CEA ELISA. Enzyme immunoassay for the in-vitro-diagnostic quantitative determination of carcino-embryonic antigen in human serum.

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1 Instructions for Use CEA ELISA Enzyme immunoassay for the in-vitro-diagnostic quantitative determination of carcino-embryonic antigen in human serum. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. VERWENDUNGSZWECK Der CEA ELISA dient zur Bestimmung von humanem carcinoembryonalem Antigen (CEA) in Serum. Der Test wird zur Überwachung der Behandlung von Patienten mit bösartigen Tumoren eingesetzt. 2. TESTPRINZIP Der CEA MTPL-EIA ist ein Solid-Phase-Enzymimmunoassay, der auf der Sandwich-Technik basiert. Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antikörper beschichtet. der gegen eine definierte Antikörper-Bindungsstelle des CEA-Moleküls gerichtet ist. Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und mit einem Enzymkonjugat inkubiert. Dieses enthält einen zweiten monoklonalen Antikörper. der gegen eine andere Region des CEA-Moleküls gerichtet ist. Es wird ein Immuno-Enzym-Sandwichkomplex gebildet. Die Extinktion bei 450 ± 10 nm wird mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen und mit diesen Werten wird eine Standardkurve erstellt. Die CEA- Konzentration in der Probe kann aus der Standardkurve abgelesen werden. 3. REAGENZIEN 3.1 Bestandteile des Kits 1. MTP Mikrotiterstrips: 96 Wells, mit monoklonalem CEA-Antiserum beschichtet. 2. CAL CEA-Standards: 6 Fläschchen, lyophilisiert Konzentrationen: 0, 3, 12, 30, 60, und 120 ng/ml CEA. 3. ENZCONJ Enzymkonjugat, 13 ml 4. TMB SUBS TMB Substratlösung, 11 ml 5. TMB STOP Stoplösung (1N HCl), 11 ml 3.2 Erforderliche Reagenzien und Laborgeräte, die nicht im Kit enthalten sind - Pipetten mit auswechselbaren Spitzen: 50 µl, 100µl und 1ml - Destilliertes Wasser - Vortex Mixer - Saugfähiges Papier - Mikrotiterplattenleser mit 450 ± 10nm Filter 4. VORBEREITUNG DER PROBEN In diesem Test sollte nur Serum verwendet werden. Blut durch Venenpunktion entnehmen, gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen. In Aliquots aufteilen. Werden die Bestimmungen innerhalb von 4 Tagen durchgeführt, können die Proben bei 2-8 C aufbewahrt werden. Bei längerer Aufbewahrung Proben sofort nach der Entnahme in Aliquots aufteilen und bei -20 C tiefgefrieren. Achtung: Röhrchen stets gut verschlossen aufbewahren. da sonst die Gefahr einer Kontamination oder Konzentrationsänderung durch Verdunstung oder Verdünnung besteht. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden! Lipämische und/oder stark hämolysierte Proben können zur Verfälschung der Werte führen. 5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT DES KITS Die ungeöffneten Reagenzien behalten bei lagerung um 2-8 C ihre Reaktivität bis zum Verfallsdatum. Nach Dem verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden. Nach dem Öffnen sollten alle Reagenzien bei 2-8 C gelagert werden. Die Mikrotiterwells sollten bei 2-8 C gelagert werden. Der einmal geöffnete Folienbeutel sollte stets sehr Sorgfältig wieder verschlossen werden. Unter den beschriebenen Lagerbedingungen behalten geöffnete Kits ihre Reaktivität bis zum Verfallsdatum. Version 3.0 / / 3

3 6. VORBEREITUNG DER REAGENZIEN 1. Alle Reagenzien auf Raumtemperatur bringen (18-25 C). 2. Standards 1-6 mit 1 ml destilliertem Wasser lösen. Zur vollständigen Lösung die Standards mind. 20 Min. stehen lassen, dann nochmals schütteln, um den Inhalt der Fläschchen gründlich zu vermischen. Die gelösten Standards sind -mit Gummistopfen fest verschlossen - 30 Tage bei 2-8 C haltbar. Für eine längere Haltbarkeit müssen die Standards aliquotiert und bei -20 C gelagert werden. 3. Hook-Effekt: Um einen Hook-Effekt zu vermeiden, sollten Proben mit einer erwarteten Konzentration über 9000 ng/ml 1:100 mit einem CEA- freien Humanserum verdünnt werden (z.b. 10 µl + 1 ml). 7. TESTDURCHFÜHRUNG 1. Alle Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur (mind. 20 C) bringen und gut durchmischen. 2. Die benötigte Anzahl von beschichteten Wells bzw. Strips in der Halterung befestigen µl Standards, Patientenproben und Kontrollen in die entsprechenden Wells geben µl Enzymkonjugat in alle Wells geben, Platte 30 Sek. schütteln zur gründlichen Vermischung des Konjugats mit den Proben Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, ohne Agitation. 6. Inkubationslösung abschütten. Wells 5mal mit Aqua dest. waschen µl TMB Lösung in jedes Well geben. 5 Sekunden schütteln Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, ohne Agitation. 9. Farbentwicklung durch Zugabe von 100 µl Stopplösung stoppen. 10. Extinktion innerhalb von 15 Min. mit einem Mikrotiterplattenleser bei 450 ± 10 nm bestimmen. 8. ERGEBNISERMITTLUNG 1. Die durchschnittlichen Werte der optischen Dichte (OD) für jedes Set von Standards, Kontrollen und Patientenproben bestimmen. 2. Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragung der mittleren optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentrationen, wobei der OD-Wert auf der vertikalen (Y) Achse und die Konzentration auf der horizontalen (X) Achse. 3. Unter Verwendung der mittleren OD wird für jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt. 4. Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden. Proben, die eine höhere Konzentration als die des höchsten Standards enthalten, müssen verdünnt werden. Dieser Verdünnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden. 8.1 Beispiel für eine Standardkurve Nachfolgend wird ein typisches Beispiel für eine Standardkurve mit dem CEA ELISA gezeigt. Die Werte sollten nicht zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden. CEA (ng/ml) Optische Dichte (450nm) Version 3.0 / / 3

4 9. ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen, dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt. Eine Zusammenfassung mehrerer Studien umfasste insgesamt Proben von über Patienten. Von getesteten gesunden Nichtrauchern hatten 98.7% CEA Werte unter 5.0 ng/ml. 10. SENSITIVITÄT Die untere Nachweisgrenze dieses CEA ELISA wurde mit 1,0 ng/ml bestimmt. 11. LITERATUR 1. Engall, E., Methods in Enzymology, Volume 70, Van Vunakis, H. and Langone, J. J. (eds.), Academic Press, New York, (1980). 2. Uotila, M., Ruoslahti, E. and Engvall, E., J. lmmunol. Methods, 42, (1981). 3. Gold P, Freedman S O. Demonstration of tumor specific antigen in human colonic carcinoma by immunologic tolerance and absorption techniques. J Exp Med 1965;127: Thompson D P M, Krupey J, Freedman S O, et al. The radioimmunoassay of circulating carcinoembryonic antigen of the human digestive system. Proc Natl Acad Sci USA 1969;64: Schwartz M K. Tumor markers in diagnosis and screening. In: Ting S W, Chen J S, Schwartz M K, eds. Human tumor markers, Amsterdam: Elsevier Science, 1987; Zamcheck N. and Martin E.W. Sequential Carcinoembryonic Antigen Levels in Pancreatic Cancer: Some Clinical Correlations. Cancer 1981 ;47: Mughal A.W., Hortobagyi G. N., Fritsche H.A., Buzdar A.U. Yap H-Y., and Blumenschein G.R.Serial Plasma Carcinoembryonic Antigen Measurements During Treatment of Metastatic Breast Cancer. JAMA 1983; 259: Version 3.0 / / 3

5 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International B.V. Zutphenseweg 55, 7418 AH Deventer, The Netherlands IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com LIABILITY: Complaints will only be accepted in written and if all details of the test performance and results are included (complaint form available from IBL or supplier). Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer. Symbols Version 3.5 /