DMD Screen und Ident Kits. effizienter und sicherer Nachweis von bierschädigenden Bakterien in nur einer Stunde

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1 DMD Screen und Ident Kits effizienter und sicherer Nachweis von bierschädigenden Bakterien in nur einer Stunde 1

2 Hefe Bier klar oder hefe-trüb Angereicherte Probe PCR Reaktion Thermal Cycling Analyse Abstrichtupferproben Hygiene Monitoring Anreicherung: h Analysezeit: 60 min Innovative Technologie ohne Expertenwissen oder teures Equipment DMD Screen und Ident Kits effizienter und sicherer Nachweis von bierschädigenden Bakterien in nur einer Stunde Die innovativen DMD Screen und Ident Kits vereinen die hohe Sensitivität der PCR-Methode (Polymerase Chain Reaction) mit der einfachen Anwendung eines Lateral Flowbasierenden Nachweises. Technologie der DMD Screen und Ident Kits PCR Das jeweils eindeutig positive oder negative Ergebnis lässt sich anhand von farbigen Banden auf einem Teststreifen leicht ablesen und erfordert weder Expertenwissen noch teures Equipment. Einfach, schnell, sicher die DMD Screen und Ident Kits von Döhler verändern die mikrobiologische Qualitätskontrolle in Brauereien. Neben den konventionellen kulturellen Methoden gewinnt auch der molekularbiologische Nachweis von bierschädigenden Bakterien zunehmend an Bedeutung. Vorteile wie beispielsweise schnelle und sichere Freigaben sowie die Option, vorhandene Mikroorganismen auch bis auf die Spezies zu identifizieren, beschleunigen die Etablierung eines solchen Verfahrens in der Brauerei. Bisher waren aber molekulare Analysemethoden wie die real-time PCR sehr aufwendig, kostenintensiv und nur mit geschultem Personal durchführbar. Mit den DMD Screen und Ident Kits liefert Döhler den Brauereien eine einfache, kostengünstige und schnelle Methode zum Nachweis von bierschädigenden Bakterien wie Laktobazillus, Pediococcus, Pectinatus und Megasphaera für alle in der Brauerei anfallenden Proben. Innerhalb von nur einer Stunde können mit diesem Kit Bakterien in einer angereicherten Bierprobe nachgewie- sen und identifiziert werden. Dabei wird ein molekularbiologischer PCR-Nachweis mit der einfachen visuellen Auswertung auf einem Teststreifen kombiniert. Durch diese Kombination wird der kulturelle Nachweis, der etwa fünf oder mehr Tage benötigt, auf zwei bis drei Tage einschließlich Voranreicherung reduziert. Dabei besticht das System durch eine besonders einfache Anwendung: Der Test erfordert kein spezielles molekularbiologisches Know-how. Die DMD Screen und Ident Kits eigenen sich für die PCR und den anschließenden visuellen Nachweis auf einem Teststreifen aus: Hefeproben Hefe-trüben Bieren Filtrierten Bieren Wasser und Spülwasser Proben der Luftkeimsammlung Abstrichproben für das Hygiene Monitoring Spezifische markierte Primer DNA-Zielsequenz Bakterium DNA-Zielsequenz interne Kontrolle DNA-Polymerase Die DNA eines Mikroorganismus ist sehr individuell und einzigartig. Mit der PCR (Polymerase Chain Reaction) ist die Vervielfältigung dieser DNA durch die Reaktion einer thermostabilen Polymerase möglich. 3 1 z.b 30 Zyklen 2 C T2 T1 Lateral Flow 1 Denaturierung ca. 95 C DNA-Doppelstränge werden in ihre Einzelstränge getrennt. 2 Annealing < 72 C Spezifische markierte Primer binden an den Einzelsträngen. 3 Elongation 72 C Hitzestabile Taq-DNA Polymerase setzt an den Primern an und verlängert die Doppelstränge, die als Ausgangsmaterial für den nächsten Zyklus dienen. C = Funktionskontrolle T2 = skontrolle (Zielsequenz interne Kontrolle) T1 = Testlinie (Zielsequenz Bakterium) Die vervielfältigte DNA wird dann im Lateral Flow als Banden sichtbar gemacht. Dies erfolgt durch die Verwendung von mobilen mit Antikörper markierten Goldpartikeln und deren Auftrennung auf einem Teststreifen. 2 3

3 Die Auswertung erfolgt wie bei einem Schwangerschaftstest sehr einfach durch sichtbare Banden. Die in der PCR amplifizierten Produkte werden auf Teststreifen des DMD Universal Detection Modules aufgetragen. Die Teststreifen werden in den im Kit enthaltenen Assay-Buffer gestellt und nach 5 Minuten visuell ausgewertet. Die dabei auftretenden Banden geben ein eindeutiges, einfach zu interpretierendes Ergebnis. Für dieses eindeutige Ergebnis ist die Verwendung einer internen PCR skontrolle sehr wichtig. Sie zeigt, ob ein negatives Ergebnis eindeutig negativ ist, weil keine DNA des entsprechenden Mikroorganismus vorhanden ist oder ob eine Inhibition der PCR vorliegt. Damit wird das Ergebnis sicher. Falsch-positive und falsch-negative Ergebnisse, die eine aufwendige Untersuchung oder sogar eine Vernichtung von einwandfreiem Endprodukt nach sich ziehen können, werden vermieden. Einfache Anwendung mit den im Kit enthaltenen Umfassendes Portfolio für den Nachweis mit DMD Screen und Ident Kits Die Anwendung ist durch die in den Kits zur Verfügung gestellten und das illustrierte Handbuch sehr einfach: Zunächst wird die angereicherte Probe mit dem vorbereiteten Reaktionsmix gemischt und in einem PCR Thermal Cycler erhitzt. Dabei wird das genetische Material vorhandener Bakterien freigesetzt und kann vervielfältigt werden. Da eine aufwendige DNA-Aufreinigung mit speziellen Pro- Höchste Sicherheit durch visuelle Auswertung und integrierte skontrolle Funktionskontrolle [C] skontrolle [T2] Testlinie [T1] + (+) - n.a. n.a tokollen nicht erforderlich ist, kann schon nach einem nur 50-minütigen PCR-Programm eine kleine Menge auf einen Teststreifen gegeben werden. Nach dem Eintauchen in einen Laufpuffer wird dieser Teststreifen nach weiteren fünf Minuten ausgewertet. Die Testung ist dabei aus einer Flüssiganreicherung in einem für PCR optimierten Kulturmedium oder durch eine Direktanalyse von Einzelkolonien auf Festmedien möglich. Saugpad und Beschriftungsfläche Auswertefenster Der rote Pfeil zeigt die Laufrichtung des Assay-Buffers an Konjugat Goldmarkierter, mobiler Antikörper Streifen 1 und 2 sind eindeutig positive Befunde. Streifen 3 ist ein negativer Befund. Streifen 4 zeigt eine potentielle Inhibition der PCR der Test sollte nochmals wiederholt werden. Streifen 5 ist nicht auswertbar. Döhler bietet ein umfassendes Portfolio zum Nachweis bierschädigender Bakterien an, das kontinuierlich erweitert wird. Der Schnellnachweis von Laktobacillus und Pediococcus erfolgt mit dem DMD Lactobazillus Pediococcus Screen Kit oder von Pectinatus und Megasphera mit dem DMD Pectinatus Megasphera Screen Kit aus angereicherten Bierproben. Nach einem positiven Screening auf Laktobacillus/Pediococcus kann mit dem DMD Lactobacillus brevis Ident Kit Lactobacillus brevis als bierschädigender Mikroorganismus identifiziert werden. Dieser Mikroorganismus verursacht in etwa 80 Prozent der Fälle die Bierschädigung. Darüber hinaus steht mit dem DMD Hop Resistance Screen Kit ein Schnellnachweis für hopfenresistente Bakterien zur Verfügung. Die Hopfenresistenz wird durch die Gene hora und horc vermittelt, die beide mit dem DMD Hop Resistance Screen Kit nachgewiesen werden können. Bereits eines dieser Gene verleiht einem Mikroorganismus das Potenzial, Bier zu verderben. Mit diesem einzigartigen Tool können somit auch unbekannte Bakterien auf ihr Potenzial zur Bierschädigung überprüft werden. Alle DMD Screen und Ident Kits enthalten die notwendigen, um den Nachweis effizient und sicher durchführen zu können. Sie enthalten neben dem PCR-Polymerase Master Mix (2x) und dem spezifischen PCR Primer Mix (2x), eine Positiv-Kontrolle sowie Wasser, PCR Grade, zum Verdünnen und als Negativ-Kontrolle. Alle DMD Screen und Ident Kits müssen mit dem dazugehörigen universellen DMD Universal Detection Module kombiniert werden. Das Kit enthält den Assay-Buffer und die notwendigen Teststreifen, um das Ergebnis sichtbar zu machen. DMD Screen und Ident Kit Darstellung der Analyseergebnisse auf dem Teststreifens des DMD Universal Detection Modules DMD Universal Detection Module 4 5

4 Komplettlösung mit optimaler Anreicherung Für den Nachweis mit den DMD Screen und Ident Kits ist eine Anreicherung der Bierproben erforderlich, die mit dem gebrauchsfertigen NBB -PCR Bouillon optimal erreicht wird. Damit ist Döhler der einzige Anbieter einer Komplettlösung für den PCR-Nachweis von bierschädigenden Bakterien und anschließendem Nachweis auf einem Teststreifen. Die optimierte Zusammensetzung des Mediums fördert das schnelle Wachstum der bierschädigenden Bakterien. Die Anreicherung und der Nachweis, sogar von langsam wachsenden Bakterien wie beispielsweise Lactobacillus lindneri oder Pediococcus damnosus, sind damit bereits innerhalb von 48 bis 72 Stunden möglich. Der einzigartige Vorteil: Durch ein spezielles Produktionsverfahren ist NBB -PCR Bouillon frei von der DNA bierschädigender Bakterien und enthält keinerlei PCR-Inhibitoren. Damit werden falsch-positive sowie falsch-negative Ergebnisse, die kostenintensiven Folgen für Brauereien haben können, ausgeschlossen. DMD Screen und Ident Kits Ihre Vorteile DMD Screen und Ident Kits Produktinformation Die DMD Screen und Ident Kits bieten Ihnen einen effizienten und sicheren PCR-Nachweis von bierschädigenden Bakterien mit anschließender visueller Auswertung aus allen Proben in Ihrer Brauerei. Untersuchungsmaterial Relevante Zielkeime Produkt Beschreibung Artikel-Nr. Lagerungstemperatur ( C) Anzahl Reaktionen Innovative Technologie ohne Expertenwissen und teures Equipment Mit der PCR und anschließender visueller Auswertung des Lateral Flow-basierenden Teststreifens wird ein einfacher molekularbiologischer Nachweis durchgeführt. Das Wissen darüber, wie die Technologien im Detail funktionieren, ist für diese Auswertung nicht erforderlich. Das kostengünstige Investment in einen Thermal Cycler erlaubt den direkten Einstieg in diese Technologie. Einfache Anwendung mit den im Kit enthaltenen Mit den im Kit enthaltenen und dem im illustrierten Handbuch beschriebenen Protokoll ist eine Anwendung sehr einfach. Eine aufwendige DNA-Aufreinigung ist nicht erforderlich. Nach ca. 1 Stunde können die gewünschten Ergebnisse auf dem Teststreifen abgelesen werden. Höchste Sicherheit durch visuelle Auswertung und integrierte skontrolle Die visuelle Auswertung von Banden auf einem Teststreifen erfolgt ähnlich wie bei einem Schwangerschaftstest sehr sicher und eindeutig. Die interne PCR-skontrolle auf dem Teststreifen ermöglicht Ihnen das Erkennen von falsch-negativen Ergebnissen, die durch eine Inhibition der PCR verursacht werden können. Umfassendes Portfolio für den Nachweis Das umfassende und kontinuierlich wachsende Portfolio zum Nachweis bierschädigender Bakterien umfasst die DMD Screen Kits für das Screening auf Laktobazillen und Pediokokken oder Pectinatus und Megasphaera, aber auch das Screening auf Hopfenresistenz-Gene, die für das Potenzial des Mikroorganismus zur Bierschädigung verantwortlich sind. Der DMD Ident Kit erlaubt die Identifizierung von Lactobacillus brevis. Komplettlösung mit optimaler Anreicherung Die Anreicherung der Bierproben kann optimal durch das gebrauchsfertige NBB -PCR Bouillon erreicht werden. Dank der optimierten Nährstoffzusammensetzung und dem Ausschluss von PCR-inhibierenden Inhaltsstoffen, ist auch ein Nachweis von langsam wachsenden Bakterien in Kombination mit dem DMD Screen und Ident Kits möglich. Hefe: Propagations-, Assimiliations-, Anstell- und Ernte-Hefe Klares Bier: Membranfiltrierte Proben Hefe-trübes Bier: Jungbier, Unfiltrat, Hefeweizen Wasser, Spülwasser: Membranfiltrierte Proben Umgebungsluft: Anreicherung nach Luftkeimsammlung auf Agarplatte Hygiene Monitoring Oberflächen in Füllanlagen: Anreicherung von Tupferproben Lactobacillus ssp. und Pediococcus ssp. Pectinatus ssp. und Megasphaera ssp. Hopfenresistenz- Gene hora und horc Lactobacillus brevis DMD Lactobacillus Pediococcus Screen Kit DMD Pectinatus Megasphaera Screen Kit DMD Hop Resistance Screen Kit DMD Lactobacillus brevis Ident Kit Produkt Beschreibung Artikel-Nr. DMD Universal Detection Module für Lateral Flow-basierende Detektion der PCR Produkte Kit/ -20 C Kit/ -20 C Kit/ -20 C Kit/ -20 C 24 Wichtig! Für alle angegebenen DMD Screen und Ident Kits ist zum Sichtbarmachen der PCR-Produkte das DMD Universal Detection Module erforderlich: Produkt Beschreibung Artikel-Nr. NBB -PCR Bouillon Gebrauchsfertiges, flüssiges Kulturmedium zur Anreicherung und PCR- oder real-time PCR-basierendem Nachweis Lagerungstemperatur ( C) Kit/ C 48 Anzahl Reaktionen Für die optimierte Anreicherung der Bierproben zum Nachweis mit den DMD Screen und Ident Kits empfehlen wir: Lagerungstemperatur ( C) x 250 ml, Glasflasche/ C 6 7

5 DMD Kulturmedien für mikrobiellen Nachweis Schnell Gebrauchsfertig Qualitätsgeprüft Zuverlässig Unter der Marke Döhler Microsafety Design (DMD ) bieten wir Lösungen für den mikrobiellen Nachweis in einer Vielzahl von Getränken und Getränkegrundstoffen an. Sind sie an weiteren Information zu den DMD Screen und Ident Kits, dem NBB -PCR Bouillon oder an unseren anderen innovativen Kulturmedien für Getränke interessiert? Dann besuchen Sie uns doch auf unserer Webseite oder nehmen Sie mit uns Kontakt auf: dmd@doehler.com About Döhler Döhler ( ist ein weltweit führender Hersteller, Vermarkter und Anbieter technologie-basierter natürlicher Ingredients, Ingredient Systems und integrierter Lösungen für die Lebensmittel- und Getränkeindustrie. Der integrierte Ansatz und das breite Produktportfolio von Döhler bieten eine optimale Grundlage für innovative und sichere Food & Beverage Applikationen. Das breite Produktportfolio an natürlichen Ingredients reicht von Flavours, Colours, Health & Nutrition Ingredients, Cereal Ingredients, Dairy Ingredients, Speciality Ingredients, Dry Ingredients, Fruit & Vegetable Ingredients bis hin zu Ingredient Systems. Mehr als engagierte Mitarbeiter stellen für unsere Kunden Integrated Food & Beverage Lösungen bereit vom Konzept bis zur Realisierung. WE BRING IDEAS TO LIFE. beschreibt prägnant den unternehmerischen, integrierten Leistungsansatz. Dieser umfasst Market Intelligence, Trend-Monitoring, die Entwicklung von innovativen Produkten und Produkt-Applikationen, Beratung in Fragen der Lebensmittelsicherheit und Mikrobiologie, des Lebensmittelrechts und der Sensory & Consumer Science. Döhler, mit Hauptsitz in Darmstadt, ist in über 130 Ländern aktiv und verfügt über 30 Produktionsstandorte sowie Vertriebsbüros und Applikationsstandorte auf allen Kontinenten. DÖHLER GmbH Riedstr Darmstadt Germany Telefon Fax mailbox@doehler.com facebook.com/doehlergroup twitter.com/doehlergroup EDV: Status: 03/2016