Auswirkungen von Antimykotika auf die T-Zell-vermittelte Immunantwort im Tiermodell
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- Benedikt Kraus
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1 Aus der III. Medizinischen Klinik und Poliklinik (Hämatologie, Internistische Onkologie und Pneumologie) der Universitätsmedizin der Johannes Gutenberg-Universität Mainz Auswirkungen von Antimykotika auf die T-Zell-vermittelte Immunantwort im Tiermodell Inauguraldissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Medizin der Universitätsmedizin der Johannes Gutenberg-Universität Mainz vorgelegt von Jana Kober aus Sangerhausen Mainz, 2015
2 Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis... 1 Abkürzungsverzeichnis...5 Abbildungsverzeichnis...7 Tabellenverzeichnis Einleitung Invasive Pilzinfektionen und die allogene hämatopoetische Stammzelltransplantation Ziel der Arbeit Literaturdiskussion Invasive Pilzinfektionen Humanpathogene Pilze Invasive Pilzinfektionen im Rahmen der allogenen hämatopoetischen Stammzelltransplantation Kandidose und Aspergillose bei HSCT-Patienten Therapie invasiver Pilzinfektionen mit Antimykotika Immunmodulatorische Effekte von Antimykotika Grundlagen der Hämatopoese und des Immunsystems Gesunde Blutbildung Angeborene und adaptive Immunität T-Lymphozyten Maligne hämatologische Neoplasien Allogene hämatopoetische Stammzelltransplantation Prinzip der allogenen hämatopoetischen Stammzelltransplantation Graft-versus-Host Disease Graft-versus-Leukemia Effekt Immunrekonstitution Material Software Geräte Verbrauchsmaterialien Glaswaren... 41
3 3.5 Chemikalien, Isotope und Reagenzien Zytokine Kit-Systeme MACS MicroBeads und Zubehör FACS Antikörper EliSpot Antikörper Zellkulturmedien und Zusätze Zellkulturmedium für murine Zellen Antimykotika Posaconazol Voriconazol Allgemeinanästhetische Lösung SIINFEKL- Aldara -Creme FACS Pufferlösung FACS Antikörperlösung für den in vivo Zytotoxizitätsassay CFSE-Lösung Murine Zellen CD8+ T-Zellen aus C57BL/6-Mäusen Milzzellen aus F1 -Mäusen Milzzellen aus C57BL/6-Mäusen Tumorzelllinie E.G7-OVA Thymomzelllinie Methoden Zellkultur Protokoll der murinen Mixed lymphocyte reaction Mechanische Zellseparation und Erythrozytenlyse MACS Zellseparation Bestimmung der T-Lymphozyten Proliferation in vitro Zellzählung und Vitalitätstest mit Trypanblau H-Thymidin Proliferationsassay Bestimmung der T-Lymphozyten Funktion in vitro Interferon-γ Enzyme-linked immunospot technique Assay... 52
4 4.4 Applikation von Posaconazol in vivo Protokoll Gewichtsadaptierte Applikation von Posaconazol in die Maus Versuchstiere Serumgewinnung aus murinem Vollblut Hochdruckflüssigkeitschromatografie-Massenspektrometrie In vivo Durchflusszytometrie und Tumorversuch Protokoll Versuchstiere Transkutane Immunisierung mit SIINFEKL SIINFEKL-T etramerfárbung In vivo Zytotoxizitätsassay Tumormodell Statistische Auswertung der Ergebnisse Ergebnisse Auswirkungen von Antimykotika auf murine T-Lymphozyten in vitro Einführung in die murine Zellkultur Proliferation und Funktion von haploreaktiven CD4+ T-Lymphozyten in vitro Proliferation und Funktion von haploreaktiven CD8+ T-Lymphozyten in vitro Dosis-Serumspiegel Beziehung von Posaconazol in vivo Auswirkungen von Posaconazol auf murine CD8+ T-Lymphozyten in vivo Einführung in die murinen in vivo Versuche Relativer Anteil SIINFEKL-spezifischer CD8+ T-Zellen in vivo nach TCI Mittlere spezifische Lyse SIINFEKL-spezifischer CD8+ T-Zellen Auswirkungen von Posaconazol auf die Tumorabwehr SIINFEKL-spezifischer CD8+ T-Zellen Diskussion In vitro Versuche Auswirkungen von Antimykotika auf humane und murine T-Zellen in vitro Gründe für die immunmodulatorischen Antimykotika-Effekte in vitro In vivo Versuche Etablierung relevanter Posaconazol-Serumspiegel in vivo...86
5 6.2.2 Diskrepanz zwischen Antimykotika-Effekten in vitro und in vivo Bedeutung von Antimykotika-Effekten im Gesamtkontext der allogenen HSCT Ausblick Zusammenfassung Literaturverzeichnis Danksagung Lebenslauf
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