H&E Färbung. Hämatoxylinlösung modifiziert nach Gill III, Mayers Hämalaun Lösung und Eosin G-Lösung. Histologie Ihre Ziele im Fokus.

Transkript

1 H&E Färbung Hämatoxylinlösung modifiziert nach Gill III, Mayers Hämalaun Lösung und Eosin G-Lösung Histologie Ihre Ziele im Fokus.

2 Das Trio für die H&E Färbung In zwei Schritten zum Ziel: Hämatoxylinlösung mod. nach Gill III oder Mayers Hämalaun Lösung für die Kernfärbung und Eosinlösung für die Gegenfärbung Für die bekannteste und am meisten genutzte Färbung, die Hämatoxylin-Eosin Färbung (H&E), werden Hämatoxylinlösungen für die Kernfärbung und Eosinlösungen für die Zytoplasmafärbung benutzt. Im ersten Schritt werden die Kerne mit einer Hämatoxylinlösung gefärbt. Die Kerne erscheinen blau, dunkelviolett bis schwarz. Der zweite Schritt ist die Gegenfärbung mit einem Xanthen- Farbstoff wie z.b. Eosin G, Eosin B oder Erythrosin B. Dabei werden Zytoplasma, Kollagen, Keratin und Erythrozyten rot gefärbt. Die H&E Färbung ist die Standardfärbung in der Histologie, die einen Überblick über die Struktur des Gewebes liefert und dabei die Unterscheidung der untersuchten Strukturen in normal, entzündlich- oder degenerativ-verändert oder pathologisch ermöglicht. Auf der Grundlage der H&E Färbung kann oft bereits die Diagnose erstellt werden oder es wird festgelegt, welche Spezialfärbungen zur Feintypisierung noch notwendig sind. Die H&E Färbung wird für folgendes Material verwendet: Paraffinschnitte, Gefrierschnitte und klinisch-zytologisches Material wie Sputum, Urin, FNAB, Ergüsse, Spülflüssigkeiten.

3 Ihre Vorteile für die H&E Färbung: Hervorragende Ergebnisse in der Kombination Aufeinander abgestimmte Komponenten Gebrauchsfertige Reagenzien Einfache Handhabung Entwickelt, produziert und geprüft nach DIN EN ISO Durchführung H&E Färbung Färbeprotokoll 1. Schnitte in typischer Weise entparaffinieren und rehydratisieren 2. Färben in Mayers Hämalaun Lösung 3 min oder Hämatoxylinlösung mod. nach Gill III 3 min 3. Spülen in HCl Lösung 0,1% 2 sec 4. Differenzieren in fließendem Leitungswasser 3-5 min 5. Färben in Eosin G-Lösung 0,5% wässrig, 3 min Eosin G-Lösung 0,1% wässrig 3-5 min oder Eosin B-Lösung 0,1% wässrig, Erythrosin B-Lösung 0,1% wässrig 3-5 min 6. Spülen in Leitungswasser 30 sec 7. Ansteigende Alkoholreihe, 2 x Neo-Clear oder Xylol 8. Eindecken mit Neo-Mount oder mit Entellan Neu Technischer Hinweis: Zur Intensivierung der Rotfärbung können vor Gebrauch pro 100ml Eosinlösung ca. 0,2ml Essigsäure (Eisessig) 100 % wasserfrei, (Merck Art. Nr ) zugesetzt werden. Ergebnisse Kerne dunkelblau Eosin G Eosin B Erythrosin B Zytoplasma, rot-orange rot rot Kollagen, Elastin, Erythrozyten gelb-orange rot-orange rot-orange

4 Hämatoxylinlösung modifiziert nach Gill III Prinzip Bei allen Hämatoxylin-Färbungen binden im sauren Milieu positiv geladene Metall- (hier: Aluminium-) Hämatein-Komplexe an die negativ geladenen Phosphatreste der Zellkern-DNA. Dazu wird bei den Gill-Lösungen Hämatoxylin mit Natriumiodat zu Hämatein oxidiert. Diese Oxidation verläuft gegenüber der früher gebräuchlichen Quecksilberoxidation kontrolliert, effizienter und weniger umweltschädlich. Leber, mit Hämatoxylinlösung mod. nach Gill III gefärbt Produktvorteile Auswahl einer den Anforderungen entsprechenden Farbstoffkonzentration (Histologie = Gill III, Zytologie = Gill II) Gebrauchsfertige Lösung Hergestellt mit Certistain Farbstoffen Keine Filtration notwendig Kurze Färbezeit Stabile Lösung in der Lagerung und im Gebrauch Gute Rot/ Blau-Differenzierung Kein direkter Kontakt mit Farbstoffpulver Mayers Hämalaun Lösung Prinzip Mayers Hämalaun ist eine der klassischen Färbelösung für die Kernfärbung in der Histologie. In der Hämalaunlösung bildet Hämatoxylin mit Aluminiumionen eine Komplexverbindung. Eine selektive Kernfärbung wird duch die Azidität der Färbelösung und einen Überschuss an Alaun erreicht. Darm, mit Mayers Hämalaun Lösung gefärbt Produktvorteile Selektive Kernfärbung Klassische Färbelösung Praktische Handhabung Keine Überfärbung Gebrauchsfertig Ergiebig Reproduzierbare Ergebnisse Gute Haltbarkeit Kein direkter Kontakt mit Farbstoffpulver Hämatoxylinlösung mod. nach Gill III und Mayers Hämalaun Lösung Beide Lösungen gehören durch Zusatz von Aluminiumsalzen der gleichen Gruppe der Hämatoxylinlösungen, den sogenannten Hämalaunen, an. Hämatoxylinlösung nach Gill III und Mayers Hämalaun Lösung werden für die Kernfärbung in der Histologie und in der Immunhistochemie verwendet. Beide Lösungen benötigen etwa die gleiche Zeit für Färbung, Differenzieren und Bläuen. Die Hämatoxylin Lösung mod. nach Gill muss vor dem Gebrauch nicht filtriert werden, Mayers Hämalaun Lösung muss filtriert werden. Beide Lösungen sind produziert und geprüft nach DIN EN ISO

5 Eosin G-Lösung 0,5 % wässrig Produktvorteile Prinzip Eosin G (C.I ) ist ein saurer Farbstoff, der hauptsächlich an Proteine gebunden wird. Die wässrige Eosin G-Lösung ist die am meisten verwendete Zytoplasma-Färbung in der Histologie. Die Balance zwischen der Kernfärbung mit Hämatoxylin und der Zytoplasma-Färbung mit Eosin ist eine Frage des persönlichen Geschmacks und der persönlichen Erfahrung. Die Konzentration der gebrauchsfertigen Lösung bietet die Möglichkeit, ggf. durch Verdünnung schnell und einfach zum gewünschten Ergebnis zu kommen. Für die Färbelösungen sind geprüfte Applikationen im Internet unter oder auf Anfrage erhältlich. Leber, mit Eosin G-Lösung gefärbt Gebrauchsfertig Als Stammlösung verwendbar Sehr ergiebig Nach Anbruch lange haltbar Ausgewählte Rohstoffe Hohe Reproduzierbarkeit Abgestimmt auf die Hämatoxylin- Lösungen von Merck Geprüfte Applikationen Kein direkter Kontakt mit Farbstoffpulver Bestellinformation Produkt Merck Art.Nr. Packungsgröße Eosin G-Lösung 0,5% wässrig l Eosin G (C.I ) Certistain g, 100 g Eosin B (C.I ) Certistain g, 100 g Erythrosin B (C.I ) Certistain g, 25 g Mayers Hämalaun Lösung ml, 1 l, 2,5 l Hämatoxylinlösung ml, 1 l, 2,5 l modifiziert nach Gill III Hämatoxylin (Monohydrat) g, 100 g (C.I ) Certistain Hämatoxylin Krist. (C.I ) g, 100 g Entellan Neu ml, 500 ml Neo-Mount ml Neo-Clear (Xylol Ersatz) l, 4 x 5 l Alle genannten Produkte sind CE zertifiziert. Aktuelle Anwendungsvorschriften halten wir für Sie im Internet unter bereit. Neben den gebrauchsfertigen Färbelösungen können die Färbelösungen auch selbst, aus den entsprechenden Festfarbstoffen, angesetzt werden. Die Vorschriften hierzu erhalten Sie ebenfalls im Internet. Hilfsreagenzien Ethanol absolut zur Analyse l, 2,5 l, 5 l ACS, ISO, Reag. Ph Eur Ethanol vergällt mit l, 2,5 l ca. 1 % Ethylmethylketon zur Analyse

6 Unser Vertriebspartner in Deutschland VWR International GmbH Hilpertstraße 20A D Darmstadt Bundesweiter Bestellservice: Tel. 0180/ Fax 0180/ Anwendungstechnische Beratung: Tel / Fax / medlab@de.vwr.com in Österreich VWR International GmbH Zimbagasse 5 A-1147 Wien Tel Fax info@at.vwr.com in der Schweiz VWR International AG Rüchligstraße 20 Postfach 464 CH-8953 Dietikon Tel Fax info@ch.vwr.com W /04 Weitere Informationen zu Merck und unseren Produkten: Merck KGaA Darmstadt, Germany microscopy@merck.de Wir informieren und beraten unsere Kunden im Rahmen unserer Möglichkeiten nach bestem Wissen, jedoch unverbindlich und ohne Haftungsübernahme. Bestehende Gesetze und andere Vorschriften sind in jedem Falle von unseren Kunden zu beachten. Dies gilt auch hinsichtlich etwaiger Schutzrechte Dritter. Unsere Information und Beratung entbinden unsere Kunden nicht vom Erfordernis, unsere Produkte in eigener Verantwortung auf die Eignung für die vorgesehenen Zwecke zu prüfen.