Pflanze direkt 2x PCR-Mastermix

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1 Datenblatt Artikel-Nr. BS Artikel-Nr. BS Reaktionen in 20 μl 1250 Reaktionen in 20 μl (Nur für Forschung und in vitro-anwendungen) Chargen-Nr.: Mindestens haltbar bis: Aussehen: Farbe: 1

2 Beschreibung Pflanze direkt PCR Mastermix ermöglicht eine PCR Reaktion direkt aus pflanzlichen Gewebeproben, ohne die DNA zuvor aufzureinigen schnell, bequem, ready to use. Anwendungen Allel-spezifische PCR PCR zur Genotypisierung PCR zur Selektion genetisch veränderter Organismen (GMO) Weiter PCR spezifische Anwendungen Der Mastermix beinhaltet alle Komponenten für die direkte PCR (außer Template-DNA und Primer) in einer 2x konzentrierten ready to use Lösung. Ein robustes Enzym zusammen mit einem speziell optimierten einzigartigen Puffersystem hält verschiedensten PCR Inhibitoren (welche sich in pflanzlichen Gewebeproben befinden können) stand. Zusammensetzung: Pflanze direkt PCR-Mastermix ( roter Deckel) 2x konz. Mastermix; beinhaltet Polymerase, dntps, MgCl 2, Reaktionspuffer und Stabilisatoren DNA Extraktionspuffer ( gelber Deckel) 10x konz. PCR Wasser ( weißer Deckel) 2

3 Probenvorbereitung (Lyse) Herstellen eines 1x DNA Extraktionspuffers durch Verdünnung des 10x konz. Puffers mit PCR-Wasser. Überführen von 50 μl des 1x DNA Extraktionspuffers in ein ml Eppendorfgefäß. Vorbereiten eines kleinen Pflanzenstücks (ca. 2-3 mm im Durchmesser) Samen (-körner) bis auf 1mm im Mörser oder Kugelmühle aufbrechen. Überführen der Probe in das mit 1x Extraktionspuffer vorbereitete Tube. Kurz durch leichtes Klopfen oder Vortexen vermischen. Inkubation für 3 min bei RT (Gewebelyse und DNA Freisetzung) Kurz Abzentrifugieren 1-3 μl des Lysat-Überstandes in den PCR Ansatz pipettieren. Vorteil: Der Lysat-Überstand ist für mehrere Wochen bei -20 C haltbar. 3

4 Protokoll Empfohlenes PCR-Protokoll Die Herstellung eines Mastermix mit allen Komponenten: Pflanze direkt PCR Mastermix, Primer und Wasser wird empfohlen um Pipettierfehler zu vermeiden. Anschließend wird dieser Mastermix auf die einzelnen PCR Tubes oder Wells einer Platte verteilt. Komponente Deckel farbe Konzentration Stammlösung Konzentration im Ansatz 20 μl Ansatz 50 μl Ansatz Pflanze direkt PCR Mastermix rot 2x 1x 10 μl 25 μl Forward Primer 10 μm 400 nm 0.8 μl 2 μl Reverse Primer 10 μm 400 nm 0.8 μl 2 μl Pflanzen-Lysat PCR Wasser weiß 1-2 μl 1-3 μl auf 20 μl auffüllen auf 50 μl auffüllen 4

5 Empfohlenes PCR-Programm Vor der PCR können die Reaktionsansätze durch vortexen gemischt und kurz abzentrifugiert werden um Luftblasen zu beseitigen. Temperatur Zeit Anzahl der Zyklen Initiale Denaturierung 95 C 5 min 1x Denaturierung 95 C 20 sek 35-40x Annealing C 30 sek Elongation 72 C 30 sek - 4 min Finale Elongation 72 C 2 min 1x 5

6 Technische Daten Versand: Lagerung: bei Raumtemperatur bei -20 C (Bitte vermeiden Sie häufiges Auftauen und Einfrieren) 12 Monate haltbar Sicherheitshinweis: Dieses Produkt sollte nur von Personen verwendet werden, die Routine in Laboranwendungen haben. Es sollte laborübliche Schutzkleidung wie Kittel, Handschuhe und Schutzbrillen getragen werden. Bei Kontakt mit Haut und Augen sollten die betroffenen Stellen umgehend mit Wasser gewaschen bzw. ausgespült werden. Anwendungshinweis: In bestimmten Ländern sind einige Anwendungen, für die dieses Produkt eingesetzt werden kann, patentrechtlich geschützt. Da durch den Kauf keine Lizenzen erworben werden, kann abhängig vom Anwendungsland und der Anwendung der Erwerb entsprechender Lizenzrechte erforderlich sein. Notizen 6

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