Plasmatische Gerinnung/endogener Aktivierungsweg, partielle Thromboplastinzeit, Kugelkoagulometer

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1 Gerinnung: Ermittlung der TEAS Themen Plasmatische Gerinnung/endogener Aktivierungsweg, partielle Thromboplastinzeit, Kugelkoagulometer Prinzip Die aktivierte partielle Thromboplastinzeit (a)ptt ist ein Maß für den Gehalt an Gerinnungsfaktoren des endogenen Systems. Bei vielen Störungen der Blutgerinnung ist die aptt verlängert. In dem aptt-test versetzt man die Patientenprobe mit einer definierten Menge von Phospholipiden und einem Oberflächenaktivator und startet die Gerinnungskaskade durch Zugabe von Ca 2+ -Ionen. Die Gerinnungszeit der Probe wird mit Hilfe eines Kugelkoagulometers erfasst. Material Studenten-Basis-Set 1 Mikroliterpipette µl Mikroliterpipette µl Reagenzglasgestell, PP, 12 Plätze Messpipette 10 ml, Teilung 0,1 ml Pipettierball Digitale Stoppuhr Laborschreiber, wasserfest Koagulometer Startset Pipettenspitzen μl im Halter, 96 1 Stk Pipettenspitzen μl im Halter, Stk Einweghandschuhe, M, Latex, 100 Stk Laborausstattungs-Set 1 Koagulometer Chemikalien 1 CaCl 2 -Lösung Zusätzlich werden folgende Reagenzien benötigt aptt-reagenz Kontrollplasma normal Kontrollplasma abnormal Hinweis: Die für diesen Versuch verwendeten Reagenzien und Kontrollproben sind im Anhang aufgelistet. Achtung! Beachten Sie stets die Vorbemerkungen, wenn Sie diesen Versuch durchführen. Abb. 1: P P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 1

2 TEAS Gerinnung: Ermittlung der Aufgaben 1. Ermitteln Sie die Gerinnungszeit einer Patientenprobe und einer Kontrolle. 2. Berechnen Sie die zughörige Abweichung des Kontrollprobeneinzelmesswertes. Durchführung Reagenzvorbereitung - Reagenz ist gebrauchsfertig - Reagenz auf Raumtemperatur bringen, CaCl 2 -Lösung vor der Messung auf 37 C temperieren. Untersuchungsmaterial - Natriumcitratplasma Mischungsverhältnis: 9 Teile Blut + 1 Teil Citrat. Siehe Kapitel Präanalytik - BasiCon 1 Kontrollplasma normal, ist lyophylisiert, entsprechend des Beipackzettels der Kontrolle in destilliertem Wasser lösen (siehe Kapitel Vorbemerkung). Ermittlung der Gerinnungszeit einer Patientenprobe und einer Kontrollprobe - Greiner Koagulometer einschalten. - Bei der Abfrage der Ergebnis-Berechnung nein anwählen Messen: - Eine Küvette mit Metallkugel in die Messstelle stellen µl der Probe (Patient oder Kontrolle) vorlegen und das Programm starten: Taste drücken - Nach 1 min. 100 µl aptt-reagenz zupipettieren und wieder: Taste drücken - Nach 2 min. noch einmal das Programm starten: Taste drücken µl CaCl 2 -Lösung zufügen und gleichzeitig Messung starten: Taste drücken - Gerinnungszeit ablesen Abb. 2 - Inkubation Grundlagen Die partielle Thromboplastinzeit ist ein Maß für den Gehalt an Gerinnungsfaktoren des endogenen Systems. Zur Untersuchung wird Plasma benötigt, das mit Citrat versetzt ist (Citratplasma). Siehe Kapitel Präanalytik. Natriumcitrat komplexiert Ca 2+ -Ionen aus der Probe, so kann die plasmatische Gerinnung nicht stattfinden. In diesem Gerinnungstest versetzt man die Patientenprobe mit einer definierten Menge von Phospholipiden und einem Oberflächenaktivator (z. B. Kaolin). Ist die Aktivierungszeit abgelaufen, wird die Gerinnungskaskade durch Zugabe von Ca 2+ -Ionen ausgelöst. Eine verlängerte aptt tritt bei einem Faktorenmangel des endogenen Systems (XII, XI, IX, X, VIII, V, II und Fibrinogen sowie von Präkallikrein und HMW-Kininogen) auf. Sie kann angeboren sein, z. B. Faktor VIII- oder FV-Mangel, oder erworben, z. B. Verbrauchskoagulopathie, Synthesestörung von Gerinnungsfaktoren (Leberfunktionsstörung). Außerdem verlängert eine Heparintherapie ebenfalls die aptt-werte. 2 PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P

3 Gerinnung: Ermittlung der TEAS Bestimmungsmethode Im Einkanal Kugelcoagulometer MC1 dreht sich eine schräggelagerte Messküvette langsam um ihre Längsachse. Die Stahlkugel in der Küvette bleibt auf Grund der Schwerkraft am niedrigsten Punkt der Küvette liegen. Gerinnt die Probe, zieht der Gerinnnungsfaden die Kugel aus ihrer Position. Ein Magnetsensor detektiert die Lageänderung der Kugel und stoppt einen zuvor gestarteten elektronischen Zeitmesser. Auswertung Aufgabe 1: Die Koagulationszeit wird abgelesen und dann mit dem Referenzwert verglichen. Die Ergebnisse, die mit dieser Methode erzielt werden können, sind stark abhängig von dem Gerät, der Methode und den Reagenzien. So kann Referenzbereich in Abhängigkeit von der Reagenz stark variieren (28 40 sec). Die untere Normbereichsgrenze ist oft nicht exakt definiert. Auffällige Verkürzungen auf Zeiten von weniger als 20 sec können ein Hinweis auf eine in vivo aktivierte Gerinnung sein, aber auch Abnahmeartefakte kommen vor. Die therapeutisch verlängerte aptt sollte unter Heparin etwa bei sec liegen (2 2,5fache Verlängerung der Norm). Referenzwert: Der Normbereich liegt bei sec. Die Ergebnisse sind stark reagenz-, und methodenabhängig. Weitere Informationen zu den Referenzwerten: siehe Kapitel Vorbemerkung. Aufgabe 2: Berechnen Sie die Abweichung des Kontrollprobeneinzelmesswertes Mit der Abweichung des Kontrollprobeneinzelmesswertes überprüft man, ob das Experiment mit Fehler behaftet ist. Der im Experiment ermittelte Wert der Kontrollprobe ist der sogenannte Ist-Wert. Von der Kontrolle kennen wir aber auch den eigentlichen Wert, den Soll-Wert. Er ist auf der Packungsbeilage des Kontrollserums (BasiCon 1 oder 2) angegeben. Aus dem ermittelten Ist-Wert und dem bekannten Soll-Wert ergibt sich die Abweichung des Kontrollprobeneinzelmesswertes nach folgender Formel: KoPEM[%] = Soll Ist Soll 100 Beispielrechnung: Kontrolle Ist: 38 sec Kontrolle Soll: 35.1 sec KoPEM[%] = Soll Ist Soll 100 = = 8.2% 35.1 Im Anschluss wird die Abweichung des Kontrollergebnisses mit den erlaubten Grenzen verglichen. Nach Tabelle 1a RiliBÄK für aptt darf das Kontrollergebnis bis zu +/-10,5 % abweichen. In unserem Beispiel erfüllt die Messung der Kontrolle diese Vorgabe. Folglich kann der Patient beurteilt werden. Achtung: Bitte die gesetzlichen Vorgaben des jeweiligen Landes beachten! Siehe Kapitel Vorbemerkung. P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 3

4 TEAS Gerinnung: Ermittlung der Fragen - Welcher Teil der plasmatischen Gerinnung wird mit dem aptt-test überprüft? Der endogene Aktivierungsweg. - Warum benötigt man keinen Standard für die aptt-messung? Dies ist eine Direktmessung. Das Ergebnis wird in Sekunden gemessen und auch berichtet. - Warum führt man die Gerinnungsuntersuchungen nicht mit Serum durch? Im Serum sind die Gerinnungsfaktoren schon verbraucht, da Serum durch Zentrifugation aus einer geronnenen Blutprobe gewonnen wird. 4 PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P

5 Gerinnung: Ermittlung der TEAS Protokoll Aufgabe 1 Bitte tragen Sie Ihre Ergebnisse in die folgende Tabelle ein und vergleichen Sie sie mit den Normbereichen. Gerinnungszeit Kontrolle Patient 1 Aufgabe 2 Notieren Sie die Abweichung des KoPEM und diskutieren Sie das Ergebnis. Fragen - Welcher Teil der plasmatischen Gerinnung wird mit dem aptt-test überprüft? - Warum benötigt man keinen Standard für die aptt-messung? - Warum führt man die Gerinnungsuntersuchungen nicht mit Serum durch? P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 5

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