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1 Stefanie Franz (Autor) Effekt selektiver und nicht selektiver nichtsteroidaler Antiphlogistika auf die Entzündungsreaktion von durch Ischämie und Reperfusion geschädigtem equinen Jejunum Copyright: Cuvillier Verlag, Inhaberin Annette Jentzsch-Cuvillier, Nonnenstieg 8, Göttingen, Germany Telefon: +49 (0) , Website:

2 Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung Literatur Histologischer Aufbau der Darmwand Intestinale Ischämie und Reperfusion Darmstrangulationen beim Pferd Makroskopische und histologische Veränderungen Biochemische und zelluläre Veränderungen Rolle der Neutrophilen Granulozyten Nachweis der neutrophilen Granulozyten Rolle der Mastzellen und Makrophagen Eosinophile Granulozyten Eosinophile Granulozyten im gesunden Gastrointestinaltrakt Eosinophile Granulozyten bei intestinaler Schädigung Nachweis der eosinophilen Granulozyten Postoperativer Ileus Allgemeines und prädisponierende Faktoren Pathogenese Inflammatorische Genese Neutrophile Granulozyten Makrophagen und proinflammatorische Zytokine Kinetisch aktive Mediatoren Stickstoffmonoxid Prostaglandine Hypocalcämie- und Hypomagnesiämie Die Cyclooxygenasen Allgemeines zu Cyclooxygenasen Die Cyclooxygenase Konstitutive Expression Induzierbarkeit... 41

3 2.4.3 Die Cyclooxygenase Konstitutive Expression Induzierbarkeit Eigenschaften Die Produkte der Cyclooxygenasen - Prostanoide Prostanoide im Gastrointestinaltrakt Einfluss auf die Darmbarriere Einfluss auf die Darmmotilität Wirkung von Cyclooxygenasehemmern Nichtsteroidale Antiphlogistika Allgemeines zu den Nichtsteroidalen Antiphlogistika Nebenwirkungen der Cyclooxygenasehemmung im Gastrointestinaltrakt Blutflussreduktion und Mucosaschäden Hemmung der Regeneration der Darmbarriere Beeinflussung der Motilität des Gastrointestinaltraktes Einsatz selektiver NSAIDs NSAIDs, Entzündungsmediatoren und neutrophile Granulozyten Einzelstoffe Flunixin-Meglumin Pharmakokinetik Beeinflussung der Mucosapermeabilität Wirkung auf die Darmkontraktilität Einsatz bei Endotoxämie Nebenwirkungen Firocoxib Pharmakokinetik Anwendung im postoperativen Schmerzmanagement Nebenwirkungen Material und Methoden Probanden Vorbereitung der Pferde und Narkose... 59

4 3.2 In vivo Modell O2C-Gerät Pulsoxymetrie Ischämie und Reperfusion Histologie Probenverarbeitung Vorbehandlung der Schnitte für histologische Färbungen und Immunhistochemie Histologische Färbungen Hämatoxylin-Eosin Färbung Lunafärbung Immunhistochemie Calprotectin Cyclooxygenase Cyclooxygenase Molekularbiologie Trizolextraktion Vorbereitung für die konventionelle PCR (mrna-analyse) RNA Isolierung RNA Vermessung DNase Verdau cdna-synthese Konventionelle PCR für Cyclooxygenase-1 und Vorbereitung für den Western Blot Proteinisolation SDS-Gelelektrophorese Western Blot für die Cyclooxygenase-1 und Immunodetektion Lichtmikroskopische Untersuchung Auswertung Lunafärbung und Calprotectin-Immunhistochemie Tunica muscularis... 82

5 Tunica serosa Auswertung Cyclooxygenase-1 und -2 Immunhistochemie Tunica muscularis und Tunica serosa Ergebnisse Lunafärbung Deskription Quantifizierung der eosinophilen Granulozyten Tunica muscularis Tunica serosa Immunhistochemie Calprotectin Deskription Kontrolle 1 (K1) ungeschädigtes Jejunum Ischämisch geschädigtes Jejunum (I1) Durch Ischämie und Reperfusion geschädigtes Jejunum (R1) Kontrolle 2 (K2) ungeschädigtes Jejunum Ischämisch geschädigtes und mit einem NSAID behandeltes Jejunum (I2) Durch Ischämie und Reperfusion geschädigtes und mit einem NSAID behandeltes Jejunum (R2) Kontrolle 3 (K3) ungeschädigtes Jejunum Negativ- und Isotypenkontrolle Quantifizierung der neutrophilen Granulozyten Tunica muscularis Tunica serosa Cyclooxygenase Deskription Kontrolle 1 (K1) ungeschädigtes Jejunum Ischämisch geschädigtes Jejunum (I1) Durch Ischämie und Reperfusion geschädigtes Jejunum (R1) Negativ- und Isotypenkontrolle Cyclooxygenase

6 Deskription ungeschädigtes Jejunum zu den Probezeitpunkten K1, K2 und K Ischämisch geschädigtes Jejunum zu den Probezeitpunkten I1 und I Durch Ischämie und Reperfusion geschädigtes Jejunum zu den Probezeitpunkten R1 und R Negativ- und Isotypenkontrolle Positivkontrolle RT-PCR Western Blot Diskussion Methodik in vivo Versuch Probanden Versuchsaufbau Anlegen der Ischämie O2C-Gerät und Pulsoxymeter Ischämie und Reperfusionslänge Abstände der Proben zueinander Zeitpunkt der Applikation des nichtsteroidalen Antiphlogistikums Auswahl der nichtsteroidalen Antiphlogistika Methodik - Histologische und molekularbiologische Auswertung Lunafärbung Calprotectin-Immunhistochemie Cyclooxygenase-1 und Cyclooxygenase Ergebnisse Eosinophile Granulozyten Neutrophile Granulozyten Allgemein Vergleichende Betrachtung in der Ring- und Längsmuskelschicht Neutrophilencluster in der Tunica muscularis und Tunica serosa Einfluss der nichtsteroidalen Antiphlogistika

7 Klinische Relevanz Postoperativer Ileus Versuchsaufbau Cyclooxygenase Konstitutive Expression Expression bei ischämischer Schädigung Expression bei Schädigung durch Reperfusion Einfluss der nichtsteroidalen Antiphlogistika auf die Expression Expression in der Tunica muscularis Expression innerhalb der Muskelzellen Expression in Zellen (ausgenommen Muskelzellen) der Tunica muscularis und Tunica serosa Expression in den Endothelzellen Cyclooxygenase Konstitutive Expression Expression bei ischämischer Schädigung Expression bei Schädigung durch Reperfusion Einfluss der nichtsteroidalen Antiphlogistika auf die Expression Expression in der Tunica muscularis Expression innerhalb der Muskelzellen Expression in Zellen (ausgenommen Muskelzellen) der Tunica muscularis und Tunica serosa Expression in den Endothelzellen Zusammenfassende Diskussion und Ausblick Zusammenfassung Summary Literaturverzeichnis Anhang Versuch Medikamente Geräte Verbrauchsmaterialien

8 9.2 Probenbearbeitung Fixierlösung Lösungen Hämatoxylin-Eosin-Färbung Lösungen Luna-Färbung Puffer und Lösungen Immunhistochemie Puffer und Lösungen PCR und Western Blot Stoffe und Reagenzien Antikörper Geräte Verbrauchsmaterialien Tabellarische Auswertungen Calprotectin Probe K Probe I Probe R Probe K Probe I Probe R Probe K Tabellarische Auswertung Luna Probe K Probe I Probe R Probe K Probe I Probe R Probe K Danksagung

Effekt selektiver und nicht selektiver nichtsteroidaler Antiphlogistika auf die Entzündungsreaktion von durch Ischämie und Reperfusion geschädigtem

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