zwischen C gelagert wird, hat eine Beta-2-Fraktion, die graduell abgebaut wird und ggf. verfälscht erscheint (mit kleinen zusätzlichen Fraktionen auf der gamma-seite und / oder auf der Beta-1 infolge des Verfalls des C3-Komplements), und eine Alpha-2-Fraktion, deren Form leicht verändert sein kann. nach 10 tagen bei 2-8 C oder nach 3 tagen bei C verformt sich die Beta-1-Fraktion durch Expandieren, und die Beta-2-Fraktion wächst stark. Je nach Proben kann während der lagerung bei 2-8 C für länger als 10 tage oder bei C für länger als 3 tage die automatische Integration der Fraktionen durch die Software zwecks Datenverarbeitung potentiell gestört sein. HINWEIS : Jedes Labor muss sicherstellen, dass die Proben unter Bedingungen transportiert werden, die für deren Intaktheit optimal sind (1). (1) ISO : Medizinische Labore - Qualitäts- und Kompetenzanforderungen. Probenvorbereitung unverdünnte Serumproben verwenden. gekühlte oder eingefrorene Seren (insbesondere diejenigen, die Kryoglobuline oder Kryogel enthalten) können viskös oder trübe werden. Diese Proben können bei raumtemperatur direkt analysiert werden. Proben, die polymerisiertes Immunglobulin enthalten, können ohne weitere Behandlung eingesetzt werden. Es empfiehlt sich, vor der Analyse das Serum auf mögliche Hämolyse oder trübungen bzw. Kryoglobuline zu überprüfen

5 Nicht verwendbare Proben Hämolysierte Serumproben vermeiden. Die Hämolyse erzeugt eine doppelte Alpha-2-Bande. Keine alten oder falsch gelagerte Proben verwenden, die Beta-2-Fraktion könnte vermindert sein. Keine Plasmaproben verwenden. Fibrinogen wandert in die Beta-2-Position (Schulter auf der Beta-2-Bande oder Überlagerung mit der Beta-2-Zone, was unter umständen einen Anstieg dieser Fraktion mit sich führt). Fibrinogen kann bei bestimmten Proben (Plasma, unvollständig defibriniertes Serum oder von Patienten, die mit Antikoagulantien behandelt wurden) die Analyse stören und zu einer fehlerhaften Auswertung führen (Verwechslung mit einer monoklonalen Bande oder verstärkte Beta-2-Fraktion). Wenn eine alte Plasmaprobe analysiert wird (was nicht empfohlen wird), ist das auf Dauer instabile Komplementprotein C3 teilweise abgebaut, weshalb die Beta-2-Zone dann im Wesentlichen aus Fibrinogen besteht. ANALYSE DER URINPROBEN Siehe die Arbeitsanleitung des CAPILLARYS / MINICAP URINE Kit, SEBIA, PN HINWEIS : Sammelröhrchen für biologische Proben sind in der erhältlichen Dokumentation über die präanalytische Phase für die biomedizinische Analyse (von den Röhrchenherstellern gelieferte Daten, Leitfäden und Empfehlungen zur Abnahme biologischer Proben...) beschrieben. Bei fehlenden Angaben bezüglich der Art des zu verwendenden Röhrchens in der sanweisung richten Sie sich bitte nach dieser Dokumentation. Angaben bezüglich der Maße des zu verwendenden Röhrchens finden Sie im Dokument "Merkmale der je nach Gerät zu verwendenden Röhrchen" von SEBIA. Die präanalytische Phase ist gemäß dem Stand der Technik, den unterschiedlichen Empfehlungen, einschließlich derjenigen der Röhrchenhersteller, sowie den geltenden Vorschriften durchzuführen. PROZEDUR Das CAPIllArYS System ist ein Multiparameterinstrument für Serumproteinanalysen mit 8 parallelen Kapillaren in der folgenden reihenfolge: Barcode-lesen der Probenröhrchen (bis zu 8 röhrchen) und Probenracks ; Probenverdünnung vom Primärröhrchen in die Verdünnungssegmente ; Waschen der Kapillare ; Injektion der verdünnten Proben ; Protein Analyse und direkter nachweis in den Kapillaren. Die manuellen Schritte schließen ein: Hineinstellen der Probenröhrchen in die Probenracks ; Hineinstellen der Probenracks ins CAPIllArYS gerät ; Entfernen der Probenracks nach der Analyse. BIttE SOrgFÄltIg DIE CAPIllArYS BEDIEnungSAnlEItung lesen. I. VORBEREITUNG DER ELEKTROPHORETISCHEN ANALYSE 1. Das CAPIllArYS gerät und den Computer einschalten. 2. Die Software starten, die CAPllArYS startet automatisch. 3. Das CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Kit muß mit dem CAPIllArYS Programm "PrOtEIn(E) 6" verwendet werden. Die Schritte zum auswählen des Analysenprogramms und des Pufferwechsels entnehmen Sie der CAPIllArYS Bedienungsanleitung. 4. Das Probenrack enthält 8 Positionen zum Einsetzen von Probenröhrchen. Die 8 Probenröhrchen sollten so eingesetzt werden, daß die Barcodes auf den röhrchen durch die seitlichen Öffnungen des Probenracks sichtbar sind. WICHTIG: Sollte die Anzahl zu analysierender Proben kleiner als 8 sein, muß das Probenrack durch das Einsetzen von röhrchen mit destilliertem Wasser oder physiologischer Kochsalzlösung auf 8 röhrchen aufgefüllt werden. 5. Auf jedes Probenrack ein neues Verdünnungssegment platzieren. Bei fehlendem Segment wird das Probenrack ausgeworfen. 6. Die kompletten Probenracks ins CAPIllArYS System durch die Öffnung in der Mitte des Instruments schieben. Bis zu 13 Probenracks können nacheinander und kontinuierlich ins gerät hineingestellt werden. Für den Einsatz einer Qualitätskontrolle wird empfohlen, das entsprechende Probenrack nr. 0 zu verwenden. 7. Die schon analysierten Probenracks von der Platte auf der linken Seite des geräts entfernen. 8. Die gebrauchten Verdünnungssegment vorsichtig aus dem Probenrack entnehmen und entsorgen. WARNUNG: Mit biologischen Proben befüllte Verdünnungs-Segmente vorsichtig behandeln. VERDÜNNUNG - MIGRATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN SCHRITTE 1. Die Barcodes werden auf den Probenröhrchen und auf dem Probenracks gelesen. 2. Die Proben werden in Puffer verdünnt und die Verdünnungsnadel wird nach jeder Probe gespült. 3. Die Kapillaren werden gewaschen. 4. Die Kapillaren nehmen verdünnte Proben auf. 5. Die Migration erfolgt bei konstanter Spannung für 4 Minuten (temperaturkontrolle durch Peltier-Elemente). 6. Die Proteine werden direkt durch Messen bei 200 nm bestimmt und das elektrophoretische Profil erscheint auf dem Bildschirm des Systems. HINWEIS: Diese Schritte wurden für den ersten aufgegebenen Probenracks beschrieben. Das elektrophoretische Muster erscheint nach 10 Minuten. Bei den folgenden Probenracks geschehen die ersten beiden Schritte (Einlesen des Barcodes, und die Probenverdünnung) während der Analyse des vorigen Probenracks. II. ERGEBNISANALYSE Am Ende der Analyse werden von individuellen Banden automatisch relative Quantifizierungen durchgeführt und die Profile können analysiert werden. Mit der gesamtproteinkonzentration kalkuliert das System die Konzentration jeder Fraktion. Die Elektropherogramme werden visuell auf abnormale Muster untersucht. Das optimierte Elektrophorese-Profil wird am Bildschirm der CAPIllArYS angezeigt, wobei die Alpha-1-Fraktion näher an der Albumin-Fraktion dargestellt wird. Optional kann im Standard Modus auch die ursprüngliche Kurveangezeigt werden. BIttE SOrgFÄltIg DIE CAPIllArYS BEDIEnungSAnlEItung lesen

6 III. ENDE DER ANALYSENSEQUENZ Am Ende jeder Analysensequenz muß der Bediener die "Stand by-prozedur" oder die Prozedur zum Herunterfahren des Systems starten, damit die Kapillaren unter optimalen Bedingungen aufbewahrt werden. IV. FÜLLEN DER REAGENZBEHÄLTER Das CAPIllArYS System besitzt eine automatische reagenzienkontrolle. WICHTIG: Bitte beachten Sie die Anweisungen zum Wechsel der reagenzienbehälter und beachten Sie die Farbcodierung der reagenzienbehälter und der Anschlüsse am gerät. Es wird eine Meldung angezeigt, wenn eine der folgenden Aufgaben durchgeführt werden muß: ein neues Pufferfläschchen hineinstellen und / oder ; den Behälter mit verdünnter Waschlösung füllen und / oder ; Füllen Sie den Behälter mit gefiltertem destilliertem oder entionisiertem Wasser, um die Kapillare zu spülen und / oder ; den Abfallbehälter leeren. ACHTUNG : Kein deionisiertes Wasser für den Hausgebrauch wie zum Beispiel Wasser für Bügeleisen verwenden (Gefahr größerer Kapillarschäden). Ausschließlich Wasser der Qualität "Ultrapur" verwenden, wie zum Beispiel Wasser zur Injektion. WICHTIG: Vor dem Auffüllen des Behälters für Spüllösung, wird empfohlen, den Behälter mit ausreichend destilliertem oder deionisiertem Wasser auszuspülen. BIttE SOrgFÄltIg DIE BEDIEnungSAnlEItung VOn CAPIllArYS lesen. QUALITÄTSKONTROLLE Es wird empfohlen bei jeder Analysensequenz eine Serumkontrolle mit einzuschließen. ERGEBNISSE Werte Die direkte Messung der Kapillaren bei 200 nm erzeugt relative Konzentrationen (Prozente) individueller Proteinbanden. Die referenzwerte (Mittelwert ± 2 SD) für individuelle elektrophoretische Hauptserumproteinbanden im CAPIllArYS System wurden von einer gesunden Population von 246 französischen Erwachsenen (Männer und Frauen) aufgestellt: CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 Albumin % Alpha % Alpha % Beta % Beta % Beta % gammaglobuline % Es wird empfohlen, dass jedes Labor eigene Referenzwerte ermittelt. HINWEIS: Die Referenzwerte wurden unter Anwendung der Standardparameter der PHORESIS-Software (Glättung 2 und automatischer Drift) bestimmt. Interpretation Eine Verformung der Fraktionen, d.h. Abweichung von der normalverteilung, deutet auf eine Anomalie hin, besonders das Auftreten einer feinen Extra- Fraktion im Bereich der gamma-fraktion sollte Beachtung finden. Das C4-Komplement migriert zwischen der Beta-1- und Beta-2-Fraktion ; CrP migriert in der Beta-2-Frakion, siehe ElEKtrOPHOrESEMuStEr. Ein relativer Anstieg der Beta-2-Zone im Vergleich zur Beta-1-Zone ohne klinischen Zusammenhang mit einer Entzündungserkrankung muss als Warnsignal gedeutet werden und erfordert weitere Analysen. Im Fall von Zweifeln bei der Interpretation des Musters bzw. der Positionierung der Minima (insbesondere während der Analyse einer externen Kontrolle) ist es erforderlich, das erhaltene Muster mit dem Muster des normalkontrollserums zu überlagern (SEBIA, Bestellnummer 4785). Ein Verdacht auf eine monoklonale Komponente in der Serumprobe kann bestehen, wenn ein einziges elektrophoretisches Proteinmuster retardiert oder deformiert ist oder falls die Software (PHOrESIS-Version 8.63) nicht in der lage ist, die Albumin- / Alpha-1-Zone neu festzulegen. Folgender Warnhinweis erscheint auf dem elektrophoretischen Muster Warning: Migration time out of range (Warnung: Migrationszeit außerhalb des zulässigen Bereichs), und ein rotes Warnsignal leuchtet auf. Dieses rote Warnsignal wird auch auf dem Kurvenmosaik und der Ergebnistabelle der betreffenden Probe angezeigt. Die Probe muss mit Beta-Mercaptoethanol reduziert und nach dieser Behandlung erneut analysiert werden, um die Anwesenheit einer monoklonalen Komponente in der Serumprobe zu bestätigen. Zu diesem Zweck wird eine reduktionslösung mit 1 % Beta-Mercaptoethanol (BME oder 2-Mercaptoethanol, 2-ME) in Fluidil (SEBIA, Bestell-nr. 4587, 1 Fläschchen mit 5 ml) hergestellt. Während das CAPIllArYS auf das rack wartet, 300 µl des unverdünnten Serums mit 100 µl dieser reduktionslösung versetzen, vortexen und maximal 15 Minuten stehen lassen, bevor das Standardverfahren befolgt wird. BITTE BEACHTEN : nach der reduktion mit Beta-Mercaptoäthanol muss die Probe unverzüglich analysiert warden ; es sollte sich daher kein Probenrack zur Analyse mehr im CAPIllArYS gerät befinden. Wenden Sie sich an den technischen Service von SEBIA, wenn viele elektrophoretische Muster dasselbe Warnsignal anzeigen. Eine monoklonale oder oligoklonale Komponente sollte bestätigt werden: - durch Immuntypisierung mit dem SEBIA CAPIllArYS IMMunOtYPIng Kit oder, - durch Immunfixierung mit SEBIA HYDrAgEl IF Kits. unterstützung bei der Interpretation der Elektrophoregramme von Serumproteinen bietet die literatur

7 Alpha-2-Fraktion : Bei gewissen Patientenproben kann es zu einer Verdopplung dieser Fraktion kommen, welche vom Phänotyp des Haptoglobins abhängt (siehe auch unter ElEKtrOPHOrESE-PrOFIlE). Interferenzen und Limitationen Siehe PrOBEn FÜr DIE AnAlYSE. Hohe Probenkonzentrationen an lipoproteinen / triglyceriden oder gallenpigmenten (die dem Serum eine charakteristische gelbgrüne Farbe verleihen) können bei Betrachten des elektrophoretischen Musters den Eindruck erwecken, dass eine Bisalbuminämie vorliegt. Falls (in extrem seltenen Fällen) aufgrund des nachweises bestimmter monoklonaler Proteine (z.b. in hoher Konzentration) eine Kontamination zwischen zwei Proben zu vermuten ist, wird empfohlen, die Analyse der betreffenden Proben (der kontaminierenden und der potenziell kontaminierten) zu wiederholen und dabei die Probennahmekapillare zwischen den Analysen der beiden Proben zusätzlich spülen zu lassen (einzustellen im Analysenprogramm "PrOtEIn(E) 6", Option "Spülung der Probennahmekapillare"). Es gibt die Option, diesen zusätzlichen Spülvorgang für mit dem Programm "PrOtEIn(E) 6" analysierten Proben einzustellen (Beachten Sie jedoch, dass der Probendurchsatz in diesem Fall nur halb so groß ist.) BIttE lesen SIE DIE AnlEItungEn IM CAPIllArYS HAnDBuCH SOrgFÄltIg DurCH. Es wird darauf hingewiesen, daß aufgrund der derzeitigen Kenntnis des zugrundeliegenden Analysenprinzips (theorie der Zonenelektrophorese, Auflösungsvermögen und Sensitivität) keine garantie für ein 100 % Erkennen aller monoklonalen Komponenten gewährt werden kann. Es kann sein, dass eine monoklonale Komponente nicht erkannt wird (wie z.b. polymerisiertes Immunglobin, das im polyklonalen Hintergrund verteilt oder versteckt ist). umgekehrt kann eine leichte Verzerrung des Elektrophoresemusters ein Hinweis für die Präsenz eines monoklonalen Immunglobins sein. In allen Fällen muss der klinische Kontext analysiert werden, und falls Verdacht auf gammopathie besteht, wird die Durchführung einer Immuntypisierung an der Probe empfohlen. Wenn weiterhin Zweifel bestehen, muss das Ergebnis durch ein Immunfixationsverfahren auf einem Agarosegel bestätigt werden. Fehlersuche Bitte rufen Sie den technischen Service von SEBIA an, wenn der test nicht richtig funktioniert, obwohl die Anweisungen zur Vorbereitung, lagerung und zur Durchführung sorgfältig beachtet wurden. Datensicherheitsblätter sowie Informationen zur Abfallentsorgung sind bei SEBIA gmbh, Fulda zu erfragen. CHARAKTERISTISCHE DATEN Die Ergebnisse, die mit der CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Prozedur erhalten wurden, zeigen eine sehr gute Übereinstimmung bei der quantitativen Analyse mit einem Variationskoeffizienten um 2 % für jede Proteinfraktion. Die angegebenen Prozentanteile für die verschiedenen Protein-Fraktionen sind unter Benutzung einer Standardparametrierung der Interpretationssoftware erstellt worden (Integrationsfunktion mit Kurvenglättung-2, automatische Drift). Reproduzierbarkeit innerhalb eines Laufs 5 verschiedene Serumproben wurden in 8 Kapillaren mit der CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Methode mit zwei Pufferchargen untersucht. Der Mittelwert, die Standardabweichung (SD) und der Variationskoeffizient (VK, n = 8) wurden für jede Probe, jede Fraktion und jede Charge kalkuliert. Die tabelle zeigt die Werte für alle Proben von einer testung mit beiden Chargen. FRAKTION ALBUMIN ALPHA-1 ALPHA-2 BETA-1 BETA-2 GAMMA Serum A : lot no. 1 / lot no. 2 MIttEl (%) 60.8 / / / / / / 16.1 SD 0.3 / / / / / / 0.2 VK (%) 0.5 / / / / / / 1.2 Serum B : lot no. 1 / lot no. 2 MIttEl (%) 61.8 / / / / / / 12.9 SD 0.3 / / / / / / 0.2 VK (%) 0.4 / / / / / / 1.6 Serum C : lot no. 1 / lot no. 2 MIttEl (%) 60.6 / / / / / / 14.0 SD 0.5 / / / / / / 0.2 VK (%) 0.8 / / / / / / 1.3 Serum D : lot no. 1 / lot no. 2 MIttEl (%) 62.6 / / / / / / 13.7 SD 0.5 / / / / / / 0.2 VK (%) 0.8 / / / / / / 1.4 Serum E : lot no. 1 / lot no. 2 MIttEl (%) 47.6 / / / / / / 29.3 SD 0.5 / / / / / / 0.3 VK (%) 1.0 / / / / / / 1.2 SD MAX VK (%) MAX HINWEIS : Die Höchstwerte für die Standardabweichung und den Variationskoeffizienten (SA MAX und VK (%) MAX) wurden durch zusätzliche Analysen der Reproduzierbarkeit von Kontrollseren bestimmt, die auf einer Reihe von Geräten durchgeführt wurden. Sie sind unabhängig von den Werten, die in der obigen Ergebnistabelle angegeben sind. Reproduzierbarkeit zwischen verschiedenen Läufen Acht verschiedenen Serumproben wurden 10 mal in 8 Kapillaren mit der CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Methode mit 3 Pufferchargen untersucht. Der Mittelwert, die Standardabweichung und der Variationskoeffizient (n = 10) wurden für jede Probe, jede Fraktion und jede Charge kalkuliert. Die tabelle zeigt die grenzwerte von allen Proben nach testung mit den 3 Pufferchargen

8 FRAKTION MITTELWERT (%) SD VK (%) MITTEL VK (%) Albumin Alpha Alpha Beta Beta gamma Reproduzierbarkeit zwischen verschiedenen Chargen Acht (8) verschiedenen Serumproben wurden 10 mal in 8 Kapillaren mit der CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Methode mit 3 Pufferchargen untersucht. Der Mittelwert, die Standardabweichung (SD) und der Variationskoeffizient (n = 30) wurden für jede Probe, jede Fraktion und jede Charge kalkuliert. Die tabelle zeigt die grenzwerte für alle Proben, nach testung mit allen 3 Pufferchargen und den mittleren Variationskoeffizienten der aus den Variationskoeffizienten jeder Fraktion ermittelt wurde (n = 3) FRAKTION MITTELWERT (%) SD VK (%) MITTEL VK (%) Albumin Alpha Alpha Beta Beta gamma Genauigkeit Pathologische und normale Serumproben (n = 135) wurden mit der CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Prozedur und einem weiteren kommerziell erhältlichen Agarosegelsystem untersucht. Die Korrelationsdaten für die individuellen Banden aus den zusammengefaßten Daten vom CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 System gegenüber dem vergleichbaren gelsystem (y = CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6) waren: Fraktion Korrelations koeffizient y-achsenabschnitt Steigung Min/Max. Werte CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 Albumin Alpha Alpha Beta Beta gamma Sensitivität reihenverdünnungen einer Probe mit einem monoklonalen Protein 4,29 g/l wurden mit der CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Methode elektrophoretisch getrennt. Die höchste Verdünnung mit einer unterscheidbaren monoklonalen Bande entsprach einer 1:16 Verdünnung oder einer monoklonalen Proteinkonzentration von 270 mg/l. HINWEIS: Entsprechend der Position der monoklonalen Komponente und des polyklonalen Hintergrundes in der Gamma-Zone kann die Detektionsgrenze variieren. Linearität Es wurde eine Albuminlösung mit 5,2 g/dl mit einer gammaglobulinlösung mit 3,1 g/dl (die Proteinkonzentrationen wurden mithilfe von nephelometrie bei 280 nm bestimmt) in unterschiedlichen Verhältnissen von 10 zu 10 gemischt (100 % Albuminlösung + 0 % gammaglobulinlösung, 90 % + 10 %, usw..., 0 % Albuminlösung % gammaglobulinlösung). Die gemische wurden anschließend mit dem CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6-Verfahren elekrophoresiert. Die Ergebnisse zeigten, dass der erhaltene Prozentwert einer jeden Fraktion perfekt mit dem theoretischen Prozentwert einer jeden Fraktion innerhalb des gemisches korreliert und dass mit dem CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6-Verfahren sämtliche Abweichungen mit linearität nachweisbar sind. Das CAPIllArYS PrOtEIn(E) 6 Verfahren wurde so festgelegt, dass es für die Albumin- und gammaglobulinfraktion linear innerhalb des gesamten untersuchten Konzentrationsbereichs (zwischen 0,0 und 5,2 g/dl bei Albumin und 3,1 g/dl bei gammaglobulinen) liegt

9 BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY 1. Clark r et al. rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins : qualitative comparison with high-throughput agarose gel electrophoresis. J. Chromatogr. A, 744, (1996). 2. Henskens Y et al. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis. Clin. Chem., 44, (1998). 3. Jellum E et al. Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J. Chromatogr. B, 689, (1997). 4. Jenkins MA and guerin MD. Quantification of serum proteins using capillary electrophoresis. Ann. Clin. Biochem., 32, (1995). 5. Jenkins MA et al. Evaluation of serum protein separation by capillary electrophoresis : prospective analysis of 1000 specimens. J. Chromatogr. B, 672, (1995). 6. Jenkins MA and guerin MD. Capillary electrophoresis procedures for serum protein analysis : comparison with established techniques. J. Chromatogr. B, 699, (1997). 7. Jenkins MA and ratnaike S. Five unusual serum protein presentations found by capillary electrophoresis in the clinical laboratory. J. Biochem. Biophys. Methods, 41, (1999). 8. Katzmann JA et al. Identification of monoclonal proteins in serum : A quantitative comparison of acetate, agarose gel, and capillary electrophoresis. Electrophoresis, 18, (1997). 9. landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, (1995). 10. Oda rp et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, (1997). 11. Wijnen PA and van Dieijen-Visser M. Capillary Electrophoresis of serum proteins : reproducibility, comparison with agarose gel electrophoresis and a review of the literature. Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 34, (1996). 12. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. Impact-Internat, 1986 ; Sept : le Carrer D, Bach-ngohou K. l'électrophorèse capillaire automatisée en biologie clinique. Spectra Biologie, 146 : (2005). 14. l. guis, A. Chaumier, V. le gall, S. Havrez (Février 2013) Intégration du Capillarys 2 Flex Piercing (Sebia) dans un laboratoire de biologie médicale spécialisée. Revue Francophone des Laboratoires, 449, Blancher A., Boulestin A., Abbal M. (2007) Diagnostic biologique des gammapathies monoclonales en 2007 et leur identification immunologique. Feuillets de biologie, 48, n 279, Blessum C., Jeppsson J.O., Aguzzi F., Bernon H., Bienvenu J. (1999) l électrophorèse capillaire : principe et applications au laboratoire de biologie clinique. Annales de Biologie Clinique. Volume 57, numéro 6, , novembre - Décembre Chartier C. et al (2011) Evaluation of two automated capillary electrophoresis systems for human serum protein analysis. Clin. Biochem., DOI: /j.clinbiochem

10 SCHÉMAS / FIGURES PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 1 Albumin Gamma Beta-2 Beta-1 Alpha-2 Alpha-1 Gammaglobulins C3 Complement C4 Complement Transferrin Hemopexin 2-2 Haptoglobin phenotype Alpha-2 macroglobulin Prealbumin Albumin α-lipoproteins preß-lipoproteins ß-lipoproteins Alpha-1 acid glycoprotein Alpha-1 antitrypsin Figure Haptoglobin phenotype Gamma Beta-2 Beta-1 Alpha-2 Alpha-1 Albumin

11 SCHÉMAS / FIGURES PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure Haptoglobin phenotype Gamma Beta-2 Beta-1 Alpha-2 Alpha-1 Albumin