Rapid by Nature, Accurate by Design

Transkript

1 LightCycler 480 System Rapid by Nature, Accurate by Design 1

2 LightCycler Systeme Technologische (R)evolutionen Genauigkeit Schnelligkeit Sensitivität Flexibilität Jetzt auch für den Hochdurchsatz 2

3 LightCycler 480 System Die Komponenten Instrumente Block Kits Software Module Reagenzien Multiwell Platten Assay Design 3

4 LightCycler 480 Instrument Der Aufbau 4

5 LightCycler 480 Instrument Die Optik CCD CCD MWP Verbesserte Belichtung und Signalabbildung durch langen Strahlenweg. 5

6 LightCycler 480 Instrument Die Optik CCD Patentierte Optik MWP Paralleler Strahlengang sichert die gleichmäßige und präzise Belichtung und Detektion der Signal unabhängig von der Probenposition Speziell konstruierter beheizbarer Deckel zur Vermeidung von Überstrahlungseffekten zwischen den Wells. Kein Referenzfarbstoff notwendig 6

7 LightCycler 480 Instrument Die Optik Filter Wheels CCD Camera Geringe Abmessungen durch gespiegelte Lichtstrahlen Optimierte Lichtwege durch patentierte optische Lösungen Multiwell plate 7

8 LightCycler 480 Instrument Thermoelement Peltier block Standard Peltier-Technologie 8

9 LightCycler 480 Instrument Thermoelement Basierend auf der Peltier Technologie Optimiert durch Therma-Base Element Optimierte Luftführung Garantiert Exzellente Temperaturhomogenität Optimierten Temperaturaustausch Für Schnelle und genaue Real-Time PCR 96 wells in < 1 h 384 wells in < 40 min 9

10 LightCycler 480 Instrument Therma-Base multiwell plate mount circuit board (Peltier elements) Therma-Base layer cooling element Flüssigkeitsgefülltes dünnes Vakuumgefäß mit spezieller Struktur Transferiert Wärme schnell und effizient durch Verdampfen und Kondensieren sowie durch die kontinuierliche Bewegung der Flüssigkeit. schnelle UND genaue Temperaturänderungen über den gesamten Block 10

11 LightCycler 480 Instrument Thermoelement: Temperaturverteilung Peltier block without Therma-Base Element Peltier block with Therma-Base Element Standard Technologie LightCycler 480 Technologie 11

12 LightCycler 480 Instrument Vergleich mit einem anderen 384er System Mitbewerber-Instrument LightCycler 480 Instrument 12

13 LightCycler 480 Instrument Temperaturverteilung A1 96*Tm-low (52 C) A2 96*Tm-high (78 C) Gesamt Proben B1 96*Tm-med (66 C) B2 96* Negativkontrolle 13

14 LightCycler 480 Instrument Temperaturverteilung Tm Tm Tm G K C 64.1 H L D 76.4 C G rows K rows columns Positionen: A1-O23 O columns Positionen: B1-P23 P rows columns Positionen: A2-O24 O values / C average 51,80 min 51,63 max 51,96 delta 0,33 SD 0,0722 values / C average 65,31 min 65,14 max 65,52 delta 0,38 SD 0,0731 values / C average 77,69 min 77,46 max 77,87 delta 0,41 SD 0,

15 LightCycler 480 Assay Formate Assay Formate, Farbstoffe und Applikationen Assay format Excitation (nm) Detection (nm) Dyes Application SYBR Green l SYBR Green I Qualitative detection Characterization Quantification HybProbe Probes Hydrolysis probes LightCycler RED 610 LightCycler RED 640 Cy5 LightCycler CYAN 500 FAM VIC/HEX LightCycler RED 610 LightCycler RED 640 Cy5 Quantification SNP Analysis Quantification SimpleProbe Probes Fluorescein SNP Analysis 15

16 LightCycler 480 Instrument Die Optik DF20 533DF20 568DF20 610DF20 640DF20 670DF Fluorescence Intensity w.e CYAN 500 Fluorescein HEX / VIC Red 610 Red 640 Cy Wavelength nm 16

17 LightCycler 480 System 96 < > 384 Austausch In wenigen Sekunden austauschbar Keine Kalibrierung notwendig Das Instrument detektiert und identifiziert den Block automatisch 17

18 LightCycler 480 System Disposables Optimale Passgenauigkeit für guten Temperaturtransfer für Schnelles Cycling (384-wells in < 40 min, 96-wells in < 1h) Homogener Temperaturtransfer in jeder Probenposition Folie zur Vemeidung von Verdunstung und Kontamination 96-well Platte für µl 384-well Platte für 5 20 µl Folie 18

19 LightCycler 480 Reagenzien Spezifisch, sensitiv, bequem LightCycler 480 SYBR Green I Master, 2x LightCycler 480 Probes Master, 2x LightCycler 480 Genotyping Master, 5x Hot-start PCR Enzyme Bequeme Master-Mixe Optimiert für die jeweiligen Assayformate LightCycler 480 Probes Master für qpcr mit Hydrolyse Sonden Genotyping Master für Schmelzkurvenanalysen 19

20 LightCycler 480 System Software Innovationen von Roche Real-time, online PCR monitoring Second derivative Cp calculation Schmelzkurvenanalysen für zuverlässiges Genotyping Berechnung der PCR Effizienz Nicht-lineare Standardkurven 20

21 LightCycler 480 Software Modulares Konzept Basis-Software Steuerung des Instruments User Management Datenbank Templates and Macros Individuelle Reports Analysemodule in der Basis- Software Quantifizierung mit nicht-linearen Standardkurven Genotypisierung mittels Schmelzkurve Color Compensation Optionales Modul LIMS/Barcode Module Weitere Module Automatisierte relative Quantifizierung Automatisierte Genotypisierung Automatisierte qualitative Detektion Statistische Analyse Meta Analyse 21

22 LightCycler 480 Software Daten Management Daten werden in einer gesicherten Datenbank gespeichert Keine Veränderung der Rohdaten möglich Analysen oder veränderte Daten werden in neuer Datei gespeichert Änderungen der Daten können nachverfolgt werden Kein versehentliches Löschen von Daten Export und Import-Funktionalitäten 22

23 LightCycler 480 System Integration in eine Automatisierungsstraße 23

24 Was ist die Universal ProbeLibrary? Die Universal ProbeLibrary sind 165 spezifische und prävalidierte Hydrolysis Sonden, mit denen nahezu jedes Transkript einer großen Zahl an Organismen quantifiziert werden kann sind Sets von 90 je Sonden für: Mensch, Maus, Ratte, Primaten, Drosophila, C. elegans, oder Arabidopsis. besteht aus Primern und Sonden für Ihren spezifischen, Intron-spanning Assay, die im Assay Design Center unter entworfen werden 24

25 Wie funktioniert die Universal ProbeLibrary? Die einzigartige Vielseitigkeit der Universal ProbeLibrary Sonden wurde durch Kürzung der Sonden auf 8-9 Nucleotide erreicht. Die Sonden sind genau so spezifisch wie die in der real-time PCR verwendeten Sonden und haben auch genau so hohe Schmelztemperaturen. Das wird durch die Verwendung von sogenannten Locked Nucleic Acids (LNA) erreicht. Die Sonden wurden sorgfältig selektiert. Durchschnittlich bindet jede Sonde an bis zu 7000 Transkripte. Die Spezifität wird über die Kombination von Primern und Sonden erzielt. 25

26 Vom Assay Design zum fertigen Ergebnis in nur 24 Stunden Tag 1: Wählen Sie das Zielgen aus Die ProbeFinder Software ( gibt Ihnen die Primer und Sonden an Bestellen Sie die Primer bei einem Oligohaus (z.b. TIB MolBiol, Berlin, oder Metabion, Planegg) Tag 2: Nehmen Sie die Sonde aus Ihrem UniversalProbeLibrary Set Führen sie die Real-time PCR durch Werten Sie Ihren Versuch aus 26

27 Universal ProbeLibrary Assay Design Center Entwerfen Sie Ihren Assay schnell und einfach mit dem Assay Design Center ( Das Herzstück des Assay Design Center ist die ProbeFinder Software. Der Zugang ist frei und die Nutzung kostenlos. Die Software entwirft Ihren Assay in Sekundenschnelle. Folgende Leistungsdaten zeigt die Software: 96%ige Erfolgsrate Intron-spanning options In silico PCR feature Splice-Varianten Darstellung Nutzer-definierte Optionen 27

28 Assay Design Schritt 1: Organsimus auswählen 28

29 Assay Design Schritt 2: Sequenz eingeben Option 1: Seuqenz ID eingeben Option 2: Sequenz einkopieren 29

30 Assay Design Schritt 3: Assayvorschläge 30

31 LightCycler 480 System Die Vorteile Schnell Schnelle Temperaturänderungen. PCR Reaktion in 40 min im 384 well bzw. 1 h im 96 well Format Genau Patentierte Technologie garantiert hochuniforme Temperaturverteilung über alle wells Innovative, patentierte Optik sichert präzise Signaldetektion unabhängig von der Probenposition. 31

32 LightCycler 480 System Die Vorteile Flexibel 5 Anregungs- und 6 Detektions-Wellenlängen für eine breite Palette verwendbarer Assay-Formate und Farbstoffe In wenigen Minuten austauschbare Thermoblöcke für 96- oder 384well MWPs Kompatibel mit Laborautomation Anwenderfreundlich Intuitive Standard-Software mit Quantifizierungs- und Genotypisierungs- Optionen Spezielle Module für maximale Effizienz und Genauigkeit bei der Analyse 32

33 LightCycler 480 System Rapid by Nature, Accurate by Design