Neue Erkenntnisse zum Wirkmechanismus von Beinwell - experimentelle Untersuchungen

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1 Neue Erkenntnisse zum Wirkmechanismus von Beinwell - experimentelle Untersuchungen skintegral Christoph Schempp, Ute Wölfle Kompetenzzentrum skintegral Universitäts-Hautklinik Freiburg im Breisgau KFN PresseClub München 12. Juni 2013 München 1

2 Stoffwechsel oder die Proliferation in HaCaT-Zellen LDH-Release (Zytotoxizität) In dem untersuchten Konzentrationsbereich (3 200 µg/ml) zeigen weder Allantoin noch Diclofenac eine toxische Wirkung in HaCaT-Zellen 2

3 Stoffwechsel oder die Proliferation in HaCaT-Zellen ATP-Assay (metabolische Aktivität) In dem untersuchten Konzentrationsbereich (3 200 µg/ml) zeigen weder Allantoin noch Diclofenac eine Wirkung auf den Stoffwechsel in HaCaT-Zellen 3

4 Stoffwechsel oder die Proliferation in HaCaT-Zellen BrdU-Assay (Zellproliferation) Absorption [A 450nm - A 690 nm ] Diclofenac Solvent 3,12 µg/ml 6,25 µg/ml 12,5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 200 µg/ml Staurosporin 10 µm In dem untersuchten Konzentrationsbereich (3 200 µg/ml) zeigt Allantoin keine negative Wirkung auf die Proliferation in HaCaT-Zellen. Diclofenac zeigt ab einer Konzentration von 100 µg/ml einen proliferationshemmenden Effekt. 4

5 Stoffwechsel oder die Proliferation in Fibroblasten LDH-Release (Zytotoxizität) In dem untersuchten Konzentrationsbereich (3 200 µg/ml) zeigen weder Allantoin noch Diclofenac eine toxische Wirkung auf primäre Fibroblasten 5

6 Stoffwechsel oder die Proliferation in Fibroblasten Vialight (metabolische Aktivität) In dem untersuchten Konzentrationsbereich (3 200 µg/ml) zeigen weder Allantoin noch Diclofenac eine negative Wirkung auf den Stoffwechsel in primären Fibroblasten 6

7 Stoffwechsel oder die Proliferation in Fibroblasten BrdU-Assay (Zellproliferation) In dem untersuchten Konzentrationsbereich (3 200 µg/ml) zeigt Allantoin keine negative Wirkung auf die Proliferation in prim. Fibroblasten. Diclofenac zeigt ab einer Konzentration von 200 µg/ml einen proliferationshemmenden Effekt. 7

8 Stimulation von HaCaT-Zellen und Fibroblasten mit TNF-α, IL-1β und dem Sonnensimulator Da der Effekt der TNF-α oder IL-1β Stimulation in HaCaT-Zellen nicht so ausgeprägt ist, haben wir in diesen Zellen die Entzündungshemmung nach Bestrahlung und nach TNF-α Stimulation untersucht. In primären Fibroblasten zeigen sowohl die TNF-α sowie die IL-1β Stimulation eine deutliche Induktion der IL-6 Expression, so dass wir hier das Entzündungsmodell nur mit TNF-α durchgeführt haben. 8

9 Entzündungsmodell mit HaCaT-Zellen und TNF-α Allantoin hu IL-6 [pg/ml] unbehandelt, unstimuliert Solvent 6,25 µg/ml 12,5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 200 µg/ml 400 µg/ml Luteolin 16 µg/ml Allantoin und Diclofenac zeigen eine entzündungshemmende Wirkung 9

10 Wirkung von Allantoin an Haut- und Bindegewebszellen TNFa COX-2 Allantoin Keratinozyten PGE2 p38 MAPK lösliche Faktoren IL-6 Fibroblasten PGE2 p38 MAPK lösliche Faktoren IL-6 Kollagenase Hyaluronidase Gewebeschaden Entzündung und Kollagen / HA- Degradation 10

11 Zusammenfassung der Wirkung von Allantoin auf Haut- und Bindegewebszellen Allantoin wirkt nicht zytotoxisch auf Haut- und Bindegewebszellen Allantoin hemmt nicht den Stoffwechsel von Haut- und Bindegewebszellen Allantoin hemmt nicht die Proliferation von Haut- und Bindegewebszellen Allantoin wirkt entzündungshemmend im TNFa-Modell mit Hautzellen 11