RhD-Bestimmung. Bedside-Test Antikörpersuchtest Dr. Vera Pászthy

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1 RhD-Bestimmung Bedside-Test Antikörpersuchtest Dr. Vera Pászthy Nationaler Bluttransfusionsdienst Regionale Bluttransfusionszentrale Pécs

2 natürlich vorkommende Antikörper (REGULÄRE) A - anti-b B - anti-a 0 anti-ab (und andere Blutgruppensysteme) Antikörper auf Grund einer Immunisation (IRREGULÄRE)

3 RH-BLUTGRUPPENSYSTEM Entdeckung: 1940 Karl Landsteiner österr. Biologe und Arzt Alexander Wiener am. Arzt

4 Das Experiment: ERYTHROZYTEN von Rhesusaffen Rhesus Macacus Affe 85%: es erfolgt eine Agglutination Rh positive Erythrozyten ANTIKÖRPER mit den ERYTHROZYTEN von verschiedenen Menschen reagiert 15%: keiner Agglutination

5 Rh ist ein Blutgruppensystem heute sind mehr als 50 Antigene bekannt im Klinikum sind am wichtigsten: D,, E, e, C, c

6 Wer ist Rh positiv und wer ist Rh negativ? Es gibt D Antigene: RhD positiv Es gibt KEIN D Antigen :

7 Die wichtigsten Rh-Antigene: D,, E, e, C, c D: serologisch und genetisch nachweisbar nicht nachweisbar nur ein Symbol des Fehlens des großen D

8 Die wichtigsten Rh-Antigene: D,, E, e, C, c D, C, c, E, e: serologisch und genetisch nachweisbar nicht nachweisbar nur ein Symbol des Fehlens des großen D

9 Rh-Antigene sind proteintyps stark immunogen die Antikörper können sich leicht herausbilden (z.b. Transfusion) ganz kleine Menge Blut (0,1 ml) kann die Immunisation hervorrufen (z.b. Schwangerschaft)

10 RhD- Rezipient bekommt RhD+ Blut RhD- RhD+ RhD+ RhD+ die Chance der Immunisation: ca. 50% die Chance der Immunisation: ca. 100% RhD negativer Rezipient: muß RhD negatives Blut bekommen! RhD-

11 Morbus Haemolyticus Neonatorum (MHN) (fetale Erythroblastose) die Mutter der Fötus RhD negativ RhD positiv D

12 RhD positive Erythrozyten D Y anti-d der Fötus ist RhD positiv D D Y Anaemie (Tod) Vorbeugung: anti-d IgG Injektion die Mutter ist RhD negativ

13 ABO IgM Antikörper Rh IgG Antikörper Vorbeugung:

14 z.b. z.b.

15 RhD Bestimmung ist eine Antigen-Antikörper Reaktion D-Antigen anti-d Antikörper Y (Wir verwenden für die Bestimmung IgM Antikörper.)

16 Damit die Reaktion zu Stande kommen kann, sind bestimmte Bedingungen nötig: Die Untersuchung muß mit einer 50 prozentige Blutkörperchen-Suspension erfolgen. Wir machen eine Blutkörperchen-Suspension mit dem Serum der untersuchten Blutprobe. Die Reaktion erfolgt unter Zimmertemperatur in fünf Minuten.

17 Es sind bestimmte geeignete Umstände für ein richtiges Ergebnis notwendig, es gibt bestimmte Gegebenheiten, die zu falschen Ergebnissen führen können.

18 Die Gegebenheiten, die zu falschen positiven Ergebnissen führen: zu kleine Tropfen Kontamination Geldrollenbildung Eintrocknungserscheinungen an den Rändern zu späte Auswertung Ursachen, die zu falschen negativen Ergebnissen führen: verfallene oder falsch gelagerte Reagenzien wir fügen kein Reagens dazu nicht entsprechendes Antigen-Antikörper Verhältnis zu frühe Auswertung Wenn wir die Untersuchung den Vorschriften gemäß ausführen, dann können wir die meisten Fehlerquellen ausschließen!

19 des DIE RICHTIGE BESCHRIFTUNG des Röhrchens

20 Kurt Klein Kurt Klein die Blutprobe ein leeres Röhrchen

21 Günter Gro Kurt Klein Kurt Klein Günter Gro die Blutprobe die andere Blutprobe ein leeres Röhrchen ein anderes leeres Röhrchen

22 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte BESCHRIFTUNG DER PLATTE anti-d Kontrolle Schreiben wir an den oberen Rand anti-d und Kontrolle an die Seite die Namen und die Identifizierungscodes.

23 Kurt Klein Kurt Klein die beschriftete Blutprobe das dazu gehörige, beschriftete, leere Röhrchen Jetzt bereiten wir die 50% Blutkörperchen-Suspension vor, mit der wir arbeiten werden.

24 Kurt Klein Kurt Klein % Blutkörperchen- Suspension

25 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte Wir tropfen Serum auf die Platte. anti-d Kontrolle Tropfen wir zwei Tropfen separat anti-d Serum und zwei Tropfen separat Kontrollserum anti-d Kontrolle

26 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte Wir fügen Erythrozytensuspension dazu. anti-d Kontrolle Tropfen wir jeweils einen Tropfen aus der ersten Blutprobe dann aus der zweiten Blutprobe auf die anti-d und Kontrolltropfen neben den entschprechenden Namen

27 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte Wir vermischen die Tropfen anti-d Kontrolle Vermischen wir einzeln die vier Tropfen.

28 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte Wir vermischen die Tropfen anti-d Kontrolle Danach warten wir fünf Minuten, dass die Reaktion verlaufen kann

29 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte die Auswertung anti-d Kontrolle keine Agglutination:

30 anti-d Kontrolle Stärke der Agglutination:

31 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte die Auswertung anti-d Kontrolle keine Agglutination: starke (++++) Agglutination: RhD positiv

32 anti-d Kontrolle Stärke deragglutination:

33 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte die Auswertung anti-d Kontrolle schwächere ( ) Agglutination: RhD VARIANTE

34 RhD VARIANTE zwischen einem und drei Kreuzen ( ) die Agglutinate sind kleiner und ihr Hintergrund ist weniger klar man muß die Untersuchung wiederholen, wenn wir das gleiche Ergebnis bekommen, dann muß die Blutprobe in die Blutbank geschickt werden und der Patient kann nur RhD negatives Blut bekommen RhD-

35 Kurt Klein Günter Groß RhD-Bestimmung auf der Platte die Auswertung anti-d Kontrolle Wenn wir in dem Kontrolltropfen eine Agglutination bemerken, kann man die Reaktion nicht auswerten!

36 Die Auswertung: Nach dem Ablauf der Reaktionszeit bewegen wir langsam die Platte in circa 45 Grad nach vorne und nach hinten und lesen wir das Ergebnis ab.

37 anti-d Kontrolle Stärke deragglutination: + ++ RhD variante RhD positiv

38 Blutgruppenbestimmung auf der Bedside-Karte

39 Blutgruppenbestimmung auf der Bedside-Karte eingetrocknetes Antiserum Es ist sehr wichtig, an Hand der Bedienungsanleitung zu verfahren!!!

40 Korrekte Lagerung! Verfallsdatum beachten!

41 Blutgruppenbestimmung auf der Bedside-Karte Verwendbare Blutproben: native Blutprobe aus der Fingerkuppe oder der Vene mit Blutgerinnungshemmern vermischstes Blut 0 KEIN HEPARIN! Hgb<15g/l : das Ergebnis ist nicht zuverlässig

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43 physiologische Salzlösung Kurt Klein Kontrollfeld Die Untersuchung kann nur dann ausgewertet werden, wenn hier keine Agglutination zu sehen!

44 Die Auswertung geschiet durch das langsame hin und her Bewegen der Karte, eine halbe bis eine Minute lang. Für ein korrektes Ergebnis ist die Einhaltung dieser Zeit ist wichtig, denn wenn wir das Ergebnis später ablesen, kann der Tropfen eintrocknen!

45 Kurt Klein A

46 Kurt Klein B

47 Kurt Klein AB

48 Kurt Klein O

49 Kurt Klein A B

50 Kurt Klein B

51 Kurt Klein A

52 Kurt Klein A RhD positiv

53 Kurt Klein B RhD positiv

54 Kurt Klein A B RhD positiv

55 Kurt Klein O RhD positiv

56 Kurt Klein B RhD VARIANTE

57 Kurt Klein Wenn im Kontrolltropfen eine Agglutination erfolgt, kann der Test nicht ausgewertet werden!

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59 1. Transfusion 2. Transfusion Y im Blut sind für den Patienten fremde E Antigene E er kann anti-e Antikörper herausbilden E E e Transfusionskomplikation! e e

60 Diese Antikörper auszuweisen ist aber nicht so einfach.

61 IgM Antikörper IgG Antikörper die Antigen - Antikörper Reaktion erfolgt Vorbeugung: Y hier ist eine Agglutination sichtbar hier ist keine Agglutination sichtbar

62 Dies können wir mit der zufügung des sogenannten Coombs Serum erreichen.

63 IgG Antikörper Zufügung von COOMBS Serum Y COOMBS Serum (antihumanes Globulin) Vorbeugung: Y Y Y Robin Coombs britischer Immunologe Agglutination ist sichtbar

64 Y DIREKTER COOMBS TEST Y Y IN VIVO bedeckte Erythrozyten Zufügung von COOMBS Serum Wenn es eine Bedeckung durch Antikörper gibt, ist eine Agglutination su sehen. nicht bedeckte Erythozyten Zufügung von COOMBS Serum es gibt keine Agglutination

65 Kurt Klein INDIREKTER COOMBS TEST (Antikörpersuchtest) unbekannter Antikörper im Serum Y Y Ag Testerythrozyten Ag bekannte Antigene auf den Testerythrozyten Das zu untersuchende Serum des Patienten wird mit Testerythrozyten reagiert.

66 Y Kurt Klein INDIREKTER COOMBS TEST (Antikörpersuchtest) Y unbekannter Antikörper im Serum Y Antigen- Antikörper Reaktion Ag Zufügung von COOMBS Serum Ag Ag Testerythrozyten Ag bekannte Antigene auf den Testerythrozyten die Agglutination erfolgt Wenn es in diesem Serum einen Antikörper gibt, dann wird sich dieser an den entsprechenden Antigen koppeln.

67 Dieser Test wird in einer kleinen Testkarte durchgeführt, größere Poren kleinere Poren in den sich kleine Röhrchen mit Gel befinden.

68 INDIREKTER COOMBS TEST Kurt Klein Y Y Y C C anti-c Antikörper im Serum Reaktionszeit eine Ag-Ak Verbindung kommt zu stande Zentrifugieren Zufügung von COOMBS Serum Testerythrozyten starke Agglutination auf der Oberfläche des Gels

69 INDIREKT COOMBS TEST Kurt Klein Y Y C C anti-c Antikörper im Serum Reaktionszeit eine Ag-Ak Verbindung kommt zu stande Zentrifugieren Zufügung von COOMBS Serum Testerythrozyten schwächere Agglutination im Gel

70 INDIREKT COOMBS TEST Kurt Klein C C es gibt keine entsprechende Antikörper im Serum Reaktionszeit eine Ag-Ak Verbindung kommt zu stande Zentrifugieren Zufügung von COOMBS Serum C Testerythrozyten die nicht agglutinierten Zellen kommen auf den Grund des Röhrchens

71 große Agglutination kleinere Agglutinationen nicht agglutinierte Zellen (negative Reaktion)

72 Günter Gross Testerythrozyten I Testerythrozyten II Testerythrozyten III Diesen Suchtest wird mit einer Reihe von Testerythrozyten durchgeführt. Zuerst führen wir die Untersuchung mit drei Testzellen durch. I II III Die Antigeneigenschaft der Testerythrozyten ist bekannt.

73 ANTIKÖRPER- SUCHTEST I II III? D C E c e C w K k M N S s P 1 Le a Le b Fy a Fy b Jk a Jk b Di a Kp a Kp b Js a Js b Lu a Lu b I + + o o + + o + + o o o + o + o + o + II + o + + o o o o + o + + o + o o + o + o + III o o o + + o o + + o + + o o + o + o + Die Bestimmung: Wir untersuchen, welche Zelle eine positive Reaktion gibt. Dann suchen wir den entsprechenden Antigen in der Tabelle.

74 Günter Gross Testerythrozyten I Testerythrozyten II Testerythrozyten III zuerst führen wir die Untersuchung mit drei Testzellen durch I II III Die Antigeneigenschaft der Testerythrozyten ist bekannt.

75 ANTIKÖRPER- SUCHTEST I II III? C D C E c e C w K k M N S s P 1 Le a Le b Fy a Fy b Jk a Jk b Di a Kp a Kp b Js a Js b Lu a Lu b I + + o o + + o + + o o o + o + o + o + II + o + + o o o o + o + + o + o o + o + o + III o o o + + o o + + o + + o o + o + o + Wir suchen ein solches Antigen, bei dem eine positive Reaktion mit der erste Zelle erfolgt, und mit der zweiten und dritten eine negative.

76 ANTIKÖRPER- SUCHTEST I II III D C E c e C w K k M N S s P 1 Le a Le b Fy a Fy b Jk a Jk b Di a Kp a Kp b Js a Js b Lu a Lu b I + + o o + + o + + o o o + o + o + o + II + o + + o o o o + o + + o + o o + o + o + III o o o + + o o + + o + + o o + o + o + Auf Grund der Ergebnisse des Antikörpersuchtest finden wir in der Tabelle mehrere Lösungsmöglichkeiten. Dieser Antikörper kann anti-c oder anti-c w oder anti-di a sein.

77 Günter Gross Testerythrozyten 1 Testerythrozyten 2 Testerythrozyten 3 Testerythrozyten 4 Testerythrozyten 5 Testerythrozyten 6 Testerythrozyten 7 Testerythrozyten 8 Testerythrozyten 9 Testerythrozyten 10 Testerythrozyten K Für die genaue Bestimmung ist eine detaillierte Untersuchung mit 11 Zellen erforderlich. Dadurch können wir bestimmen, mit welchem Antikörper wir es zu tun haben.

78 Wiener K Wir suchen in der Tabelle die Spalte, in der es nur mit der Zelle 7 eine Reaktion gibt. D C E c e C w K k M N S s P 1 Le a Le b Fy a Fy b Jk a Jk b Di a Kp a Kp b Js a Js b Lu a Lu b o o + o + + o o + o + o + o o + o + o o + + o o o + o + + o o + o o o o + o + o + 3 o + o + + o o + o + o + + o + o + + o o o + o + o + 4 o o o + + o o o + + o o + o o + o + o + 5 o o o + + o o + + o + o + + o o o + o + o o o + + o o + + o o o o o o + o + o o o + + o + + o o + o o + + o o + o o + o + o + 8 o o o + + o o + o + o + + o o + o + o o o + o + o o o + + o + o + o o o + o + o o o + o o o + + o o o + o + o + 11 o o o + + o o o o + + o + o o o + o + + +

79 Wiener K Dieser Antikörper ist anti-c w D C E c e C w K k M N S s P 1 Le a Le b Fy a Fy b Jk a Jk b Di a Kp a Kp b Js a Js b Lu a Lu b o o + o + + o o + o + o + o o + o + o o + + o o o + o + + o o + o o o o + o + o + 3 o + o + + o o + o + o + + o + o + + o o o + o + o + 4 o o o + + o o o + + o o + o o + o + o + 5 o o o + + o o + + o + o + + o o o + o + o o o + + o o + + o o o o o o + o + o o o + + o + + o o + o o + + o o + o o + o + o + 8 o o o + + o o + o + o + + o o + o + o o o + o + o o o + + o + o + o o o + o + o o o + o o o + + o o o + o + o + 11 o o o + + o o o o + + o + o o o + o + + +

80 K D C E c e C w K k M N S s P 1 Le a Le b Fy a Fy b Jk a Jk b Di a Kp a Kp b Js a Js b Lu a Lu b o o + o + + o o + o + o + o o + o + o o + + o o o + o + + o o + o o o o + o + o + 3 o + o + + o o + o + o + + o + o + + o o o + o + o + 4 o o o + + o o o + + o o + o o + o + o + 5 o o o + + o o + + o + o + + o o o + o + o o o + + o o + + o o o o o o + o + o o o + + o + + o o + o o + + o o + o o + o + o + 8 o o o + + o o + o + o + + o o + o + o o o + o + o o o + + o + o + o o o + o + o o o + o o o + + o o o + o + o + 11 o o o + + o o o o + + o + o o o + o + + +

81 K Dieser Antikörper ist anti-c D C E c e C w K k M N S s P 1 Le a Le b Fy a Fy b Jk a Jk b Di a Kp a Kp b Js a Js b Lu a Lu b o o + o + + o o + o + o + o o + o + o o + + o o o + o + + o o + o o o o + o + o + 3 o + o + + o o + o + o + + o + o + + o o o + o + o + 4 o o o + + o o o + + o o + o o + o + o + 5 o o o + + o o + + o + o + + o o o + o + o o o + + o o + + o o o o o o + o + o o o + + o + + o o + o o + + o o + o o + o + o + 8 o o o + + o o + o + o + + o o + o + o o o + o + o o o + + o + o + o o o + o + o o o + o o o + + o o o + o + o + 11 o o o + + o o o o + + o + o o o + o + + +

82 Danke für Ihre Aufmerksamkeit!