ReliaPrep Aufreinigungskits

Transkript

1 Für verlässliche Ergebnisse ReliaPrep Aufreinigungskits Wissenschaftler brauchen einfache und verlässliche Genomics Produkte. Die Nukleinsäureaufreinigung ist die Basis vieler Experimente in der Forschung. Die ReliaPrep Produkte sind daher die ideale Wahl, wenn es um eine verlässliche Basis für Ihre Forschungsarbeit geht. Die ReliaPrep Kits zur manuellen Aufreinigung aus Gewebe, Zellen oder Blut liefern besonders bei wertvollen Proben oder geringen Mengen an Ausgangsmaterial sehr verlässliche Ergebnisse. Dabei stehen höchste Reinheit und Ausbeute im Vordergrund. So können Sie sich bei Ihrer Forschung auf die Basis der Experimente verlassen.

2 DNA-Aufreinigung ReliaPrep gdna Tissue Miniprep System Hochreine DNA dank ethanolfreier Aufreinigung Aufreinigung genomischer DNA aus Geweben mit einem einfachen, ethanolfreien Aufreinigungssystem, das komplett und gebrauchsfertig geliefert wird. Kein Herstellen oder Mischen von Lösungen und kein Kauf zusätzlicher Reagenzien zur Verarbeitung notwendig. Die Proben werden mithilfe einer Tischzentrifuge in einem Minisäulenformat prozessiert. Vorteile der neuen Miniprep-Membrantechnologie Sicher: Konsistente Ergebnisse zwischen einzelnen Anwendern und Experimenten, selbst bei schwierigem Probenmaterial Ethanolfreies Protokoll: Keine Inhibition bei nachfolgenden Verfahren Hochreine gdna: Verbesserte A 26 /A 23 -Ratio Probenmaterial: Bis zu 25 mg Gewebe, 1 cm langes Stück Mausschwanz oder Mundschleimhaut- Abstrich Gebrauchsfertig: Keine zusätzlichen Reagenzien notwendig Schnelles Protokoll: 24 Proben in weniger als 1 Stunde Geeignet für viele Downstream-Anwendungen qpcr/pcr Arrays Genotypisierung Sequenzierung (Big Dye; aktuelle und dritte Generation) Next Generation Sequencing Ausbeute, Konzentration und Reinheit A. gdna-konzentration, Mausleber Mouse Liver ul 1ul 5ul Elutionsvolumen DNA-Konzentration (µg/ml) 1339MA Abbildung A zeigt die Konzentration und Abbildung B die absolute Ausbeute von gdna aus einer Mausleber-Probe bei Verwendung des ReliaPrep Tissue gdna Miniprep Systems. Es wurden je 25 µg Mausleberproben prozessiert und mit unterschiedlichen Volumina eluiert. B. gdna-ausbeute, Mausleber Yield (µg), Mouse Liver 6 5 Probe Menge Ausbeute (µg) A 26 /A 28 A 26 /A 23 Ausbeute (µg) Speichel/ 2 µl 4, 2, 1,9 Oragene Mundschleimhaut 1 Abstrich 1,5 2,5 2,1 1,8 Mausschwanz 1 cm 14 1,89 2,14 1 Mausleber 25 mg 48 2,1 2,12 2ul 1ul 5ul Elutionsvolumen 134MA Mausherz 25 mg 8,2 1,86 2,9 Maushirn 25 mg 9,6 1,91 2,17

3 ReliaPrep Blood gdna Miniprep System Kleines Elutionsvolumen mit hoher Reinheit Das ReliaPrep Blood gdna Miniprep System ist ein komplettes, gebrauchsfertiges System zur Isolierung von DNA aus bis zu 2 μl Blut oder Körperflüssigkeit. Das Ergebnis ist hochreine, intakte gdna. Das Protokoll verzichtet auf Waschschritte mit Ethanol. Die genomische DNA kann in weniger als 4 Minuten aus frischem oder gefrorenem Blut gewonnen werden, wobei je nach Anzahl der weißen Blutzellen in der Blutprobe DNA-Ausbeuten von 4 1 μg zu erwarten sind. Vorteile der neuen Miniprep-Membrantechnologie Einfach zu verwenden: Reagenzien werden gebrauchsfertig geliefert, keine Zusätze erforderlich Ohne Ethanol: Schließt eine Inhibierung der Folgeapplikationen durch Ethanolverschleppung aus Reine gdna: Bessere A 26 /A 23 -Ratio gegenüber anderen Herstellern Zeitsparend: Eluierte DNA in weniger als 4 min Verlässlich: Konsistente Ergebnisse bei allen Durchläufen auch bei unterschiedlichen Anwendern, selbst bei hämolysierten Proben Konzentrierte DNA: Gute Rückgewinnung und Reinheit bei nur 5 μl Elutionsvolumen Konstant gute Werte für Ausbeute und Reinheit Konstant hohe Ausbeuten und Reinheit bei der Aufreinigung von genomischer DNA mit dem ReliaPrep Blood System: Die Blutproben wurden entweder frisch verarbeitet oder 3 Einfrier-Auftau-Zyklen unterworfen. In beiden Fällen wurden konsistente Ausbeuten und gute Reinheitswerte erreicht. Ausbeute (µg) A 26 /A 28 A 26 /A 23

4 RNA-Aufreinigung ReliaPrep RNA Miniprep Systems Hochkonzentrierte RNA aus wenig Ausgangsmaterial Die beiden ReliaPrep RNA Miniprep Produkte für Zellen oder Gewebe reinigen effektiv RNA aus sehr geringen Mengen an Ausgangsmaterial auf. Aus Proben mit nur 1 Zellen oder nur,25 mg Gewebe isoliert das System intakte RNA in nur 3 Minuten. Dabei kommt es ohne den Einsatz von Lösungsmitteln aus. Die sehr reine und konzentrierte RNA kann in allen Downstream-Applikationen zuverlässig eingesetzt werden. Sie ist frei von Kontaminationen, welche bei sensiblen Verfahren stören. Wenn besonders hoch konzentrierte RNA erforderlich ist, kann mit der neuen Säulentechnologie der ReliaPrep Systeme das Standard-Elutionsvolumen von 15 µl auf nur 7 µl reduziert werden. Dennoch werden % der RNA rückgewonnen. Ein zusätzlicher Schritt zur Aufkonzentrierung entfällt. Die RNA wird mit einem Zentrifugationsprotokoll isoliert. Die Kits enthalten bereits die DNase für einen Verdau auf der Säule, somit entstehen keine versteckten Kosten. Vorteile der neuen Miniprep-Membrantechnologie Effizient: Bearbeitung schwieriger oder wertvoller Proben mit geringen Mengen Ausgangsmaterial Schnell: 3-Minuten Protokoll ohne Aufkonzentrierungsschritt Verlässlich: Keine Inhibitoren, daher für sensible Downstream- Applikationen geeignet Sicher: Keine Ethanol-Chloroform-Extraktion RNA-Rückgewinnung bei unterschiedlichen Elutionsvolumina RNA-Rückgewinnung (%) 11% 1% 9% 8% 7% 6% 5% (1. HeLa-Zellen Ausgangsmaterial) 7µl 7µl reapplied 1µl 1µl reapplied Elutionsvolumen 15µl 2µl Die RNA wurde parallel aus 1. HeLa-Zellen isoliert. Die RNA wurde in verschiedenen Volumen von 7 µl bis 2 µl eluiert. Bei den 1- und 7-µl-Elutionen wurde das anfängliche Eluat erneut auf die Säulen aufgetragen und passierte die Membran ein zweites Mal, so dass eine Normierung einer vollständigeren Rückgewinnung für das empfohlene Elutionsvolumen von 15 µl möglich ist. Typische RNA-Ausbeuten verschiedener Gewebe 26/23 26/28 RNA-Ausbeute (µg) ,482 1,12 11,27 Hirn Lunge Herz 33,81 Niere 7,4 Leber 93,99 Milz 136,97 Pankreas Absorptionsverältnis 2,5 2, 1,5 1,,5 2,2 2,13 Hirn 2,18 2,1 Lunge 2,1 2,1 Herz 2,2 2,15 Niere 2,21 2,12 Leber 2,11 2,8 Milz 2,16 2,6 Pankreas Die RNA wurde aus je 1 mg Mausgewebe-Proben mit dem ReliaPrep RNA Tissue Miniprep System isoliert. Anschließend wurden Ausbeute und Reinheit gemessen.

5 RNA-Aufreinigung ReliaPrep mirna Cell and Tissue Miniprep System Aus kleinsten Probenmengen und ohne organische Lösungsmittel Mit dem ReliaPrep mirna Cell and Tissue Miniprep System gelingt die Isolierung von Gesamt-RNA inklusive Mikro- RNA ohne organische Lösungsmittel mit hoher Ausbeute. Das Protokoll ist mit nur 4 Minuten sehr kurz und einfach anzuwenden. Es können aus sehr geringen Probenmengen kleine RNAs isoliert werden, zum Beispiel aus nur 1 Zellen oder,3 mg Gewebe. Die RNA kann in geringem Volumen ( 15 µl) eluiert werden und ist frei von Verunreinigungen. Dadurch lässt sie sich direkt für Downstream-Anwendungen, wie z.b. Next Generation Sequencing oder RT-qPCR einsetzen. Vorteile des neuen mirna Kits Sicher: ohne Einsatz von schädlichen organischen Lösungsmitteln Geringes Elutionsvolumen: hohe Konzentration amplifizierbarer mrna, mirna und anderer non-coding RNA (< 2 bp) Schnell: komfortables und einfaches Protokoll in nur 4 Minuten Sehr rein: effektiver gdna-verdau des Eluats und anschließender Einsatz einer zweiten Säule Gute Ergebnisse mit sehr wenig Ausgangsmaterial Mittelwert C (t) Gesamt-RNA, inklusive mirna wurde aus nur 1 Zellen und bis zu einer Menge von 1 x 1 5 HEK293 Zellen mit dem ReliaPrep mirna Cell and Tissue System aufgereinigt. mir16 und U6 Expressionslevel wurden per qpcr bestimmt. Das Ergebnis zeigt, dass auch aus nur 1 Zellen zuverlässig mirna isoliert werden kann. Anzahl HEK293 Zellen Reinere RNA im Vergleich zu anderen Aufreinigungen 1mg Leber 1mg Lunge 1mg Niere 1 mg Hirn 1mg Leber 1mg Lunge 1mg Niere 1 mg Hirn Für den Vergleich der Reinheit wurden die Absorptionsverhältnisse nach Aufreinigung mit dem ReliaPrep mirna System und anderen Aufreinigunssystemen bestimmt. Es wurden verschiedene Ausgangsmaterialien von jeweils 1 mg eingesetzt, isoliert und die Reinheit mit dem NanoDrop gemessen. Wettbewerberkits mit der Verwendung von Phenol/Chloroform ergaben sehr geringe 26/23 Verhältnisse, welche unter dem akzeptablen Bereich von 1,8 2,2 liegen. Das ReliaPrep mi RNA System verwendet kein Phenol/Chloroform und erzielt gute Reinheiten mit verschiedenen Gewebearten.

6 Bestellinformation Produkt Größe Katalognr. ReliaPrep gdna Tissue Miniprep System 1 Preps* 1 Preps A25 A251 A252 ReliaPrep Blood gdna Miniprep System 1 Preps* 1 Preps A58 A581 A582 ReliaPrep RNA Cell Miniprep System ReliaPrep RNA Tissue Miniprep System ReliaPrep mirna Cell and Tissue Miniprep System 1 Preps* 5 Preps 1 Preps* 5 Preps 1 Preps* 5 Preps Z61 Z611 Z612 Z611 Z6111 Z6112 Z621 Z6211 Z6212 Alle weiteren Aufreinigungsprodukte unter: *Hier eine kostenlose ReliaPrep -Probe anfordern: Noch mehr verlässliche Produkte im Genomic Essentials Katalog: Promega GmbH High-Tech-Park Schildkrötstr. 15 D Mannheim Telefon Bestellung Telefon Telefax de_custserv@promega.com Technische Beratung Telefon Telefax de_techserv@promega.com