digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 96

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1 April 2010 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 96 Version 1 Zur Amplifikation von Hochrisiko-Genotypen des humanen Papillomvirus (HPV) DE QIAGEN GmbH, QIAGEN Straße 1 D Hilden R DE Sample & Assay Technologies

2 QIAGEN Sample and Assay Technologies QIAGEN ist der führende Anbieter innovativer Proben- und Testtechnologien zur Isolierung und zum Nachweis von Bestandteilen aus jeder biologischen Probe. Unsere technologisch und qualitativ hochwertigen Produkte und unser exzellenter Service garantieren Erfolg von der Probenvorbereitung bis zum Ergebnis. QIAGEN setzt Standards für: Aufreinigung von DNA, RNA und Proteinen Testsysteme für Nukleinsäuren und Proteine microrna-forschung und RNAi Automatisierung von Proben- und Testtechnologien Wir stellen Ihnen die neuesten Technologien zur Verfügung, damit Sie schnell und sicher die besten Ergebnisse erzielen können. Weitere Informationen finden Sie im Internet unter

3 Inhaltsverzeichnis Kit-Inhalt 4 Erklärung der Symbole 4 Lagerung 5 Vorgesehener Verwendungszweck 5 Anwendungseinschränkungen 5 Qualitätskontrolle 5 Technischer Service 5 Sicherheitsinformationen 6 Einleitung 7 Testprinzip 7 Vom Anwender bereitzustellende Ausrüstung und Reagenzien 8 Wichtige Hinweise 9 Empfehlungen zum Aufbau des Labors und zu den anzuwendenden Verfahren 9 Probennahme 10 Probenlagerung 10 Aufreinigung der Proben-DNA 11 Protokoll PCR-Amplifikation von HPV-DNA 13 Hilfe zur Fehlersuche 16 Anhang: Ausgangs-DNA-Templates 17 Literatur 17 Bestellinformationen 18 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010 3

4 Kit-Inhalt digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit (96) Katalog-Nr Anzahl der Reaktionen 96 MM Mastermix* 4 x 945 μl POS PCR-Positivkontrolle 150 μl NEG PCR-Negativkontrolle: Wasser (PCR-Qualität) MgCl 2 MgCl 2 (25 mm) 1000 μl 1000 μl Handbuch 1 * Lösung mit Primer GP5+ und biotinyliertem Primer GP6+, Beta-Globin-Primern, dntps, PCR-Puffer und HotStarTaq Plus DNA-Polymerase in Wasser Lösung zweier Plasmide, die eine HPV18-Sequenz bzw. eine Beta-Globin-Sequenz enthalten, mit Carrier-RNA in T10E1-Puffer Erklärung der Symbole <N> Inhalt ausreichend für <N> Tests In-Vitro-Diagnostikum Übereinstimmung mit EU-Richtlinien Katalognummer Hersteller Chargennummer Materialnummer Wichtiger Hinweis Zulässiger Temperaturbereich 4 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

5 Verfallsdatum Bitte lesen Sie die Angaben im Handbuch Lagerung Der digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit sollte sofort nach Erhalt bei 20 C gelagert werden. Ungeöffnete Röhrchen sind bis zum Verfallsdatum haltbar. Der digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit sollte getrennt von potenziellen DNA-Kontaminationsquellen, insbesondere DNA-Amplifikaten, gelagert werden (siehe Raum 1, Seite 9). Wenn die Reagenzien nicht vollständig in einem Experiment verbraucht werden, müssen die Reste bei 20 C gelagert werden. Die PCR-Positivkontrolle sollte getrennt vom Rest des Kits bis zum Ablauf des Verfallsdatums auf dem Etikett bei 20 C gelagert werden. Vorgesehener Verwendungszweck Der digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit gehört zusammen mit dem digene HPV Genotyping LQ Test, Detection Kit. Er enthält den Mastermix (MM), die MgCl 2 -Lösung, die PCR-Negativkontrolle (NEG) und die PCR- Positivkontrolle (POS) für die HPV-PCR-Reaktionen. Anwendungseinschränkungen Die Produkte sollten mit der angemessenen Sorgfalt und Aufmerksamkeit verwendet werden. Wir empfehlen allen Benutzern von QIAGEN Produkten die Einhaltung der NIH-Richtlinien für Experimente mit rekombinanter DNA oder entsprechender anderer Richtlinien. Qualitätskontrolle Gemäß dem ISO-zertifizierten Qualitätsmanagementsystem von QIAGEN wird jede Charge des digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kits nach festgelegten Prüfkriterien getestet, um eine einheitliche Produktqualität sicherzustellen. Technischer Service Der Technische Service von QIAGEN garantiert Qualität auch in der wissenschaftlichen Beratung unserer Kunden. Hier stehen Ihnen rund um die Uhr erfahrene Wissenschaftler für Ihre Fragen zu Probenvorbereitungs- und digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010 5

6 Testtechnologien und zur Anwendung der QIAGEN Produkte zur Verfügung. Rufen Sie uns an, wenn Sie Fragen zum digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit oder zu anderen QIAGEN Produkten haben. Die Erfahrungen unserer Kunden sind eine wichtige Informationsquelle hinsichtlich weitergehender und spezialisierter Anwendungen. Diese Informationen sind sowohl für andere Wissenschaftler als auch für die Forscher von QIAGEN von Nutzen. Melden Sie sich bei uns; Ihre Vorschläge und Ideen zu unseren Produkten und zu neuen Anwendungen und Techniken interessieren uns. Technische Hinweise und weitere Informationen finden Sie in unserem Technical Support Center im Internet unter Sie können außerdem unseren Technischen Service anrufen oder sich an Ihren örtlichen Distributor wenden (siehe hintere Umschlagseite oder im Internet unter Sicherheitsinformationen Tragen Sie beim Umgang mit Chemikalien immer einen Laborkittel, Einmal- Laborhandschuhe und eine Schutzbrille. Weitere Informationen können Sie den entsprechenden Sicherheitsdatenblättern (MSDS, material safety data sheets) entnehmen. In unserer Online-Sammlung der Sicherheitsdatenblätter unter finden Sie zu jedem QIAGEN Kit und zu jeder Kitkomponente das jeweilige MSDS als PDF-Datei, die sie einsehen und ausdrucken können. 24-Stunden-Giftnotruf Im Notfall können Sie 24 Stunden am Tag medizinische Informationen (in deutscher, englischer und französischer Sprache) erhalten über den Giftnotruf des Giftinformationszentrums Mainz (Deutschland) Tel.: digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

7 Einleitung Der digene HPV Genotyping LQ Test besteht aus 2 Kits: dem digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit und dem digene HPV Genotyping LQ Test, Detection Kit. Der digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit enthält die Reagenzien, die für die PCR-Amplifikation eines HPV- Genomabschnitts benötigt werden. Mit dem digene HPV Genotyping LQ Test, Detection Kit ist eine einfache und zuverlässige Identifizierung von Hochrisiko- Genotypen (HR) des humanen Papillomvirus (HPV) über Hybridisierungsreaktionen mit der xmap-technologie möglich, die auf dem LiquiChip -System nachgewiesen werden. Lesen Sie vor Beginn der Arbeiten das gesamte Handbuch. Prinzip Durch Einsatz des PCR-Primerpaars GP5+/6+ wird eine hochkonservierte L1-Sequenz amplifiziert. Zur Amplifikation wird die HotStarTaq Plus DNA- Polymerase verwendet. Der Primer GP6+ ist biotinyliert, was den Nachweis und die Analyse der amplifizierten Sequenzen mit dem digene HPV Genotyping LQ Test, Detection Kit ermöglicht. Durch die Beta-Globin-Primer kann als Kontrolle gleichzeitig die humane genomische DNA in den klinischen Proben amplifiziert werden, was Hinweise auf eine Inhibierung der PCR oder auf Fehler bei Probenund DNA-Aufreinigung geben kann. digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010 7

8 Vom Anwender bereitzustellende Ausrüstung und Reagenzien Tragen Sie beim Umgang mit Chemikalien immer einen Laborkittel, Einmal- Laborhandschuhe und eine Schutzbrille. Weitere Informationen können Sie den entsprechenden Sicherheitsdatenblättern (MSDS, material safety data sheets) entnehmen, die Sie vom jeweiligen Hersteller beziehen können. Dünnwandige PCR-Röhrchen, 0,2 ml Thermocycler* Pipetten * und Einweg-Pipettenspitzen mit hydrophoben Filtern (1 20 μl, μl und μl) Optional: Repetierpipette (beispielsweise Finnpipette Stepper von Thermo Electron, siehe * Stellen Sie sicher, dass die Geräte gemäß den Herstellerempfehlungen geprüft und kalibriert wurden. Dies ist keine vollständige Aufzählung von Anbietern und viele wichtige Anbieter für Laborzubehör sind nicht enthalten. 8 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

9 Wichtige Hinweise Empfehlungen zum Aufbau des Labors und zu den anzuwendenden Verfahren Wir empfehlen, die Arbeitsschritte in folgender Reihenfolge durchzuführen: 1. Ansetzen und Aliquotieren der PCR-Mischungen 2. Vorbereiten der Proben (DNA-Isolierung) 3. Amplifikation 4. Analyse der biotinylierten PCR-Produkte durch reverse Hybridisierung Personen, die an den Schritten 3 oder 4 beteiligt waren, sollten nicht später am gleichen Tag noch an Arbeiten der Schritte 1 oder 2 beteiligt sein. Ebenso sollten Personen nach Arbeiten an Schritt 2 nicht später am gleichen Tag noch an Arbeiten des Schritts 1 beteiligt sein. Um eine Kontamination der Proben (beispielsweise mit Amplifikaten) zu verhindern und um falsch-positive Ergebnisse zu vermeiden, sollte das Verfahren in drei voneinander getrennten Räumen mit jeweils separater Ausrüstung und separaten Pipetten durchgeführt werden. Ein Raum wird für das Ansetzen der Reagenzien benötigt, ein Raum für die Probenvorbereitung und ein dritter Raum für die Amplifikation und den Nachweis der PCR-Produkte. Alle Ausrüstungsgegenstände sollten in dem Raum verbleiben, in dem sie benutzt werden und nicht von einem Raum in den anderen verbracht werden. Beim Pipettieren sollten Filterspitzen verwendet werden, um die Gefahr von Kreuzkontaminationen zwischen den Proben zu verringern. Tragen Sie außerdem Einmal-Laborhandschuhe und wechseln Sie diese häufig. Raum 1: Dieser Raum sollte nur der Lagerung und dem Ansetzen der PCR- Reagenzien dienen. Der Raum und die Ausrüstung des Raums müssen frei von Amplifikaten bleiben. Das Laborpersonal sollte saubere Laborkittel tragen, die nicht außerhalb dieses Raums getragen werden dürfen. Es sollten stets Einmal- Laborhandschuhe getragen werden. Raum 2: Dieser Raum wird zur Probenvorbereitung genutzt und muss frei von Amplifikaten bleiben. Das Laborpersonal sollte saubere Laborkittel tragen, die nicht außerhalb dieses Raums getragen werden dürfen. Während der Probenvorbereitung sollten häufig die Einmal-Laborhandschuhe gewechselt werden. Beim Öffnen der Röhrchen mit den verarbeiteten Proben muss besondere Vorsicht angewandt werden, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden. Wenn möglich sollte immer nur ein Reaktionsröhrchen mit Probe gleichzeitig geöffnet sein. Raum 3: Dieser Raum wird für die Amplifikation und den Nachweis der PCR- Produkte genutzt. Das Laborpersonal sollte saubere Laborkittel tragen, die nicht außerhalb dieses Raums getragen werden dürfen und die täglich gewechselt digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010 9

10 werden müssen. Beim Arbeiten mit Amplifikaten sollten Einweg- Laborhandschuhe getragen werden. Der digene HC2 High-Risk HPV Test und der digene Genotyping LQ Test, Detection Kit können im selben Raum angewendet werden. Führen Sie in diesem Fall die Arbeitsschritte Probenverarbeitung, Denaturierung und Transfer auf die Hybridisierungsplatte des HC2-Tests durch, bevor Sie das Testlabor für HC2 und Genotyping LQ, Detection Kit (Raum 3) betreten. Dies verhindert, dass die Originalproben, die in Raum 2 verarbeitet werden sollten, mit Amplifikaten aus Raum 3 in Kontakt kommen. Probennahme Der digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit wurde validiert für die Verwendung mit Folgendem: digene Cervical Sampler (Kat.-Nr ) digene Female Swab Specimen Collection Kit (Kat.-Nr ) Proben, die in PreservCyt -Lösung des ThinPrep Pap Test von Hologic genommen wurden STM (Denaturierte STM-Proben gemäß digene HC2 High-Risk HPV Test) Für Proben, die mit anderen Probennahmesystemen genommen wurden oder in anderen Transportmedien transportiert wurden, wurde dieser Assay nicht qualifiziert. Probenlagerung Die Proben können wie in der folgenden Tabelle 1 dargestellt gelagert werden. Eine nicht ordnungsgemäße Lagerung der Proben kann zu falsch-negativen Ergebnissen des Assays führen. Tabelle 1. Probenlagerungsbedingungen Lagerzeit bis zum HC2-Test STM Bis zu 2 Wochen STM Bis zu 3 Wochen Temperatur Transportmedium Raumtemperatur (15 25 C) Lagerzeit nach dem HC2-Test 2 8 C Bis zu 3 Monate Temperatur Über Nacht C 20 C Fortsetzung der Tabelle auf der nächsten Seite 10 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

11 Tabelle 1. (Fortsetzung) Transportmedium STM PreservCyt- Lösung PreservCyt- Lösung Lagerzeit bis zum HC2-Test 3 Wochen bis 3 Monate Bis zu 3 Monate Bis zu 3 Monate Temperatur Lagerzeit nach dem HC2-Test 20 C Bis zu 3 Monate Temperatur 20 C 2 30 C Über Nacht 2 8 C 2 30 C Bis zu 3 Monate 20 C Aufreinigung der Proben-DNA Dieser Vorgang sollte vor dem Protokoll und in Raum 2 durchgeführt werden. Eine nicht ordnungsgemäße DNA-Aufreinigung oder zu häufiges Einfrieren und Wiederauftauen können zu falsch-negativen Ergebnissen im Assay führen. Für die automatisierten und die manuellen Methoden können denaturierte Proben in STM und nicht denaturierte Proben in PreservCyt eingesetzt werden. Für die automatisierte DNA-Aufreinigung wurde von uns der EZ1 DSP Virus Kit (Kat.-Nr ) validiert. Proben, die für HC2-Assays verwendet wurden, sollten vollständig aufgetaut und auf Raumtemperatur äquilibriert sein und vor der Verwendung kurz auf einem Vortex-Mixer homogenisiert werden. Bei allen geeigneten Probenarten sollte ein Probenvolumen von 200 μl vorhanden sein. Zur Aufreinigung von DNA aus denaturierten STM-Proben oder nicht denaturierten PreservCyt-Proben müssen 3 μg Carrier-RNA zugegeben werden. Das Elutionsvolumen wird auf 90 μl eingestellt. Für die manuelle DNA-Aufreinigung wurde von uns der QIAamp MinElute Virus Spin Kit (50) (Kat.-Nr ) validiert, mit einem Anfangsvolumen von 200 μl bei allen geeigneten Probenarten. Geben Sie 2,8 μg Carrier-RNA zu jeder Probe hinzu. Ziehen Sie Tabelle 1, Volumes of Buffer AL and carrier RNA Buffer AVE mix for the QIAamp MinElute Virus Spin Kit procedure (Seite 17) zu Rate. Geben Sie die Hälfte des in der Tabelle angegebenen Volumens der Mischung aus Carrier-RNA und Puffer AVE (μl) zu der angegebenen Menge an Puffer AL (ml). Führen Sie das Protokoll inklusive der empfohlenen Schritte 9 und 13 durch (siehe Protocol: Purification of Viral Nucleic Acids from Plasma or Serum im QIAamp MinElute Virus Spin Kit Handbook (Third Edition, Februar digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/

12 2007), Tabelle 1, Seite 17 [Volume of Buffer AL and carrier RNA Buf AVE mix required for the QIAamp MinElute Virus Spin Kit procedure]). Eluieren Sie die DNA mit 100 μl Elutionspuffer. Es können sowohl denaturierte STM-Proben als auch nicht denaturierte PreservCyt-Proben eingesetzt werden. 12 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

13 Protokoll: PCR-Amplifikation von HPV-DNA Wichtige Hinweise vor Beginn Verwenden Sie den Mastermix (MM) und die MgCl 2 -Lösung in Raum 1 (einem von den Bereichen für Probenvorbereitung und Analyse der PCR- Produkte abgetrennten Bereich) und die PCR-Positivkontrolle (POS) und PCR-Negativkontrolle (NEG) in Raum 2 (einem für die DNA-Isolierung verwendeten Bereich, der von dem Bereich für die Analyse der PCR- Produkte abgetrennt ist). Gängige Produkte zur DNA-Aufreinigung sollten geeignete DNA- Ausbeuten für diesen Assay liefern (siehe Seite 11). Lesen Sie Wichtige Hinweise, ab Seite 9. Setze Sie alle Reaktionsgemische in Raum 1 an (einem Bereich, der von den Bereichen für die DNA-Isolierung und für die Analyse der PCR- Produkte abgetrennt ist). Verwenden Sie Einwegspitzen mit hydrophoben Filtern, um die Gefahr von Kreuzkontaminationen zu verringern. Die HotStarTaq Plus DNA-Polymerase muss zunächst für 5 min bei 94 C aktiviert werden (siehe Schritt 6 dieses Protokolls). Durchführung 1. Tauen Sie in Raum 1 den Mastermix (MM) und die 25 mm MgCl 2 - Lösung auf, bei Raumtemperatur (15 25 C) oder auf Eis. 2. Durchmischen Sie die Reagenzien vorsichtig auf einem Vortex-Mixer. Es ist, wichtig, dass die Lösungen vor Gebrauch vollständig durchmischt werden, um eine gleichmäßige Salzkonzentration zu gewährleisten. 3. Setzen Sie, immer noch in Raum 1, ein Reaktionsgemisch gemäß Tabelle 2 (Seite 14) an. Da die HotStarTaq Plus DNA-Polymerase bei Raumtemperatur nicht aktiv ist, müssen die Reaktionsgefäße nicht auf Eis gehalten werden. Die Reaktionsgemische dürfen höchstens 2 Stunden gelagert werden. Das Reaktionsgemisch enthält alle für die PCR benötigten Komponenten außer der Template-DNA und den Positiv- und Negativkontrollen (POS, NEG). digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/

14 Setzen Sie 10 % mehr an Reaktionsgemisch an, als für die Gesamtzahl der PCR-Reaktionen benötigt wird. 4. Mischen Sie das Reaktionsgemisch gründlich, immer noch in Raum Geben Sie 40 μl des Reaktionsgemisches in jedes PCR-Röhrchen. Mischen Sie vorsichtig (zum Beispiel durch mehrmaliges Auf- und Abpipettieren des Reaktionsgemisches). Tabelle 2. Zusammensetzung des Reaktionsgemisches für die Amplifikation Volumen für 96 Komponente Volumen/Reaktion Reaktionen* Mastermix (MM) 33 μl 3485 μl 25 mm MgCl 2 -Lösung 7 μl 739 μl Gesamtvolumen 40 μl 4224 μl Template-DNA o. Kontrolle 10 μl * Einschließlich 10 % Zusatzvolumen 6. Gehen Sie in Raum 2 und geben Sie je 10 μl Template-DNA in die Röhrchen mit dem Reaktionsgemisch. Die Lösung der aufgereinigten DNA sollte vollständig aufgetaut und vor dem Pipettieren völlig homogen sein. 7. Mischen Sie die Lösung vorsichtig durch mindestens zweimaliges Auf- und Abpipettieren. 8. Geben Sie, immer noch in Raum 2, je 10 μl der PCR-Positivkontrolle (POS) und der PCR-Negativkontrolle (NEG) in jeweils einzelne Röhrchen mit dem Reaktionsgemisch. 9. Mischen Sie vorsichtig durch mindestens zweimaliges Auf- und Abpipettieren. 14 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

15 10. Gehen Sie mit dem PCR-Probengemisch in Raum 3 und programmieren Sie den Thermocycler gemäß den Anweisungen des Herstellers mit den Bedingungen aus der folgenden Tabelle 3. Alle PCR-Programme müssen einen anfänglichen Hitzeaktivierungsschritt bei 94 C für 5 min enthalten. Die Aktivierungszeit soll 5 min nicht überschreiten. Tabelle 3. Optimiertes PCR-Protokoll Anfänglicher Aktivierungsschritt:* 5 min 94 C 3-Schritt-Zyklus Denaturierung (mit 2,8 C/s auf 94 C): 20 s 94 C Annealing (mit 1,8 C/s auf 38 C): 30 s 38 C Verlängerung (mit 1,8 C/s auf 71 C): 80 s 71 C Anzahl der Zyklen: 40 Abschließende Verlängerung: 4 min 71 C Abkühlen: 10 s 10 C * Durch diesen Hitzeschritt wird die HotStarTaq Plus DNA-Polymerase aktiviert. 11. Stellen Sie die PCR-Röhrchen in den Thermocycler und starten Sie das PCR-Programm. Falls die Detektion nicht am selben Tag durchgeführt wird, lagern Sie die Röhrchen mit den PCR-Produkten bei 20 C. Verwenden Sie zur Detektion des PCR-Produkts das Detektionskit nach den Anweisungen des Handbuchs zum digene Genotyping LQ Test, Detection Kit. digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/

16 Hilfe zur Fehlersuche In diesem Kapitel finden Sie nützliche Hinweise, die Ihnen bei der Lösung eventuell auftretender Probleme helfen können. Weitere Informationen finden Sie auch auf der Frequently Asked Questions -Seite unseres Support-Centers unter: Außerdem beantworten die Wissenschaftler des Technischen Service bei QIAGEN gerne Ihre Fragen zu den Angaben und Protokollen in diesem Handbuch sowie zu Probenvorbereitungsund Testtechnologien allgemein (Möglichkeiten der Kontaktaufnahme finden Sie auf der Rückseite dieses Handbuchs und im Internet unter Kommentare und Vorschläge Niedrige Signalstärke oder Empfindlichkeit a) HotStarTaq Plus DNA- Polymerase nicht aktiviert Überprüfen Sie, ob bei der PCR ein anfänglicher Hitzeaktivierungsschritt bei 94 C für 5 min durchgeführt wurde. b) Pipettierfehler oder fehlendes Reagenz c) Probleme mit dem Ausgangs-Template d) Probleme mit dem Thermocycler Wiederholen Sie die PCR. Überprüfen Sie die Konzentrationen und Lagerungsbedingungen der Reagenzien. Überprüfen Sie die Konzentration, die Lagerungsbedingungen und die Qualität des Ausgangs-Templates (siehe Anhang, Seite 17). Falls notwendig, stellen Sie eine Verdünnungsreihe der Template-DNA her. Wiederholen Sie die PCR mit den neuen Verdünnungen. Überprüfen Sie, ob der Thermocycler mit Strom versorgt wird und korrekt programmiert ist. 16 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

17 Anhang: Ausgangs-DNA-Templates Da die PCR aus mehreren Zyklen enzymatischer Reaktionen besteht, ist sie empfindlicher gegenüber Verunreinigungen wie Proteinen, Phenol/Chloroform, Salzen, Ethanol, EDTA und anderen Lösungsmitteln als enzymkatalysierte Prozesse, die in einem Schritt ablaufen. QIAGEN bietet ein komplettes Sortiment an Systemen für die Nukleinsäure-Präparation, die eine optimale Qualität der Templates für die PCR sicherstellen. Weitere Informationen über die QIAGEN Kits zur DNA-Aufreinigung erhalten Sie von unserem Technischen Service (siehe hintere Umschlagseite dieses Handbuchs oder auf Literatur QIAGEN führt eine umfangreiche und aktuelle Online-Datenbank mit wissenschaftlichen Publikationen, in denen die Anwendung von QIAGEN Produkten beschrieben wird. Umfassende Suchoptionen ermöglichen Ihnen das Auffinden der für Sie interessanten Artikel durch eine einfache Stichwortsuche oder durch Eingabe von Anwendung, Forschungsgebiet, Titel usw. Zugang zur vollständigen Literaturliste haben Sie online über die QIAGEN Reference Database unter Alternativ können Sie sich an den Technischen Service bei QIAGEN oder an Ihren örtlichen Distributor wenden. digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/

18 Bestellinformationen Produkt Inhalt Kat.-Nr. digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit (96) Für 96 Reaktionen: Primer GP5+ und GP6+, Reagenzien und Puffer digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

19 Frei bleibende Seite digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/

20 Marken: QIAGEN, QIAamp, digene, EZ1, HotStarTaq ; Hybrid Capture, MinElute (Gruppe QIAGEN); Finnpipette (Thermo Electron OY); ThinPrep, PreservCyt (Hologic Corporation); Thermomixer (Eppendorf). Eingeschränkte Nutzungsvereinbarung Mit Nutzung dieses Produkts erkennen Käufer und Anwender des digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kits die folgenden Bedingungen an: 1. Der digene HPV Genotyping LQ Test Amplification Kit darf nur gemäß den Angaben im digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch und mit den Komponenten, die im Kit geliefert werden, verwendet werden. QIAGEN gewährt im Rahmen Ihrer Eigentumsrechte keinerlei Lizenz, die zum Kit gehörenden Komponenten mit anderen Komponenten, die nicht zum Kit gehören, zu verwenden oder zu kombinieren, mit Ausnahme der im digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch und in zusätzlichen, im Internet unter verfügbaren Protokollen beschriebenen Anwendungen. 2. Über die ausdrücklich erwähnten Lizenzanwendungen hinaus übernimmt QIAGEN keinerlei Garantie dafür, dass dieser Kit und/oder die mit ihm durchgeführten Anwendungen die Rechte Dritter nicht verletzen. 3. Dieser Kit und seine Komponenten sind für die einmalige Verwendung lizenziert und dürfen nicht wiederverwendet, wiederaufgearbeitet oder weiterverkauft werden. 4. QIAGEN lehnt außer der ausdrücklich gewährten Lizenzgewährung jede weitere Lizenzgewährung ab, sowohl ausdrücklich als auch konkludent. 5. Käufer und Anwender des Kits stimmen zu, keinerlei Schritte zu unternehmen oder anderen die Einleitung von Schritten zu gestatten, die zu unerlaubten Handlungen im obigen Sinne führen könnten oder solche erleichtern könnten. QIAGEN kann die Verbote dieser eingeschränkten Nutzungsvereinbarung an jedem Ort gerichtlich geltend machen und wird sämtliche Ermittlungs- und Gerichtskosten, inklusive Anwaltsgebühren, zurückfordern, die ihr bei der Geltendmachung dieser eingeschränkten Nutzungsvereinbarung oder irgendeines ihrer geistigen Eigentumsrechte im Zusammenhang mit dem Kit und/oder dessen Komponenten entstehen. Aktualisierte Nutzungs- und Lizenzbedingungen können im Internet unter nachgelesen werden QIAGEN, alle Rechte vorbehalten. 20 digene HPV Genotyping LQ Test, Amplification Kit Handbuch 4/2010

21 Australia Orders Fax Technical Austria Orders 0800/ Fax 0800/ Technical 0800/ Belgium Orders Fax Technical Brazil Orders Fax Technical China Orders Fax Technical , Denmark Orders Fax Technical Finland Orders Fax Technical France Orders Fax Technical Offers Germany Orders Fax Technical Hong Kong Orders Fax Technical Ireland Orders Fax Technical Italy Orders Fax Technical Japan Telephone Fax Technical Korea (South) Orders Fax Technical Luxembourg Orders Fax Technical Mexico Orders Fax Technical The Netherlands Orders Fax Technical Norway Orders Fax Technical Singapore Orders Fax Technical Spain Orders Fax Technical Sweden Orders Fax Technical Switzerland Orders Fax Technical UK Orders Fax Technical DE Sample & Assay Technologies