Unabhängige Studien. Säulenauswahl IEX

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1 YMC-BioPro SP-F Page 1/6

2 Überblick In einer unabhängigen Studie der Universitäten Genf und Lausanne wurden IEX-Säulen unterschiedlicher namhafter Hersteller miteinander verglichen. Im Mittelpunkt standen folgende chromatographischen Parameter Selektivität Auflösung Teilgenommen hat auch YMC mit YMC-BioPro SP-F, welches ein starker nicht-poröser Kationenaustauscher ist. Zusammenfassung Das Analysepotential der CEX-Säulen für therapeutische monoklonale Antikörper (mabs) wurde mit ph- und Salzgradienten chromatographisch untersucht. YMC-BioPro SP-F erzielte dabei die höchste Selektivität und Auflösung (siehe Tabelle 1)! Tabelle 1: Kationenaustauschersäulen Säule Hersteller CEX Partikelgröße [µm] Säulenlänge [mm] YMC-BioPro SP-F YMC Stark (Sulfonsäure) MAbPac SCX-10 Thermo Scientific Stark (Sulfonsäure) Protein-Pak Hi Res SP Waters Stark (Sulfonsäure) Antibodix WCX-NP3 Sepax Schwach (Carboxylat) Bio Mab NP Agilent Schwach (Carboxylat) Als Proben wurden therapeutische mabs mit unterschiedlichen chromatographischen Eigenschaften ausgewählt (siehe Abb. 1): 1. Natalizumab (Peak 1) -> geringe Wechselwirkungen -> kurze Retentionszeit YMC-BioPro-SP-F überzeugt im Vergleich durch den schmalsten Peak. 2. Cetuximab als komplexer heterogener mab (Peak 2) -> sekundäre Wechselwirkungen erschweren die Auftrennung. Mit YMC-BioPro-SP-F wird auch für anspruchsvolle Proben eine sehr hohe Auftrennung ermöglicht. 3. Adalimumab (Peak 3) und Denosumab (Peak 4) besitzen ein einzigartiges Retentionsverhalten. YMC-BioPro-SP-F erzielt auch hier mit einem Salzgradienten die beste Selektivität. Page 2/6

3 Studienergebnisse Trennleistung Abb. 1 zeigt die Chromatogramme der Säulen YMC-BioPro SP-F, Antibodix WCX-NP3, MabPac SCX- 10 RS und Protein-Pak Hi Res SP im ph- und Salzgradienten Modus für Natalizumab, Cetuximab Adalizumab und Denosumab. In Abb. 1 sind die Ergebnisse mit einem ph-gradienten abgebildet. Abb. 2 zeigt Chromatogramme mit einem Salzgradienten. YMC-BioPro SP-F Schmalster Peak! Beste Auftrennung! Protein-Pak Hi Res SP Antibodix WCX-NP3 MabPac SCX-10 RS Abb. 1: Repräsentative Chromatogramme von Natalizumab (1), Cetuximab (2), Adalimumab (3) und Denosumab (4), welche mit verschiedenen Säulen mit einem ph-gradienten erhalten wurden. Page 3/6

4 YMC-BioPro SP-F Beste Selektivität! Protein-Pak Hi Res SP Antibodix WCX-NP3 MabPac SCX-10 RS Abb. 2: Repräsentative Chromatogramme von Natalizumab (1), Cetuximab (2), Adalimumab (3) und Denosumab (4), welche mit verschiedenen Säulen mit einem Salzgradienten erhalten wurden. Page 4/6

5 Hochauflösende CEX durch Effiziente Säulen sind für die Analyse von therapeutischen mabs notwendig, um hohe Peak Kapazitäten zu generieren [2]. Der Einsatz von gekoppelten Säulen kann dabei helfen, CEX Analysen für Antikörper weiter zu verbessern. Damit wird es möglich, chromatographische Profile verschiedener Batch-Prozesse oder biologisch ähnlicher Substanzen vergleichen zu können. Weil YMC-BioPro SP-F die höchste Auflösung für die Trennung von Natalizumab, Cetuximab, Adalimumab und Denosumab aufwies, wurde die YMC-Säule für eine hochauflösende Trennung mithilfe einer Säulenkupplung ausgewählt. Wie in Abb. 3 deutlich wird, wird die Auflösung zwischen den verschiedenen Varianten durch Verlängerung der Säule und des Gradienten signifikant verbessert. Cetuximab Adalimumab Säulenlänge Auflösungserhöhung Gradientenzeit Abb. 3: Der Einfluss der Säulenlänge und des Gradienten (Steilheit) auf die Auflösung im Salzgradienten Modus mit YMC-BioPro SP-F ( mm, 5 µm). Page 5/6

6 Die YMC-BioPro SP-F Säule ist, wie in dieser Studie gezeigt wurde, eine außerordentlich leistungsstarke Phase für die anspruchsvolle Analyse der geladenen Varianten von mabs unter Einsatz der Kationenaustauschchromatographie. Literaturquellen [1] S. Fekete, A. Beck, D. Guillarme, Characterization of cation exchanger stationary phases applied for the separations of therapeutic monoclonal antibodies, J. Pharm. Biomed. Anal., 2015, 111, [2] S. Fekete, M. Dong, T. Zhang, D. Guillarme, High resolution reversed phase analysis of recombinant monoclonal antibodies by ultra-high pressure liquid chromatography column coupling, J. Pharm. Biomed. Anal., 2013, 83, Page 6/6