INSTAND-RINGVERSUCHE INSTAND-EXTERNAL QUALITY ASSESSMENT SCHEMES BEGLEITHEFT MANUAL

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1 INSTAND-RINGVERSUCHE INSTAND-EXTERNAL QUALITY ASSESSMENT SCHEMES BEGLEITHEFT MANUAL Informationen zur Testdurchführung Instructions for Test Performance Virusimmunologie und Virusgenom-Nachweis Virus Immunology and Virus Genome Detection - INSTAND e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e. V. INSTAND reg. ass., Society for Research Promotion of Quality Assurance in Medical Laboratories reg. ass. WHO Collaborating Centre for Quality Assurance and Standardization in Laboratory Medicine in Zusammenarbeit mit/in collaboration with Deutsche Vereinigung zur Bekämpfung der Viruskrankheiten e. V. (DVV) Gesellschaft für Virologie e. V. (GfV) Deutsche Gesellschaft für Hygiene und Mikrobiologie e. V. (DGHM) Ringversuchsleiter/EQASs adviser: Stellvert. Ringversuchsleiter/Assist. EQASs adviser: Prof. Dr. Heinz Zeichhardt Dr. Hans-Peter Grunert Charité - Universitätsmedizin Berlin Institut für Biotechnologische Diagnostik Institut für Virologie, Campus Benjamin Franklin Potsdamer Chaussee 80, Berlin, Germany Hindenburgdamm 27, Berlin, Germany Tel.: , Fax: Tel.: /24, Fax: HPGrunert@gmx.de Heinz.Zeichhardt@charite.de Begleitheft RV Virologie doc

2 INHALTSVERZEICHNIS CONTENTS Informationen zu den virologischen INSTAND- Ringversuchen 4 Information on INSTAND External Quality Assessment (EQA) Schemes in Virus Diagnostics 4 Hinweise zu Protokollbögen mit vorgedruckten Angaben 8 Information on protocol sheets with preprinted statements 8 Virusimmunologie Virus Immunology Gruppe Ringversuch Probenanzahl Seite Hinweise zur Virusimmunologie 9 Nr. 335 HIV-1/HIV Nr. 337 HIV-1 p24 Antigen 2 13 Nr. 343 Hepatitis A Virus 4 14 Nr. 344 Hepatitis B Virus (I) Nr. 345 Hepatitis B Virus (II) 6 17 Nr. 346 Hepatitis C Virus 4 18 Nr. 350 Dengueviren 4 Bitte beachten Sie speziell S. 20 zur klinischen Bewertung Nr. 351 Cytomegalievirus 2 21 Nr. 355 Hantaviren 4 22 Sie erhalten von jeder Probe 1 Röhrchen. Virusgenom-Nachweis Gruppe Ringversuch Probenanzahl 19 Seite Hinweise zum Virusgenom-Nachweis 24 Nr. 360 HIV-1 4* 27 Nr. 361 Hepatitis B Virus 4* 28 Nr. 362 Hepatitis C Virus 4* 29 Nr. 365 Cytomegalievirus 4* 30 Nr. 367 Parvovirus B19 4* 31 Nr. 375 HCV-Genotypisierung 5 32 Nr. 377 Hepatitis A Virus 4* 33 * Sie erhalten von jeder Probe 2 Röhrchen. Sie erhalten von jeder Probe 1 Röhrchen. Group External Quality Assessment Scheme (EQAS) No. of samples Page Instructions for Virus Immunology 9 No. 335 HIV-1/HIV No. 337 HIV-1 p24 Antigen 2 13 No. 343 Hepatitis A Virus 4 14 No. 344 Hepatitis B Virus (I) No. 345 Hepatitis B Virus (II) 6 17 No. 346 Hepatitis C Virus 4 18 No. 350 Dengue viruses 4 Please note the instruction for clinical interpretation on p. 20 No. 351 Cytomegalovirus 2 21 No. 355 Hantaviruses 4 22 You receive 1 tube of each sample. Virus Genome Detection Group External Quality Assessment Scheme (EQAS) No. of samples 19 Page Instructions for Virus Genome Detection 24 No. 360 HIV-1 4* 27 No. 361 Hepatitis B Virus 4* 28 No. 362 Hepatitis C Virus 4* 29 No. 365 Cytomegalovirus 4* 30 No. 367 Parvovirus B19 4* 31 No. 375 HCV Genotyping 5 32 No. 377 Hepatitis A Virus 4* 33 * You receive 2 tubes of each sample. You receive 1 tube of each sample. INSTAND-Sollwert-Laboratorien INSTAND-Target Value Laboratories INSTAND-Sollwert-Laboratorien für Ringversuche in der Virusdiagnostik 34 INSTAND-Target Value Laboratories for EQASs in Virus Diagnostics 34 Seite/page 2 von/of 36 Begleitheft RV Virologie doc

3 Rücksendung der Protokollbögen an: INSTAND e.v. Postfach Düsseldorf Tel.: Return the protocol sheets to: INSTAND e.v. P.O. Box D Düsseldorf Germany Tel.: Rücksendetermin für die Protokollbögen: bis Deadline for returning the protocol sheets: till Schicken Sie bitte alle Protokollbögen zurück, auch wenn von Ihnen nicht alle Untersuchungen durchgeführt wurden. Bitte behalten Sie eine Kopie Ihrer Protokollbögen. Please return the complete sets of your protocol sheets, even if some analyzes were not performed. Please keep copies of your protocol sheets. Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 3 von/of 36

4 Informationen zu den virologischen INSTAND-Ringversuchen 1 Neue RiliBÄK und Gültigkeitsdauer der Zertifikate für die virologischen INSTAND- Ringversuche 1.1 Vorgaben der neuen RiliBÄK In der neuen Richtlinie der Bundesärztekammer (RiliBÄK) zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen werden die Vorgaben zur internen und externen Qualitätssicherung für alle Gebiete der laboratoriumsmedizinischen Untersuchungen und damit auch für die Virusdiagnostik grundsätzlich geregelt (Deutsches Ärzteblatt, Jg. 108, Heft 30, , Seite A ; Labor pdf). Alle vom medizinischen Laboratorium durchgeführten qualitativen und quantitativen virusdiagnostischen Untersuchungen unterliegen der internen Qualitätssicherung. Zusätzlich besteht Teilnahmepflicht an der externen Qualitätssicherung (Ringversuche) für diejenigen virusdiagnostischen Untersuchungen, für die Vorgaben zur externen Qualitätssicherung in den Tabellen der speziellen RiliBÄK-Teile gemacht werden. Antikörper-Nachweisteste in der Virusdiagnostik wurden dem speziellen RiliBÄK-Teil B 2 (Qualitative laboratoriumsmedizinische Untersuchungen) zugeordnet (in Kraft getreten am mit einer Übergangszeit bis zum ). Voraussetzung, dass ein Antikörpertest unter den speziellen Teil B 2 fällt, ist, dass das Ergebnis primär qualitativ als "positiv", "negativ" oder "grenzwertig/ fraglich" angegeben wird. Eine quantitative Ergebnisangabe* (z.b. Konzentrationsangabe in Einheiten/ Volumen) kann in Klammern zur Orientierung vermerkt werden. Wird die quantitative Angabe der Antikörperkonzentration alleine oder an erster Stelle berichtet, so fällt die Untersuchung unter den speziellen RiliBÄK- Teil B 1 (Quantitative laboratoriumsmedizinische Untersuchungen) mit allen nötigen Vorgaben. Siehe dazu Homepage der Bundesärztekammer zu "Häufig gestellte Fragen zur Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen ( FAQ pdf). In Tabelle B 2-2 (Externe Qualitätssicherung/ Ringversuche) sind als RiliBÄK-pflichtige virologische Messgrößen/Untersuchungen aufgeführt: Antikörper gegen HIV, Antikörper gegen Hepatitis A Virus, Antikörper gegen Hepatitis B Virus (Anti-HBc, Anti-HBe, Anti-HBs), Antikörper gegen Hepatitis C Virus, Antikörper gegen Rötelnvirus. * Bitte beachten Sie, dass z.b. eine Titerbestimmung eine qualitative Untersuchung darstellt (s. RiliBÄK-Teil A "Grundlegende Anforderungen an Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen"). Seite/page 4 von/of 36 Information on INSTAND EQA Schemes in Virus Diagnostics 1 New RiliBÄEK (Guideline of the German Medical Association) and validity period of certificates of the INSTAND EQA schemes 1.1 New RiliBAEK The new Guideline of the German Medical Association (Bundesärztekammer / RiliBAEK = Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen) specifies the basic principles of internal and external quality assurance of all laboratory medical analyses including those in virus diagnostics (please see: Deutsches Ärzteblatt, Jg. 108, Heft 30, , Seite A ; Labor pdf). All qualitative and quantitative analyses in virus diagnostics are subject to internal quality assurance. In addition all analyses in virus diagnostics which are specified for external quality assurance (external quality assessment/eqa schemes) in the tables of the different RiliBAEK sections are subject to mandatory participation in the corresponding EQA schemes. The quality assurance of tests for the detection of virus specific antibodies was assigned to section B 2 of the RiliBAEK "qualitative determinations in laboratory medicine" (effective since with a transition period of two years). Reporting a result of a test for virus specific antibody detection primarily qualitatively as "positive", "negative" or "borderline/indeterminate" implies that the quality assurance of the corresponding test has to be performed according to RiliBAEK section B 2 (qualitative determinations in laboratory medicine). In this case quantitative statements on antibody concentrations* (i.e. as units/volume) can additionally be reported in brackets for orientation. Please note that primary reporting of antibody concentration alone or in front of the qualitative result directly implies that the quality assurance of the corresponding test has to be performed according to RiliBAEK section B 1 ("quantitative determinations in laboratory medicine"). Please see the homepage of the German Medical Association for FAQs / "Häufig gestellte Fragen zur Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen ( FAQ pdf). Table B 2-2 of section B 2 (external quality assurance) comprises tests for the detection of antibodies for which participation in the corresponding EQA schemes is mandatory. This concerns testing of antibodies against HIV, antibodies against hepatitis A virus, antibodies against hepatitis B virus (anti-hbc, anti-hbe, anti-hbs), antibodies against hepatitis C virus, antibodies against rubella virus. * Please note that determination of titers is considered as qualitative analysis (see section A of RiliBAEK "General requirements on quality assurance of laboratory medical analyses"). Begleitheft RV Virologie doc

5 1.2 Gültigkeitsdauer der Zertifikate für die virologischen INSTAND-Ringversuche Für die in Tabelle B 2-2 (Externe Qualitätssicherung/ Ringversuche) aufgeführten virologischen Messgrößen/ Untersuchungen ist festgelegt, dass die Gültigkeit eines Ringversuchszertifikats das Doppelte des in Tabelle B 2-2 vorgegebenen Intervalls beträgt. Für diejenigen Antikörper-Nachweisteste in der Virusdiagnostik, die nicht in Tabelle B 2-2 erwähnt sind, wird für die virologischen INSTAND-Ringversuche RiliBÄK-konform verfahren. Für die diagnostischen Teste zum Virusnachweis (mikroskopische, kulturelle, molekularbiologische und immunologische Verfahren zum direkten Virusnachweis) wird gegenwärtig der spezielle RiliBÄK-Teil B 3 (Direkter Nachweis und Charakterisierung von Infektionserregern) erarbeitet. Die Gültigkeitsdauer der Zertifikate für Ringversuche zum Nachweis von Virusantigen und -genom wird dabei an die Vorgaben des bereits in Kraft getretenen speziellen RiliBÄK-Teils B 2 (Qualitative laboratoriumsmedizinische Untersuchungen) angeglichen. Das bedeutet, dass die Gültigkeitsdauer der Zertifikate für die meisten virologischen INSTAND-Ringversuche auf ein Jahr festgelegt ist. Dieses gilt sowohl für die virologischen Ringversuchsprogramme, die INSTAND viermal im Jahr anbietet (s. Tabelle 1), als auch für die Ringversuchsprogramme, die zweimal im Jahr stattfinden (s. Tabelle 2). Für INSTAND-Ringversuchsprogramme, die einmal im Jahr durchgeführt werden, beträgt die Gültigkeitsdauer der Zertifikate 2 Jahre. Hinsichtlich des Spezial-Ringversuchs im Rahmen des RKI-Entero-Surveillance Programms "Enterovirus-PCR/ Anzucht und Typisierung" (374) wird die Gültigkeitsdauer der Zertifikate mit dem Nationalen und Europäischen WHO/EURO Referenzzentrum für Poliomyelitis und Enteroviren am Robert Koch-Institut abgestimmt. 1.3 Bewertungskriterien für die Ergebnisse eines virologischen Ringversuchsprogramms Nach wie vor beinhaltet jeder virologische INSTAND- Ringversuch Untersuchungen in verschiedenen Testkategorien. Diese Testkategorien werden für das Zertifikat einzeln bewertet und in den Auswertungsunterlagen jeweils aufgeführt. Nach der neuen RiliBÄK zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen ist im speziellen Teil E 2 "Spezielle Anforderungen an Ringversuche bei qualitativen laboratoriumsmedizinischen Untersuchungen" unter Punkt 3 "Bewertung der Ringversuchsergebnisse" im Satz 2 u.a. für Antikörpernachweisteste festgelegt: "Die Bewertung erfolgt an Hand der Zielergebnisse. Die Bewertungskriterien müssen bei allen Proben erfüllt sein....". Somit ist die Voraussetzung für die Ergebnisberücksichtigung zur Erteilung eines Zertifikats, dass in der jeweiligen Testkategorie eines Ringversuchs 100% richtige Ergebnisse entsprechend dem vorgegebenen Sollwert erzielt wurden. Entsprechend wird für die Virusantigen- und Virusgenom- Nachweisteste verfahren. 1.2 Validity period of certificates of the INSTAND EQA schemes RiliBAEK defines the validity period of a certificate for each of the above mentioned EQA schemes stated in table B 2-2 (Externe Qualitätssicherung/Ringversuche) as twice as long as the frequency for mandatory participation. All other INSTAND EQA schemes in virus immunology which are not subject of table B 2-2 will be organized by INSTAND in compliance to RiliBAEK. The quality assurance of all tests for the direct virus detection (by microscopy and cell culture as well as molecular biological and immunological procedures) will be defined in RiliBAEK section B 3 (direct detection and characterization of infectious diseases pathogens) which is in progress. The validity period of the certificates of the virological INSTAND EQA schemes for tests stated in section B 3 will follow the already implemented RiliBAEK section B 2 (qualitative determinations in laboratory medicine). This means that the validity period of the certificates of successful participation for most of the INSTAND EQA schemes in virus diagnostics will be one year. This concerns the EQA schemes in virus diagnostics performed with a frequency of four times per year (Table 1) as well as those schemes performed twice a year (Table 2). The validity period of certificate will be two years for EQA schemes performed once a year. The validity period of the certificate of the "Special EQA program in accordance with the RKI-entero surveillance program - Virus Detection - Enterovirus-PCR / cultivation and typing" (program 374) will be agreed with the National Reference Center for Poliomyelitis and Enteroviruses, Regional Reference Laboratory of WHO/ EURO for Poliomyelitis, Robert Koch-Institute, Berlin. 1.3 Evaluation criteria for the results of a defined EQA scheme in virus diagnostics As already recently practiced, the certificate of successful participation of a defined EQA scheme in virus diagnostics is assigned to a defined test category. Each test category is individually evaluated in the certificate of successful participation and listed in all participation and evaluation documents. The evaluation criteria for the results of EQA schemes for the detection of virus specific antibodies follow the new Guideline of the German Medical Association, RiliBAEK section E 2 (specific requirements on EQA schemes for qualitative laboratory medical analyses). For receiving a certificate of successful participation for a defined EQA scheme it is required that you analyzed all samples of the sample set correctly with the same method in the corresponding test categories (100% correct results according to the target values). A corresponding proceeding is applied for tests for virus antigen and genome detection. Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 5 von/of 36

6 2 Versand der Teilnahmedokumente des betreffenden Ringversuchstermins (Zertifikate, Teilnahmebescheinigungen und individuelle Ergebnismitteilungen) Nach wie vor erhalten Sie Ihre Teilnahmedokumente (Zertifikate, Teilnahmebescheinigungen und individuelle Ergebnismitteilungen) postalisch in Papierform. 2.1 Virologische Ringversuche, die viermal im Jahr stattfinden Für die Ringversuche, die viermal im Jahr stattfinden, erhalten Sie Ihre Zertifikate, Teilnahmebescheinigungen und individuellen Ergebnismitteilungen zu dem Zeitpunkt, wenn für den jeweiligen Ringversuchstermin die Vorauswertung zur Verfügung steht (Tabelle 1). Tabelle 1 Versand der Teilnahmedokumente für Ringversuche, die viermal im Jahr stattfinden Virusimmunologie: 335 HIV-1/HIV HIV-1 p24 Ag 343 Hepatitis A Virus 344 Hepatitis B Virus (Prog. I) 345 Hepatitis B Virus (Prog. II) 346 Hepatitis C Virus 351 Cytomegalievirus Seite/page 6 von/of 36 Virusgenom-Nachweis: 360 HIV-1 (RNA) 361 Hepatitis B Virus 362 Hepatitis C Virus 365 Cytomegalievirus 367 Parvovirus B Hepatitis A Virus 2.2 Virologische Ringversuche, die zweimal im Jahr oder seltener stattfinden Ihre Zertifikate, Teilnahmebescheinigungen und individuellen Ergebnismitteilungen für die Ringversuche, die zweimal im Jahr oder seltener stattfinden, erhalten Sie zu einem späteren Zeitpunkt rechtzeitig vor dem jeweiligen Ringversuchstermin (Tabelle 2). Tabelle 2: Versand der Teilnahmedokumente für Ringversuche, die zweimal im Jahr oder seltener stattfinden Virusimmunologie: 341 Rötelnvirus 342 Parvovirus B Hepatitis D Virus 348 Hepatitis E Virus 350 Dengueviren (Ak/NS1-Ag) 352 Epstein-Barr Virus 353 Varizella Zoster Virus 354 Herpes simplex Viren 355 Hantaviren 356 Mumpsvirus 357 Masernvirus 358 FSME Virus 359 Respiratory Syncytial Virus (Ag/Genom) Virusgenom-Nachweis: 363 Herpes simplex Virus Typ 1/2 366 Varizella Zoster Virus 370 Influenzaviren (Genom/Ag) & 371 Adenoviren 372 Enteroviren 373 Humane Papillomviren 374 RKI-Entero- Surveillance (alle 2 Jahre) 375 HCV-Genotyp. (1x jährlich) 376 Epstein-Barr Virus & Da die beiden Termine des Ringversuchs "Influenzaviren" (370) in der Wintersaison stattfinden (jeweils im November und dann im März des darauf folgenden Jahres), richtet sich die Versendung der Teilnahmedokumente (Zertifikate, Teilnahmebescheinigungen und individuellen Ergebnismitteilungen) und der Endauswertungen des November- Termins der Influenza-Ringversuche nach den Vorgaben für die Ringversuche in Tabelle 1. 2 Mailing of participation documents of a defined EQA scheme term (Certificates of successful participation, statements of participation and statements of individual results) INSTAND will continue to supply you with your participation documents (certificates of successful participation, statements of participation and statements of individual results) as printout versions by mail until further notice. 2.1 EQA schemes in virus diagnostics performed with a frequency of four times a year The certificates of successful participation, statements of participation and statements of individual results of the INSTAND EQA schemes in virus diagnostics performed with a frequency of four times a year will be mailed as printouts as soon as possible when the pre-evaluation will have been completed (Table 1). Table 1 Mailing of participation documents of EQA schemes performed with a frequency of four times a year Virus immunology: 335 HIV-1/HIV HIV-1 p24 Ag 343 Hepatitis A virus 344 Hepatitis B virus (Prog. I) 345 Hepatitis B virus (Prog. II) 346 Hepatitis C virus 351 Cytomegalovirus Virus genome detection: 360 HIV-1 (RNA) 361 Hepatitis B virus 362 Hepatitis C virus 365 Cytomegalovirus 367 Parvovirus B Hepatitis A virus 2.2 EQA schemes in virus diagnostics performed twice a year or with lower frequency The certificates of successful participation, statements of participation and statements of individual results of the INSTAND EQA schemes in virus diagnostics performed twice a year or with lower frequency will be mailed at a later stage in due time before the next run of the corresponding EQA schemes (Table 2). Table 2 Mailing of participation documents of EQA schemes performed twice a year or with lower frequency Virus immunology: 341 Rubella virus 342 Parvovirus B Hepatitis D virus 348 Hepatitis E virus 350 Dengue viruses (Ab/NS1-Ag) 352 Epstein Barr virus 353 Varicella zoster virus 354 Herpes simplex viruses 355 Hantaviruses 356 Mumps virus 357 Measles virus 358 TBE (FSME) virus 359 Respiratory syncytial virus (Ag/genome) Virus genome detection: 363 Herpes simplex virus type 1/2 366 Varicella zoster virus 370 Influenza viruses (genome/ag) & 371 Adenoviruses 372 Enteroviruses 373 Human Papilloma viruses 374 RKI-Entero- Surveillance (every two years) 375 HCV genotyping (1x per year) 376 Epstein Barr virus & The two terms of the EQA scheme "Influenza viruses" (370) have been appointed to the winter season, i.e. November and March of the following year. The procedure of mailing of participation documents (certificates of successful participation, statements of participation and statements of individual results) and final report of the influenza EQA scheme of the November term follows the specifications as described for the EQA schemes in Table 1. Begleitheft RV Virologie doc

7 3 Elektronische Bereitstellung der Vor- und Endauswertungen der virologischen Ringversuche Wir haben kürzlich damit begonnen, Ihnen per mitzuteilen, dass die Vor- und Endauswertungen der jeweiligen Ringversuche auf der INSTAND-Homepage elektronisch bereitgestellt sind. Hinsichtlich der Endauswertung der Ringversuche eines bestimmten Ringversuchstermins werden Sie per rechtzeitig vor dem nächsten Termin informiert. Diese enthält eine Tabelle, aus der Sie die Auswertungsdokumente mit Download-Symbolen direkt öffnen und/oder speichern können. Als Beispiel siehe: Virusimmunologie Ringversuche März/April HIV-1 / HIV-2 Damit Sie umgehend über die elektronische Bereitstellung der Vor- und Endauswertungen informiert werden können, benötigt INSTAND von Ihnen unbedingt Ihre -Adresse. Mit Schreiben vom 12. März 2012 wurden Sie in einer postalischen Umfrage gebeten, Ihre aktuelle - Adresse mitzuteilen. Bitte setzen Sie sich mit INSTAND in Verbindung, wenn Sie noch Papierfassungen der Endauswertungen benötigen. 4 Veröffentlichung der Endauswertungen der virologischen Ringversuche auf der INSTAND- Homepage Die Endauswertungen der einzelnen virologischen Ringversuchsprogramme werden nach Fertigstellung kontinuierlich auf der INSTAND-Homepage veröffentlicht. Sie finden die Endauswertungen ebenso wie die Vorauswertung dieses Ringversuchs als PDF-Datei auf der INSTAND-Homepage unter Ringversuche / Kommentare / Jahr und Fachgebiet (Virusimmunologie / Virusgenom-Nachweis) in deutscher Sprache ( 3 Electronic supply of pre-evaluations and final reports of the EQA schemes in virus diagnostics We started already to inform you by that the electronic versions of the pre evaluations and final reports of the respective EQA schemes are available on the INSTAND homepage. Regarding the final reports of the individual EQA schemes the on the electronic availability is sent out in due time before the next run of the corresponding EQA schemes. This includes a table allowing you to directly open and/or save the documents by clicking the respective download button/s. An example is: Virus immunology EQA schemes March/April HIV-1 / HIV-2 As you were informed by postal mailing (as of 12 March 2012) INSTAND urgently needs your address for the purpose of electronic supply of the preevaluations and final reports. Please contact INSTAND directly if you need the printed versions of the final reports. 4 Release of final reports of EQA schemes in virus diagnostics on the INSTAND homepage Each final report of a defined EQA scheme will be released on the INSTAND homepage immediately after completion. The final reports as well as the pre-evaluation of this EQA scheme are available as PDF file on the INSTAND-homepage under EQAS / Reports / Year and Category (Virus immunology / Virus genome detection) in English language ( Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 7 von/of 36

8 Hinweise zu Protokollbögen mit vorgedruckten Angaben Mit dem Ringversuch (RV) fahren wir fort, Vorangaben in Ihren Protokollbögen der RV- Programme in der Virusimmunologie und zum Virusgenom-Nachweis einzudrucken, um Ihnen das Ausfüllen der Protokolle zu erleichtern. In Abhängigkeit, wann Sie das letzte Mal an einem der virologischen RVs teilgenommen haben und welche Angaben uns von Ihnen vorliegen, sind die Vorangaben in den Protokollen unterschiedlich komplett voreingedruckt. Unser Ziel ist, dass Ihre Protokolle für jedes Ringversuchsprogramm folgende Vorangaben komplett voreingedruckt enthalten für: Methode (z.b. ELISA, ChLIA etc.), Testhersteller (Firma X), Testname, Bestellnummer des Tests, Testdurchführung (Name Testautomat oder "manuell"). Bitte kontrollieren Sie die voreingedruckten Angaben in Ihren aktuellen Protokollen. Sollten falsche, inkomplette oder zu viele Angaben eingedruckt sein, bitten wir um Korrektur. In jedem Fall benötigen wir die Angabe der aktuellen Chargen-Nr. des für diesen Ringversuch verwendeten Tests. Mit der Angabe der Chargen-Nr. bestätigen Sie die Richtigkeit der eingedruckten Vorangaben. Vorteile dieses Vorgehens sind: Ein komplettes Neuausfüllen der Protokolle entfällt somit für Sie, vorausgesetzt, der gleiche Test wird von Ihnen wieder benutzt. Die Auswertungen können hinsichtlich des Test- Handelsnamens differenzierter dargestellt werden. Wir danken Ihnen vielmals für Ihre Kooperation und stehen für Rückfragen gerne zur Verfügung. Information on protocol sheets with preprinted statements We continue with the EQA scheme to complete the protocol sheets for the EQA schemes in virus immunology and virus genome detection with preprinted statements in order to facilitate the completion of the protocols. The preprinted statements in the current protocol sheets comprise statements with different completeness depending on (i) which of the last virological EQAS term/s you participated in and (ii) which details you stated before. We aim to provide you with preprinted protocols for each of the EQA schemes containing complete statements concerning: method (e.g. ELISA, ChLIA etc.), manufacturer of test kit (manufacturer X), name of test kit, catalog no. of test kit, test performance (name of automat or "manually"). Please check these preprinted statements in the current protocols for the above mentioned programs as well as all other programs and correct in case of false, incomplete or excessive statements. In any case we urgently ask you to state the current lot-no. of the used test kit for this EQA scheme. By filling in the lot-no. you confirm that the preprinted statements in the protocol are accurate. This approach has the following advantages: Protocol completion from scratch is prevented provided you do not change the test in relation to the recent EQA scheme/s in which you participated before. The final reports can be differentiated in more detail concerning trade name of test kits in the future. Thank you very much for your kind cooperation and do not hesitate to contact us in case you need more information. Seite/page 8 von/of 36 Begleitheft RV Virologie doc

9 VIRUSIMMUNOLOGIE Hinweise zur Virusimmunlogie 1. Probenlagerung Alle Proben sind unmittelbar nach Erhalt im Kühlschrank (+2 C bis +8 C) zu lagern. 2. Vorbereitung von serologischen Proben Alle Proben der Ringversuchsprogramme in der Virusimmunologie sind Seren, die nach der Herstellung eingefroren wurden und erst während des Transports zu Ihnen auftauen. Bei der Probenherstellung wurde äußerste Sorgfalt auf die Serumqualität gelegt. Trotzdem können sich nach dem Auftauen in einigen Proben Lipidaggregate bilden. WICHTIGER HINWEIS! Bitte beachten Sie: Alle Proben müssen unmittelbar nach dem Erhalt bis zur Probenvorbereitung im Kühlschrank (+2 C bis +8 C) aufrecht im Reagenzglasständer gelagert werden. Zur Abtrennung möglicher Lipidaggregate sind die Originalröhrchen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zu zentrifugieren (z.b. in einer Eppendorf- Kühlzentrifuge). Sollte keine Kühlzentrifuge zur Verfügung stehen, ist darauf zu achten, dass die Originalröhrchen vor und nach der Zentrifugation gekühlt sind. Sollte sich nach der Zentrifugation im Originalröhrchen eine Lipidschicht auf dem Serum gebildet haben, pipettieren Sie das Serum bitte vorsichtig unterhalb der Lipidschicht ab. Ggf. ist der Zentrifugationsschritt zu wiederholen. Anschließend ist das Serum für die nachfolgende Testung standardmäßig zu verwenden. Bei der Anwendung von MEIAs beachten Sie bitte auch die jeweilige Empfehlung des Herstellers. 3. Testdurchführung Siehe nachfolgende Anleitungen zum jeweiligen Ringversuchsprogramm. 4. Ergebnisangabe 4.1 Bitte beachten Sie, dass die neue Richtlinie der Bundesärztekammer (RiliBÄK) zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen mit dem speziellen RiliBÄK-Teil B 2 (Qualitative laboratoriumsmedizinische Untersuchungen) am in Kraft getreten ist (mit einer Übergangszeit bis zum ). Siehe dazu den Abschnitt "Allgemeine Hinweise zu den virologischen INSTAND-Ringversuchen", Seite 4. Voraussetzung, dass ein Antikörpertest unter den speziellen Teil B 2 fällt, ist, dass das Ergebnis primär qualitativ als "positiv", "negativ" oder "grenzwertig/ fraglich" angegeben wird. Eine Titerangabe oder Konzentrationsangabe in Einheiten/Volumen kann in Klammern zur Orientierung vermerkt werden. Siehe dazu Homepage der Bundesärztekammer zu "Häufig gestellte Fragen zur Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen ( LaborFAQ pdf). VIRUS IMMUNOLOGY Instructions for Virus Immunology 1. Storage of samples The samples should be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) directly after receipt. 2. Pre-treatment of the serological samples All samples of the EQAS-programs in virus immunology consist of sera, which were frozen after preparation and were allowed to thaw during transport. Although only sera with supreme quality were selected for sample preparation, lipid aggregates may form after thawing and float in some of the samples. IMPORTANT INSTRUCTION! Please note: Prior to testing all samples have to be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) in an upright position (test tube rack). In order to separate possible lipid aggregates it is recommended to centrifuge the samples in their original tubes at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C (e.g., in a refrigerated Eppendorf centrifuge). In case a refrigerated centrifuge is not available, the original sample tubes should be kept refrigerated before and after the centrifugation step. In case a lipid layer has been formed after centrifugation on top of serum, please carefully take out the serum below the lipid layer. A second centrifugation step in the cold may be required. After the centrifugation step the serum can be used for further testing under standard conditions. In case of application of MEIAs please follow the manufacturer's instructions. 3. Test performance See following instructions for test performance for the corresponding EQAS-program. 4. Reporting of results 4.1 Please note that the new Guideline of the German Medical Association (Bundesärztekammer/ RiliBAEK = Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung laboratoriums-medizinischer Untersuchungen) with its section B 2 of the RiliBAEK "qualitative determinations in laboratory medicine = qualitative laboratoriumsmedizinische Untersuchungen" has become effective in Germany since (with a transition period of two years until ). For details please see above "general instructions for the INSTAND EQA schemes in virus diagnostics", page 4. RiliBAEK section B 2 states that reporting a result of a test for virus specific antibody detection primarily qualitatively as "positive", "negative" or "borderline/indeterminate". A statement of titer or antibody concentration (units per volume) can additionally be reported in brackets for orientation. Please see the homepage of the German Medical Association for FAQs / "Häufig gestellte Fragen zur Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen ( LaborFAQ pdf). Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 9 von/of 36

10 4.2 Qualitative Ergebnisse sind anzugeben als "reaktiv/positiv", "negativ" oder "grenzwertig/fraglich". 4.3 Bei Titerangaben und Konzentrationsangaben (z.b. IE/l, E/ml, pg/ml, etc.) bitten wir Sie um Folgendes: Für positive Proben ist der tatsächlich gemessene Antikörpergehalt anzugeben. Angaben mit >= bzw. <= (z.b. >= 1:256 oder <=100 IE/l) werden wie fehlende Titerangaben gewertet. Nur für negative Proben ist es z.b. bei Titerangaben zulässig, den negativen Antikörpernachweis bei der niedrigsten Verdünnungsstufe mit < 1:X anzugeben. Titerangaben und Konzentrationsangaben sind unbedingt mit einer qualitativen Ergebnisangabe zu verknüpfen (s. dazu die jeweiligen Protokollbögen). Bitte beachten Sie, dass positive Ergebnisse des Röteln-Hämagglutinationshemmtestes nach wie vor alleine als Titer angegeben werden. 4.4 Bitte beachten Sie, dass in den Protokollen auch Angaben zu den Rohdaten Ihrer Analysen erbeten werden (z.b. s/co, Index etc.). Zu gegebener Zeit werden diese Angaben in den Auswertungen dargestellt. 4.5 Die gleichzeitige Angabe unterschiedlicher Ergebnisse für ein und dieselbe Untersuchung wird wie ein fehlendes Ergebnis gewertet. Beispiel für den HIV-1-Ringversuch ELISA-Anti-HIV1/HIV2 der Firma X: Die gleichzeitige Ergebnisangabe von "positiv" und "grenzwertig" ist nicht zulässig. 4.6 Zur umfassenden Beurteilung aller in den Labors benutzten Teste ist es hilfreich, dass möglichst alle Ergebnisse bei den Ringversuchen erfasst werden. Finden Sie bei der Benutzung von gleichen Testen verschiedener Hersteller für ein und dieselbe Fragestellung unterschiedliche Ergebnisse, vermerken Sie bitte deutlich, welches Ergebnis bei der Bewertung für Ihre Teilnahmebescheinigung berücksichtigt werden soll. Beispiel für den HIV-1-Ringversuch ELISA-Anti-HIV-1/HIV-2 der Firma X: Ergebnis "positiv"; ELISA-Anti-HIV-1/HIV-2 der Firma Y: Ergebnis "negativ". Sie vermerken, dass für Ihre Bewertung nur das Ergebnis des ELISAs der Firma X zu berücksichtigen ist. 4.7 Alle Proben eines Probensatzes (auch eine ggf. negative Probe) sollen mit allen bei Ihnen üblicherweise verwendeten Methoden untersucht werden [Sonderregelung für Bestätigungstestung von HBsAg-negativen Proben; siehe Ringversuch Hepatitis BI (344)]. Bedenken Sie bitte, dass nur durch diese Vorgehensweise Sensitivitäts- und Spezifitätsprobleme bei einzelnen Methoden zukünftig erfasst werden können. Sollten Sie dabei diskrepante Ergebnisse erhalten, so haben Sie die Möglichkeit, auffällige Resultate so zu markieren, dass sie sich nicht nachteilig bei der Beurteilung für Ihr Zertifikat auswirken. 4.2 Qualitative results should be stated as "reactive/positive", "negative" or "borderline/ indeterminate". 4.3 For statements of titers and concentratitions (e.g. IU/l, U/ml, pg/ml etc.) please note: Positive samples: Please report the actual antibody concentration you have determined. Specifications as >= or <= (e.g. >= 1:256 or <= 100 IU/l) are not accepted and will be evaluated as a missing result. Negative samples: Only for the titer of antibody negative samples the reporting of the lowest dilution step (e.g. < 1:X) will be accepted. Statements of titers and concentrations have to be reported together with the qualitative result (s. respective protocol form). Please note for samples positive for anti-rubella that the result of hemagglutination inhibition tests should exclusively stated as titer. 4.4 Please note that we ask you to report also the raw data of your analyses (e.g. s/co, index etc.). We will start to show these raw data in the final reports in due time. 4.5 The simultaneous reporting of different results for one test will be evaluated as a failure. Example: EQAS for HIV-1 Anti-HIV-1/HIV-2 ELISA of manufacturer X: The simultaneous reporting of a "positive" and "borderline" result is not accepted. 4.6 In order to get a comprehensive evaluation of all tests performed in the different laboratories it is necessary to collect as many results as possible.in case you receive deviating results for a given sample by applying tests from different manufacturers, please indicate which of the results should be taken into account for your certificate. Example: EQAS for HIV-1 Anti-HIV-1/HIV-2 ELISA of manufacturer X: Result "positive"; Anti-HIV-1/HIV-2 ELISA of manufacturer Y: Result "negative". You should indicate that only the result from the analysis performed with the ELISA of the manufacturer X should be taken into account. 4.7 All samples of a sample set (also negative samples) have to be analyzed with all methods routinely used in your laboratory [please note the special recommendation for confirmation testing of HBsAgnegative samples; see program hepatitis BI (344)]. Please keep in mind that only this strategy will allow the detection of problems of sensitivity and specificity for the different tests and methods. In case you get discrepant results by this approach, you can indicate this observation without any disadvantages for your certificate. Seite/page 10 von/of 36 Begleitheft RV Virologie doc

11 4.8 Ergebnisse von Aviditätsbestimmungen können in den Protokollen in einer Extrakategorie für folgende Ringversuchsprogramme eingetragen werden: Rötelnvirus Parvovirus B Cytomegalievirus Epstein Barr Virus Varizella Zoster Virus Herpes simplex Viren Mumpsvirus Masernvirus FSME Virus 4.9 Für das Programm Hepatitis C Virus (346) sollen Ergebnisse von Testen zum isolierten Nachweis von HCV-Antigen in der neuen Protokoll-Kategorie 15 eingetragen werden. Ergebnisse von Testen zum kombinierten Nachweis von Anti-HCV und HCV- Antigen bitte in der Kategorie 10 eingetragen. 5. Anerkennung der Komplementbindungsreaktion (KBR) für die INSTAND-Ringversuche und die Akkreditierung von virusdiagnostischen Laboratorien Die immunologischen Ringversuche der letzten Jahre haben wiederholt gezeigt, dass die KBR im Vergleich zu anderen modernen Methoden zum Virusantikörper-Nachweis eine geringere Sensitivität aufweist. Die KBR ergibt häufig falsch negative Ergebnisse.Die Gemeinsame Diagnostikkommission der Deutschen Vereinigung zur Bekämpfung der Viruskrankheiten (DVV) und Gesellschaft für Virologie (GfV) hat daher entschieden, dass die KBR zum Nachweis von Antikörpern gegen Masernvirus, Mumpsvirus, Rötelnvirus, FSME Virus sowie Polio-, Coxsackie-, Echo- und anderen Enteroviren nicht mehr für die Routinediagnostik empfohlen wird. Seit dem Jahr 2007 werden die Ergebnisse der o. g. Virusantikörper-KBRs nicht mehr bei den INSTAND- Ringversuchen für das Zertifikat und die Teilnahmebescheinigung berücksichtigt. Sollten Sie KBR-Ergebnisse weiter angeben, so werden diese in den Auswertungen nur dokumentiert. Das Sektorkomitee Medizinische Laboratorien der Zentralstelle der Länder für Gesundheitsschutz bei Arzneimitteln und Medizinprodukten (ZLG) hat auf seiner Sitzung am entschieden, dass die o.g. Virusantikörper-KBRs nicht mehr akkreditierbar sind (siehe orten-und-beschluesse-sks-und-haks.html). 4.8 Results of avidity determinations can be reported in extra categories for the following EQA programs: rubella virus parvovirus B cytomegalovirus Epstein Barr virus varicella zoster virus herpes simplex viruses mumps virus measles virus TBE (FSME) virus 4.9 Please note for EQA program hepatitis C virus (346): The results of tests for isolated detection of HCV antigen should be reported in the protocol in category 15. Results of tests for the combined detection of anti-hcv and HCV antigen should be reported in category Acceptance of results of complement fixation tests (CFTs) for INSTAND EQA programs and accreditation of virus diagnostic laboratories The previous INSTAND EQA programs in virus immunology documented a lower sensitivity of CFT in comparison to other modern methods for the detection of virus specific antibodies. The CFT regularly revealed false negative results.the Diagnostic Council of the German Association for the Control of Virus Diseases (Deutsche Vereinigung zur Bekämpfung der Viruskrankheiten, DVV) and the German Society for Virology (Gesellschaft für Virologie, GfV) has therefore decided that CFT is no longer recommended as state-of-the-art method for the detection of antibodies against measles, mumps, rubella, tick borne encephalitis as well as polio-, coxsackie-, echo- and other enteroviruses. Since 2007 results obtained by CFT for the detection of above-mentioned virus specific antibodies will not be accepted anymore for the INSTAND certificates. In case you will report CFT results, these data will only be documented in the EQA program reports. The Sectoral Committee Medical Laboratories of the "Zentralstelle der Länder für Gesundheitsschutz bei Arzneimitteln und Medizinprodukten" (ZLG) decided during its meeting on 25 April 2006 that the CFT for the detection of the above-mentioned virus specific antibodies will not be considered for accreditation of virus diagnostic laboratories anymore (please see orten-und-beschluesse-sks-und-haks.html). Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 11 von/of 36

12 Virusimmunologie HIV-1/HIV-2 (335) Information zur Testdurchführung Proben , , , Vorsichtsmaßnahmen Die Seren sind jeweils negativ für HBV und HCV (in Serologie). Anti-HIV-1 und Anti-HIV-2-positive Seren wurden für 40 min bei 56 C hitzeinaktiviert. Negative Seren wurden nicht hitzeinaktiviert. Alle Seren sind als potentiell infektiös anzusehen und dürfen nur unter Einhaltung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen für experimentelle/diagnostische Zwecke verwendet werden. Probenlagerung Die Proben sind unmittelbar nach Erhalt im Kühlschrank (+2 C bis +8 C) zu lagern. Probenvorbereitung Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Die Proben sind nicht-lyophilisierte Seren (jeweils 0,75 ml) und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Testdurchführung Die Seren sollen mit allen in Ihrem Bereich verwendeten Routinetests zum Nachweis von Anti-HIV-1- und Anti- HIV-2-Tests unter Standardbedingungen untersucht werden. Bei der Bestätigungsdiagnostik sollen alle Proben (auch eine eventuell negative Probe) mit denselben Testen untersucht werden. Das Ergebnis ist qualitativ als "reaktiv/positiv", "negativ" oder "grenzwertig" (bei Westernblot- und Immunfluoreszenztest-Ergebnissen ggf. als "keine diagnostische Aussage möglich") anzugeben. Es werden auch Angaben zu den Rohdaten der Analysen erbeten (z.b. s/co, Index etc.). Zukünftig werden diese Angaben in den Auswertungen dargestellt. Speziell für Bestätigungsteste (41. bzw. 42.: Kombinierte Teste zum Nachweis von Anti-HIV-1 bzw. Anti-HIV-2): Tragen Sie bitte bei 41. nur diejenigen Proteine ein, die nach Herstellerangaben maßgeblich sind für die Interpretation positiv für HIV-1. Tragen Sie bei 42. nur diejenigen Proteine ein, die nach Herstellerangaben maßgeblich sind für die Interpretation positiv für HIV-2. Rücksendung der Protokollbögen Die Protokollbögen bitte zurücksenden bis an: INSTAND e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Abteilung Qualitätssicherung, Postfach , Düsseldorf. Schicken Sie bitte alle Protokollbögen zurück, auch wenn von Ihnen nicht alle Untersuchungen durchgeführt wurden. Bitte behalten Sie eine Kopie Ihrer Protokollbögen. Seite/page 12 von/of 36 Virus Immunology HIV-1/HIV-2 (335) Instructions for test performance Samples , , , Precautions The sera are negative for HBV and HCV (by serology). Sera which are positive for anti-hiv-1 or anti-hiv-2 were heat inactivated for 40 min at 56 C. Negative sera were not heat inactivated. All sera must be considered and treated as potentially infectious materials and must be used only for experimental/diagnostic purpose following adequate precautions. Storage of samples The samples should be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) directly after receipt. Pre-treatment of the samples Please note the "General Instructions/Virus Immunology". The samples are non-lyophilized sera (0.75 ml each) and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. Test performance The sera should be analyzed for anti-hiv-1 and anti- HIV-2 with your routine tests under standard conditions. For confirmation testing all samples (also negative samples) should be analyzed by the same tests. The result should be reported as "reactive/positive", "negative" or "borderline" (for western blot and immunofluorescence test if necessary as "indeterminate"). Please note that we ask you to report also the raw data of your analyses (e.g. s/co, index etc.). We will start to show these raw data in the final reports in due time. Special information for confirmation tests (41. and 42., respectively: combined tests for the detection of anti-hiv-1 and anti-hiv 2, respectively): Please state for 41. only those proteins giving evidence for the interpretation positive for HIV-1 according to the manufacturer s instruction. Please state for 42. only those proteins giving evidence for the interpretation positive for HIV-2 according to the manufacturer s instruction. Return of the protocol sheets Please return the protocol sheets till to: INSTAND reg. ass., Society for Research Promotion of Quality Assurance in Medical Laboratories reg. ass., Department of Quality Control, P.O. Box , D Duesseldorf, Germany. Please return the complete sets of your protocol sheets, even if some analyzes were not performed. Please keep copies of your protocol sheets. Begleitheft RV Virologie doc

13 Virusimmunologie HIV-1 p24 Antigen (337) Information zur Testdurchführung Proben , Vorsichtsmaßnahmen Bei den Proben handelt es sich um Seren, die jeweils negativ sind für HIV, HBV und HCV (in Serologie) und mit gereinigtem HIV-1 (40 min bei 56 C hitzeinaktiviert) gespikt wurden. Negative Seren wurden nicht hitzeinaktiviert. Alle Seren sind als potentiell infektiös anzusehen; sie dürfen nur unter Einhaltung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen für experimentelle/diagnostische Zwecke verwendet werden. Probenlagerung Die Proben sind unmittelbar nach Erhalt im Kühlschrank (+2 C bis +8 C) zu lagern. Probenvorbereitung Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Die Proben sind nicht-lyophilisierte Seren (jeweils 0,75 ml) und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Testdurchführung Die Seren sind unter Standardbedingungen des jeweiligen Tests auf p24 Antigen zu untersuchen. Qualitative Ergebnisse sind anzugeben als "postiv", "negativ" oder "grenzwertig". Ergebnisse quantitativer Bestimmungen sind in Pikogramm/ml (pg/ml) erbeten. Es werden auch Angaben zu den Rohdaten der Analysen erbeten (z.b. s/co, Index etc.). Zukünftig werden diese Angaben in den Auswertungen dargestellt. Achtung! Bitte beachten Sie, dass bei Verwendung von Suchtesten nur solche Teste geeignet sind, die zusätzlich zu Anti-HIV-1 und Anti-HIV-2 auch das p24-antigen nachweisen (4. Generationstest). Rücksendung der Protokollbögen Die Protokollbögen bitte zurücksenden bis an: INSTAND e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Abteilung Qualitätssicherung, Postfach , Düsseldorf. Schicken Sie bitte alle Protokollbögen zurück, auch wenn von Ihnen nicht alle Untersuchungen durchgeführt wurden. Bitte behalten Sie eine Kopie Ihrer Protokollbögen. Virus Immunology HIV-1 p24 Antigen (337) Instructions for test performance Samples , Precautions The samples contain sera negative for HIV, HBV and HCV (by serology) which were spiked with purified HIV-1 (heat inactivated for 40 min at 56 C). Negative sera were not heat inactivated. All sera must be considered and treated as potentially infectious materials and must be used only for experimental/diagnostic purpose following adequate precautions. Storage of samples The samples should be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) directly after receipt. Pre-treatment of the samples Please note the "General Instructions/Virus Immunology". The samples are non-lyophilized sera (0.75 ml each) and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. Test performance The sera should be analyzed for p24 antigen applying all tests routinely used. Qualitative results should be stated as "positive", "negative" or "borderline". Test results of quantitative analyses should be stated in picogram (pg/ml). Please note that we ask you to report also the raw data of your analyses (e.g. s/co, index etc.). We will start to show these raw data in the final reports in due time. Attention! In case you use screening tests, please be aware that only 4th generation tests detecting p24 antigen in addition to anti-hiv-1 and anti-hiv-2 are suitable for this EQA scheme. Return of the protocol sheets Please return the protocol sheets till to: INSTAND reg. ass., Society for Research Promotion of Quality Assurance in Medical Laboratories reg. ass., Department of Quality Control, P.O. Box , D Duesseldorf, Germany. Please return the complete sets of your protocol sheets, even if some analyzes were not performed. Please keep copies of your protocol sheets. Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 13 von/of 36

14 Virusimmunologie Hepatitis A Virus (343) Information zur Testdurchführung Proben , : für Anti-HAV , : für Anti-HAV-IgM Vorsichtsmaßnahmen Die Seren sind jeweils negativ für HIV, HBV und HCV (in Serologie). Die Proben sind nicht hitzeinaktiviert und als potentiell infektiös anzusehen. Proben mit virusspezifischem IgM sind potentiell infektiös mit dem entsprechenden Virus. Alle Proben dürfen nur unter Einhaltung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen für experimentelle/diagnostische Zwecke verwendet werden. Probenlagerung Die Proben sind unmittelbar nach Erhalt im Kühlschrank (+2 C bis +8 C) zu lagern. Probenvorbereitung Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Die Proben sind nicht-lyophilisierte Seren (jeweils 0,5 ml) und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Testdurchführung Beide Proben eines Probenpaares (auch eine eventuell negative Probe) sind mit denselben Testen zu untersuchen: die Proben und auf Anti-HAV, die Proben und auf Anti-HAV-IgM. Die Proben sind unter den Standardbedingungen des jeweiligen Testes qualitativ zu untersuchen, d.h. nicht zu titrieren. Das Ergebnis ist als "positiv", "negativ" oder "grenzwertig"/"keine diagnostische Aussage möglich" anzugeben. Es werden auch Angaben zu den Rohdaten der Analysen erbeten (z.b. s/co, Index etc.). Zukünftig werden diese Angaben in den Auswertungen dargestellt. Rücksendung der Protokollbögen Die Protokollbögen bitte zurücksenden bis an: INSTAND e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Abteilung Qualitätssicherung, Postfach , Düsseldorf. Schicken Sie bitte alle Protokollbögen zurück, auch wenn von Ihnen nicht alle Untersuchungen durchgeführt wurden. Bitte behalten Sie eine Kopie Ihrer Protokollbögen. Virus Immunology Hepatitis A Virus (343) Instructions for test performance Samples , : for anti-hav , : for anti-hav-igm Precautions The sera are negative for HIV, HBV and HCV (by serology). The samples are not heat inactivated and must be considered and treated as potentially infectious. Samples positive for virus specific IgM are potentially infectious for the corresponding virus. All sera must be used only for experimental/diagnostic purpose following adequate precautions. Storage of samples The samples should be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) directly after receipt. Pre-treatment of the samples Please note the "General Instructions/Virus Immunology". The samples are non-lyophilized sera (0.5 ml each) and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. Test performance Both samples of a sample pair (even a negative sample) have to be analyzed using the same test: the samples and for anti-hav, the samples and for anti-hav-igm. Qualitative analyses should be performed for all samples under standard conditions. No titration is needed. The results should be reported as "positive", "negative", or "borderline"/"indeterminate". Please note that we ask you to report also the raw data of your analyses (e.g. s/co, index etc.). We will start to show these raw data in the final reports in due time. Return of the protocol sheets Please return the protocol sheets till to: INSTAND reg. ass., Society for Research Promotion of Quality Assurance in Medical Laboratories reg. ass., Department of Quality Control, P.O. Box , D Duesseldorf, Germany. Please return the complete sets of your protocol sheets, even if some analyzes were not performed. Please keep copies of your protocol sheets. Seite/page 14 von/of 36 Begleitheft RV Virologie doc

15 Virusimmunologie Hepatitis B Virus (I) (344) Information zur Testdurchführung Virus Immunology Hepatitis B Virus (I) (344) Instructions for test performance Proben , , , : für HBsAg , , , : für Anti-HBs , , , : für Anti-HBc Vorsichtsmaßnahmen Die Proben , , und sowie die Proben , , und sind potentiell HBsAg-positiv und damit potentiell infektiös für HBV; die Proben , , und sind HBsAg-negativ. Alle Seren sind jeweils negativ für HIV und HCV (in Serologie). Alle Seren sind nicht hitzeinaktiviert und als potentiell infektiös anzusehen; sie dürfen nur unter Einhaltung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen für experimentelle/diagnostische Zwecke verwendet werden. Probenlagerung Die Proben sind unmittelbar nach Erhalt im Kühlschrank (+2 C bis +8 C) zu lagern. Probenvorbereitung und Testdurchführung Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Alle Proben eines Probensatzes (auch eine eventuell negative Probe) sollen mit denselben Testen untersucht werden. 10. Untersuchung auf HBsAg (qualitativ u. quantitativ) NEU: Probenvolumen 1,0 ml Bei den Proben , , und (jeweils 1,0 ml) handelt es sich um nicht-lyophilisierte Seren und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Alle Proben sind mit den in Ihrem Labor verwendeten Routinetesten unter den Standardbedingungen des jeweiligen Testes zu untersuchen. Das qualitative Ergebnis ist als "reaktiv"/ positiv, "negativ" oder "grenzwertig"/"keine diagnostische Aussage möglich" anzugeben. Das quantitative Ergebnis ist in Internationalen Einheiten/ml (IE/ml) anzugeben. Ein quantitatives Ergebnis ist mit einem der o.g. qualitativen Angaben zu verknüpfen. Es werden auch Angaben zu den Rohdaten der Analysen erbeten (z.b. s/co, Index etc.). Zukünftig werden diese Angaben in den Auswertungen dargestellt. 15. Bestätigungsteste für HBsAg Reaktive Ergebnisse sollen in einem Bestätigungstest überprüft werden. Auf der Basis Ihrer Bestätigungstest-Ergebnisse geben Sie bitte unter Endgültiges Resultat eine endgültige Probenbewertung als positiv, negativ oder fraglich an. Proben, die im primären Screening-Test HBsAgnegativ sind, sollen nicht im Bestätigungstest untersucht werden. Samples , , , : for HBsAg , , , : for anti-hbs , , , : for anti-hbc Precautions The samples , , and and the samples , , and are potentially HBsAg positive, i.e. potentially infectious for HBV; the samples , , and are HBsAg negative. All sera are negative for HIV and HCV (by serology). The sera are not heat inactivated. All sera must be considered and treated as potentially infectious materials and must be used only for experimental/diagnostic purpose following adequate precautions. Storage of samples The samples have to be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) directly after receipt. Pre-treatment of the samples and test performance Please note the "General Instructions/Virus Immunology". All samples of a sample set (even a negative sample) should be analyzed applying the same tests. 10. Testing for HBsAg (qualitative and quantitative) NEW: Sample volume 1.0 ml The samples , , and (1.0 ml each) are non-lyophilized sera and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. Qualitative analyses should be performed for all samples with all tests routinely used in your laboratory under standard conditions of the test kit. Qualitative results have to be reported as "reactive"/ "positive", "negative", or "borderline"/"indeterminate". Quantitative results have to be reported in Intenational Units/ml (IU/ml) and have to be interpreted as qualitative result as mentioned above. Please note that we ask you to report also the raw data of your analyses (e.g. s/co, index etc.). We will start to show these raw data in the final reports in due time. 15. Confirmation tests for HBsAg HBsAg reactive results should be confirmed in a confirmation test. In this case please fill in your final result into the section "Final results" which should be reported as "positive", "negative" or "borderline". Samples which are HBsAg negative in the primary screening test should not be analyzed by confirmation tests. Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 15 von/of 36

16 20. Untersuchung auf Anti-HBs (qualitativ / quantitativ) Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Die Proben , , und sind nicht-lyophilisierte Seren (jeweils 0,75 ml) und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Alle Seren sind unter Standardbedingungen der jeweiligen Tests auf Anti-HBs zu untersuchen (gilt auch für negative Proben). Das Ergebnis ist qualitativ als "positiv" oder "negativ" anzugeben. Quantitative Angaben für Anti-HBs in Internationalen Einheiten/Liter (IE/l) sind unbedingt mit einer qualitativen Angabe zu veknüpfen. Quantitative Ergebnisse mit ">" können für positive Proben nicht akzeptiert werden. Bitte beachten Sie die jeweils gültigen "Empfehlungen der Ständigen Impfkommission (STIKO) am Robert Koch- Institut", speziell die Angaben zur Hepatitis B- Immunprophylaxe bei Exposition mit HBV-haltigem Material, z.b. nach Nadelstich ( /Ausgaben/30_12.pdf? blob=publicationfile ). 30. Qualitative Untersuchung auf Anti-HBc Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Die Proben , , und sind nicht-lyophilisierte Seren (jeweils 0,75 ml) und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Alle Proben sind mit den in Ihrem Labor verwendeten Routinetesten unter den Standardbedingungen des jeweiligen Testes qualitativ zu untersuchen, d.h. nicht zu titrieren. Das Ergebnis ist als "positiv, "negativ" oder "grenzwertig"/"keine diagnostische Aussage möglich" anzugeben. Es werden auch Angaben zu den Rohdaten der Analysen erbeten (z.b. s/co, Index etc.). Zukünftig werden diese Angaben in den Auswertungen dargestellt. Rücksendung der Protokollbögen Die Protokollbögen bitte zurücksenden bis an: INSTAND e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Abteilung Qualitätssicherung, Postfach , Düsseldorf. Schicken Sie bitte alle Protokollbögen zurück, auch wenn von Ihnen nicht alle Untersuchungen durchgeführt wurden. Bitte behalten Sie eine Kopie Ihrer Protokollbögen. 20. Testing for anti-hbs (qualitative and quantitative) Please note the "General Instructions/Virus Immunology". The samples , , and are non-lyophilized sera (0.75 ml each) and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. All sera should be analyzed for anti-hbs applying all tests routinely used in your laboratory (even for a negative sample). The results have to be reported as "positive" or "negative". Quantitative results for anti-hbs should be reported in International Units per liter (IU/l) and have to be linked with a qualitative result. Please note: quantitative results with ">" are not accepted for positive samples. Please note the updated recommendation of Robert Koch-Institute "Empfehlungen der Ständigen Impfkommission (STIKO) am Robert Koch-Institut", especially the indication for hepatitis B immune prophylaxis after exposure with HBV contaminated materials, e.g. after needle stick injury ( ommandations/stiko_recommendations_2011_en.pdf? blob=publicationfile ). 30. Qualitative testing for anti-hbc Please note the "General Instructions/Virus Immunology". The samples , , and are non-lyophilized sera (0.75 ml each) and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. Qualitative analyses should be performed for all samples with all tests routinely used in your laboratory under standard conditions of the test kit. No titration is needed. The results have to be reported as "positive", "negative", or "borderline"/"indeterminate". Please note that we ask you to report also the raw data of your analyses (e.g. s/co, index etc.). We will start to show these raw data in the final reports in due time. Return of the protocol sheets Please return the protocol sheets till to: INSTAND reg. ass., Society for Research Promotion of Quality Assurance in Medical Laboratories reg. ass., Department of Quality Control, P.O. Box , D Duesseldorf, Germany. Please return the complete sets of your protocol sheets, even if some analyzes were not performed. Please keep copies of your protocol sheets. Seite/page 16 von/of 36 Begleitheft RV Virologie doc

17 Virusimmunologie Hepatitis B Virus (II) (345) Information zur Testdurchführung Proben , : für Anti-HBc-IgM , : für HBeAg , : für Anti-HBe Vorsichtsmaßnahmen Die Seren sind jeweils potentiell HBsAg-positiv und damit potentiell infektiös mit HBV, jedoch jeweils negativ für HIV und HCV (in Serologie). Die Seren sind nicht hitzeinaktiviert und als potentiell infektiös anzusehen; sie dürfen nur unter Einhaltung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen für experimentelle/diagnostische Zwecke verwendet werden. Probenlagerung Die Proben sind unmittelbar nach Erhalt im Kühlschrank (+2 C bis +8 C) zu lagern. Probenvorbereitung Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Alle Proben sind nicht-lyophilisierte Seren (jeweils 0,5 ml) und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Testdurchführung Beide Proben eines Probenpaares (auch eine eventuell negative Probe) sollen mit denselben Testen untersucht werden: die Proben und auf Anti-HBc-IgM (0,5 ml), die Proben und auf HBeAg (0,5 ml), die Proben und auf Anti-HBe (0,5 ml). Die Proben sind unter den Standardbedingungen des jeweiligen Testes qualitativ zu untersuchen, d.h. nicht zu titrieren. Das Ergebnis ist als "positiv", "negativ" oder "grenzwertig"/"keine diagnostische Aussage möglich" anzugeben. Es werden auch Angaben zu den Rohdaten der Analysen erbeten (z.b. s/co, Index etc.). Zukünftig werden diese Angaben in den Auswertungen dargestellt. Rücksendung der Protokollbögen Die Protokollbögen bitte zurücksenden bis an: INSTAND e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Abteilung Qualitätssicherung, Postfach , Düsseldorf. Schicken Sie bitte alle Protokollbögen zurück, auch wenn von Ihnen nicht alle Untersuchungen durchgeführt wurden. Bitte behalten Sie eine Kopie Ihrer Protokollbögen. Virus Immunology Hepatitis B Virus (II) (345) Instructions for test performance Samples , : for anti-hbc-igm , : for HBeAg , : for anti-hbe Precautions The sera are potentially positive for HBsAg, i.e. potentially infectious for HBV, but negative for HIV and HCV (by serology), respectively. The samples are not heat inactivated. All sera must be considered and treated as potentially infectious material and must be used only for experimental/diagnostic purpose following adequate precautions. Storage of samples The samples should be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) directly after receipt. Pre-treatment of the samples Please note the "General Instructions/Virus Immunology". The samples are non-lyophilized sera (0.5 ml each) and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. Test performance Both samples of a sample pair (even a negative sample) should be analyzed using the same test: the samples and for anti-hbc-igm (0.5 ml), the samples and for HBeAg (0.5 ml), the samples and for anti-hbe (0.5 ml). Qualitative analyzes should be performed for all samples under standard conditions. No titration is needed. The results should be reported as "positive", "negative", or "borderline"/"indeterminate". Please note that we ask you to report also the raw data of your analyses (e.g. s/co, index etc.). We will start to show these raw data in the final reports in due time. Return of the protocol sheets Please return the protocol sheets till to: INSTAND reg. ass., Society for Research Promotion of Quality Assurance in Medical Laboratories reg. ass., Department of Quality Control, P.O. Box , D Duesseldorf, Germany. Please return the complete sets of your protocol sheets, even if some analyzes were not performed. Please keep copies of your protocol sheets. Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 17 von/of 36

18 Virusimmunologie Hepatitis C Virus (346) Information zur Testdurchführung Proben , , , Vorsichtsmaßnahmen Die Seren sind jeweils negativ für HIV und HBV (in Serologie). Die Seren sind nicht hitzeinaktiviert und als potentiell infektiös mit HCV anzusehen; sie dürfen nur unter Einhaltung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen für experimentelle/diagnostische Zwecke verwendet werden. Probenlagerung Die Proben sind unmittelbar nach Erhalt im Kühlschrank (+2 C bis +8 C) zu lagern. Probenvorbereitung Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Die Proben sind nicht-lyophilisierte Seren (jeweils 0,5 ml) und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Testdurchführung Kategorie 10. Suchteste zum Nachweis von Anti-HCV bzw. kombinierten Nachweis von Anti-HCV und HCV-Ag Die Proben sind auf Antikörper gegen Hepatitis C Virus (Anti-HCV) bzw. in kombinierten Testen auf Anti-HCV und HCV-Ag unter den Standardbedingungen des jeweiligen Testes qualitativ zu untersuchen (nicht titrieren). Dabei sollen alle Proben (auch eine eventuell negative Probe) mit denselben Testen untersucht werden. Es werden auch Angaben zu den Rohdaten der Analysen erbeten (z.b. s/co, Index etc.). Zukünftig werden diese Angaben in den Auswertungen dargestellt. Kategorie 15. Teste zum isolierten Nachweis von HCV-Antigen Die Proben sind auf HCV-Ag unter den Standardbedingungen des jeweiligen Testes qualitativ zu untersuchen Kategorie 20. Ergänzungsteste zum Nachweis von Anti-HCV Bei Ergänzungstesten sollen alle Proben (auch eine eventuell negative Probe) mit denselben Testen untersucht werden. Das Ergebnis ist als "reaktiv/positiv", "negativ" oder "grenzwertig"/"keine diagnostische Aussage möglich" anzugeben. Rücksendung der Protokollbögen Die Protokollbögen bitte zurücksenden bis an: INSTAND e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Abteilung Qualitätssicherung, Postfach , Düsseldorf. Schicken Sie bitte alle Protokollbögen zurück, auch wenn von Ihnen nicht alle Untersuchungen durchgeführt wurden. Bitte behalten Sie eine Kopie Ihrer Protokollbögen. Seite/page 18 von/of 36 Virus Immunology Hepatitis C Virus (346) Instructions for test performance Samples , , , Precautions The sera are negative for HIV and HBV (by serology). The samples are not heat inactivated. All sera must be considered and treated as potentially infectious for HCV and must be used only for experimental/diagnostic purpose following adequate precautions. Storage of samples The samples should be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) directly after receipt. Pre-treatment of the samples Please note the "General Instructions/Virus Immunology". The samples are non-lyophilized sera (0.5 ml each) and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. Test performance Category 10. Screening tests for the detection of anti-hcv and combined detection of anti-hcv and HCV antigen The samples should be analyzed qualitatively in tests for the detection of antibodies against hepatitis C virus (anti- HCV) or tests for the combined detection of anti-hcv and HCV antigen under standard conditions. No titration is needed. All samples (even a negative sample) should be analyzed using the same test kit. Please note that we ask you to report also the raw data of your analyses (e.g. s/co, index etc.). We will start to show these raw data in the final reports in due time. Category 15. Tests for the isolated detection of HCV antigen The samples should be analyzed qualitatively in tests for the isolated detection of HCV antigen under standard conditions. Category 20. Complementary tests for the detection of anti-hcv Complementary testing all samples (also negative samples) should be performed by the same tests. The results should be reported as "reactive/positive", "negative", or "borderline"/"indeterminate". Return of the protocol sheets Please return the protocol sheets till to: INSTAND reg. ass., Society for Research Promotion of Quality Assurance in Medical Laboratories reg. ass., Department of Quality Control, P.O. Box , D Duesseldorf, Germany. Please return the complete sets of your protocol sheets, even if some analyzes were not performed. Please keep copies of your protocol sheets. Begleitheft RV Virologie doc

19 Virusimmunologie Dengueviren (350) Information zur Testdurchführung Proben , , , Vorsichtsmaßnahmen Die Seren sind nicht hitzeinaktiviert und als potentiell infektiös anzusehen; sie dürfen nur unter Einhaltung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen für experimentelle/ diagnostische Zwecke verwendet werden. Probenlagerung Die Proben sind unmittelbar nach Erhalt im Kühlschrank (+2 bis +8 C) zu lagern. Probenvorbereitung NEU: Probenvolumen 0,3 ml Die Proben sind nicht-lyophilisierte Seren (jeweils 0,3 ml) und müssen vor der Testdurchführung bei mindestens RCF (Relative Centrifugal Force = relative Zentrifugalkraft) für 10 min bei +4 C bis +8 C zentrifugiert werden. Bitte beachten Sie unbedingt die "Allgemeinen Hinweise/Virusimmunologie". Testdurchführung Kategorie 10. Teste zum Nachweis von Anti-Dengue-IgG und Kategorie 20. Teste zum Nachweis von Anti-Dengue-IgM Die Proben sind auf Antikörper gegen Denguevirus der IgG-Klasse (Anti-Dengue-IgG) bzw. IgM-Klasse (anti-igm) unter den Standardbedingungen des jeweiligen Testes qualitativ zu untersuchen. ACHTUNG: Bei Verwendung eines Rapid Tests zum gleichzeitigen Nachweis von Anti-Dengue-IgG und Anti-Dengue-IgM wird gebeten, das Ergebnis für Anti-Dengue-IgG in Kategorie 10 und das Ergebnis für Anti-Dengue-IgM in Kategorie 20 einzutragen. Alle Proben (auch eine eventuell negative Probe) sollten mit denselben Testen untersucht werden. Das Ergebnis ist als "positiv", "negativ" oder "grenzwertig"/"keine diagnostische Aussage möglich" anzugeben. Titerangaben, quantitative Angaben in Einheiten/Volumen sowie Angaben von Rohdaten in S/CO, Index etc. (s. Protokollvorgaben) sind gesondert anzugeben. Zukünftig werden die Rohdaten in den Auswertungen dargestellt. Virus Immunology Dengue viruses (350) Instructions for test performance Samples , , , Precautions The samples are not heat inactivated. All sera must be considered and treated as potentially infectious material and must be used only for experimental/diagnostic purpose following adequate precautions. Storage of samples The samples should be stored in a refrigerator (+2 C to +8 C) directly after receipt. Pre-treatment of the samples NEW: Sample volume 0.3 ml The samples are non-lyophilized sera (0.3 ml each) and have to be centrifuged at least at 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force) for 10 min between +4 C and +8 C. Please note the "General Instructions/Virus Immunology". Test performance Category 10. Testing for anti-dengue-igg and Category 20. Testing for anti-dengue-igm The samples should be analyzed for IgG and IgM antibodies against dengue viruses (anti-dengue-igg and anti-dengue-igm, respectively) applying all tests routinely used in your laboratory. ATTENTION: In case you apply a test for simultaneous detection of anti-dengue-igg and anti-dengue-igm please state the results for anti-dengue-igg in category 10 and the results for anti-dengue-igm in category 20. All samples (even a negative sample) should be analyzed applying the same tests. The results have to be reported as "positive", "negative", or "borderline"/ "indeterminate". Titers, quantitative results (Units/volume) as well as raw data of your analyses as S/CO, Index etc. should be reported separately (see specifications in the protocol). We will start to show these raw data in the final reports in due time. Kategorie 30. Teste zum Nachweis von Dengue-NS1-Antigen Die Proben sind auf das Denguevirus-Antigen NS1 unter den Standardbedingungen des jeweiligen Testes qualitativ zu untersuchen. Dabei sollen alle Proben (auch eine eventuell negative Probe) mit denselben Testen untersucht werden. Das Ergebnis ist als "positiv", "negativ" oder "grenzwertig"/"keine diagnostische Aussage möglich" anzugeben. Category 30. Testing for dengue-ns1 antigen The samples should be analyzed for dengue virus antigen NS1 applying all test routinely used in your laboratory. All samples (even a negative sample) should be analyzed applying the same tests. The results have to be reported as "positive", "negative", or "borderline"/ "indeterminate". Begleitheft RV Virologie doc Seite/page 19 von/of 36

20 Titerangaben, quantitative Angaben in Einheiten/Volumen sowie Angaben von Rohdaten in S/CO, Index etc. (s. Protokollvorgaben) sind gesondert anzugeben. Zukünftig werden die Rohdaten in den Auswertungen dargestellt. Katergorie 199. Klinische Bewertung der untersuchten Proben Bitte diffenzieren Sie, ob die entsprechende Probe typisch ist für: - eine akute/sehr frische Infektion (immunologische Parameter sind: NS1-Ag pos., Anti-Dengue-IgG neg., Anti-Dengue-IgM neg. oder NS1-Ag pos., Anti-Dengue-IgG neg., Anti-Dengue-IgM pos. oder NS1-Ag pos., Anti-Dengue-IgG pos., Anti-Dengue-IgM pos.) - eine kürzliche Infektion (immunologische Parameter sind: NS1-Ag neg., Anti-Dengue-IgG pos., Anti-Dengue-IgM pos.) - eine alte Infektion (immunologische Parameter sind: NS1-Ag neg., Anti-Dengue-IgG pos., Anti-Dengue-IgM neg.) - einen negativen Infektionsstatus (immunologische Parameter sind: NS1-Ag neg., Anti-Dengue-IgG neg., Anti-Dengue-IgM neg.) Bitte beachten Sie: Ohne die Durchführung eines NS1-Antigen-Tests kann selbst bei Anwendung von Testen zum Nachweis von Denguevirus-spezifischem IgG und IgM keine Aussage über eine akute/sehr frische Infektion getroffen werden. ACHTUNG: Bitte berücksichtigen Sie für die klinische Bewertung die nachfolgende Abbildung 1 zum zeitlichen Verlauf der diagnostischen Parameter bei einer primären Denguevirus-Infektion. Abbildung 1: Diagnostische Parameter bei einer primären Denguevirus-Infektion (Schmidt-Chanasit) Titers, quantitative results (Units/volume) as well as raw data of your analyses as S/CO, Index etc. should be reported separately (see specifications in the protocol). We will start to show these raw data in the final reports in due time. Category 199. Clinical interpretation of the tested samples Please differentiate, if the corresponding sample's immunological parameters are typical for: - an acute infection (immunological parameters are: NS1-Ag pos., anti-dengue-igg neg., anti-dengue-igm neg. or NS1-Ag pos., anti-dengue-igg neg., anti-dengue-igm pos. or NS1-Ag pos., anti-dengue-igg pos., anti-dengue-igm pos.) - a recent infection (immunological parameters are: NS1-Ag neg., anti-dengue-igg pos., anti-dengue-igm pos. - a past infection (immunological parameters are: NS1-Ag neg., anti-dengue-igg pos., anti-dengue-igm neg. - a negative status of infection (immunological parameters are: NS1-Ag neg., anti-dengue-igg neg., anti-dengue-igm neg. Please note: A statement on an acute dengue virus infection must be based on the presence of NS1 antigen detected by a reliable test. Applying only tests for the detection of antidengue-igg and anti-dengue-igm without testing on NS1 antigen does not allow a statement on an acute dengue virus infection. PLEASE NOTE and consider figure 1 with the course of the diagnostic parameters of a primary dengue virus infection for the clinical interpretation. Figure 1: Diagnostic parameters of a primary dengue virus infection (Schmidt-Chanasit) Rücksendung des Protokolls Das Protokoll bitte zurücksenden bis an: INSTAND e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Abteilung Qualitätssicherung, Postfach , Düsseldorf. Schicken Sie bitte alle Protokollseiten zurück, auch wenn von Ihnen nicht alle Untersuchungen durchgeführt wurden. Bitte behalten Sie eine Kopie Ihrer Protokollseite. Seite/page 20 von/of 36 Return of the protocol sheets Please return the protocol till to: INSTAND reg. ass., Society for Research Promotion of Quality Assurance in Medical Laboratories reg. ass., Department of Quality Control, P.O. Box , D Duesseldorf, Germany. Please return the complete sets of your protocol sheets, even if some analyzes were not performed. Please keep copies of your protocol sheets. Begleitheft RV Virologie doc