Progesterone Luminescence Immunoassay

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1 Arbeitsanleitung Progesterone Luminescence Immunoassay Lumineszenzimmunoassay zur quantitativen in-vitro-bestimmung von Progesteron in humanem Speichel. RE62021 / RE / 960 Rx only 2-8 C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. ZWECKBESTIMMUNG Lumineszenz Immunoassay zur quantitativen in-vitro Bestimmung des aktiven freien Progesterons in Speichel. Messungen mit diesem Test können zur Diagnose und Therapie von Krankheiten der Ovarien herangezogen werden, sowie zur Bestätigung der Ovulation. Das IBL SaliCap Set wird für die Sammlung, Handhabung und Lagerung von Speichel verwendet, der im Progesteron Lumineszenz-Immunoassay verwendet wird. 2. KLINISCHE BEDEUTUNG Progesteron, ein C21-Steroid, ist ein weibliches Sexualhormon und eine Vorstufe im Metabolismus zu anderen Steroiden Progesteron wird hauptsächlich im Gelbkörper der Ovarien synthetisiert, während der Schwangerschaft hauptsächlich in der Plazenta und in geringen Mengen als Zwischenstufe für die Produktion anderer Steroide (Aldosteron, Cortisol, Testosteron, 17ß-Östradiol) in der Nebennierenrinde und in den Hoden. Im Blut zirkuliert der größte Teil des Progesterons gebunden an Plasmaproteine wie Corticoid-bindendes Globulin (CBG, Transcortin), Sexualhormon-bindendes Globulin (SHBG) und Albumin. Nur 1 2 % ist nicht gebunden und zirkuliert als freies Hormon im Plasma. Nur dieses stellt den wirksamen Anteil bei der endokrinen Regulation dar. Die freien Hormone werden in gleichen Anteilen im Speichel gefunden. Ein enzymatischer Umwandlung von Anteilen dieser Hormone durch die Speicheldrüsen ist anzunehmen. Progesteron hat Bedeutung bei der endokrinen Regulation des Menstruationszyklus. Am 6. bis 8. Tag nach der Ovulation steigt die Progesteronkonzentration auf ein Plateau an. Zusammen mit Estradiol inhibiert es die Freisetzung von LH und FSH aus der Hypophyse durch einen negativen Feedback-Mechanismus. Infolge der Auflösung des Gelbkörpers fällt auch die Progesteron-Konzentration in den letzten 3 Tagen der Periode auf ein präovulatorisches Niveau ab. Während der Schwangerschaft wird ab der 8. Schwangerschaftswoche Progesteron von der Plazenta in hohen Konzentrationen produziert und hält bis in das 3. Trimester an. Die wesentliche Aufgabe von Progesteron besteht darin, die weiblichen Sexualorgane für eine mögliche Implantation der befruchteten Eizelle vorzubereiten und die Schwangerschaft aufrecht zu erhalten. Progesteron wird pulsatil in den Blutkreislauf abgegeben und findet sich ebenso pulsatil im Speichel wieder. Die Messung von freiem Progesteron im Speichel ist indiziert bei der Verlaufsbeurteilung des weiblichen Menstruationszyklus, bei der Ermittlung des Zeitpunktes der Ovulation, und bei der Bewertung der Funktion des Gelbkörpers insbesondere in den ersten Tagen der Schwangerschaft. Da die Schwankungsbreite der Progesteronkonzentration individuell unterschiedlich ist und von einer Vielzahl von Faktoren beeinflusst werden kann, ist in bestimmten Situationen die Erstellung von Profilen ratsam. Die Messung des freien Progesterons im Speichel ist eine praktische Methode mit einer einfachen, oft wiederholbaren Probengewinnung. 3. TESTPRINZIP Der Progesterone Lumineszenzimmunoassay (LUM) ist ein kompetitiver Lumineszenzimmunoassay. Die unbekannte Menge an Antigen in der Probe und eine bekannte Menge an enzymmarkiertem Antigen (E-Ag) konkurrieren um die Bindungsstellen des an die Wells der Mikrotiterstreifen gebundenen Antikörpers. Nach der Inkubation wird nicht gebundenes E-Ag durch Waschen entfernt. Die Intensität der ausgelösten Lumineszenz nach Zugabe der Lumineszenz-Substratlösung ist umgekehrt proportional zur Antigen- Konzentration in den Proben. Die Ergebnisse der Proben können direkt anhand der Standardkurve bestimmt werden. 4. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal. 2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden. 3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden endgültig geregelt ist. 4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden. 5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, Einmal- Latexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden. Version / 8

3 6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten. Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder auf Anfrage direkt von IBL erhältlich. 7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen. 8. Das Reinigungspersonal ist durch das Fachpersonal bezüglich möglicher Gefahren und Umgang anzuleiten. 9. Einige Reagenzien enthalten Natriumazid (NaN 3) als Konservierungsmittel. Bei Kontakt mit den Augen oder der Haut gründlich mit Wasser abspülen. NaN 3 kann mit Blei und Kupfer explosive Azide bilden. Bei Entsorgung über das Abwasser gut spülen, um Azidanreicherung zu vermeiden. 5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8 C gelagert werden. Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen. Die Mikrotiterplatte ist auch nach dem Öffnen der Verpackung bis zum Verfallsdatum des Kits haltbar, wenn der Beutel sorgfältig wieder verschlossen und bei 2-8 C gelagert wird. 6. PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG Saliva Der Patient sollte 30 min vor der Probennahme nicht essen, trinken, Kaugummi kauen oder Zähne putzen. Andernfalls 5 min vor der Probenahme den Mund gründlich mit kaltem Wasser spülen. Salivaproben sollten nicht bei Krankheiten, Entzündungen oder Verletzungen der Mundhöhle genommen werden (Blutkontamination). Salivaproben können in geeigneten Sammelgefäßen gesammelt werden. Es sollten mindestens 0,5 ml Flüssigkeit gesammelt werden. Der Speichelfluss kann durch Kauen auf Parafilm stimuliert werden. Es wird empfohlen, die Salivaproben vor der Testdurchführung bei 20 C einzufrieren und nach dem Auftauen zu mischen und 10 min bei x g zu zentrifugieren (um Partikel zu entfernen). Die Salivaproben müssen visuell einwandfrei sein. (Rötliche Färbung deutet auf Kontamination mit Blut hin) Lagerung: 37 C C 2-8 C -20 C (aliquotiert) Haltbarkeit: 1 Woche < 2 Wochen < 4 Wochen 6 Monate 7. KOMPONENTEN DES KITS Anzahl / Menge RE62021 Anzahl / Menge RE62029 Symbol 1 x 12x8 10 x 12x8 MTP 1 x 0,15 ml 1 x 1,5 ml ENZCONJ CONC 1 x 9 ml 1 x 90 ml ANTISERUM 1 x 10 ml 1 x 100 ml ASSAYBUF 7 x 1,0 ml 7 x 3,5 ml CAL A-G 2 x 1,0 ml 2 x 3,5 ml CONTROL x 9 ml 1 x 90 ml LUMINREAG AP Komponente Mikrotiterplatte Beschichtet mit Kaninchen-anti-Maus-Antikörper. Enzymkonjugat Konzentrat (101x) Enthält: Alkalische Phosphatase-Konjugat, 0,1 % NaN3. Progesteron Antiserum Rot gefärbt. Gebrauchsfertig. Enthält: anti-progesteron Antikörper (Maus). Assaypuffer Rot gefärbt. Gebrauchsfertig. Enthält: Trispuffer, BSA, 0,1 % NaN3. Standard A-G 0; 10; 25; 50; 100; 300; 1000 pg/ml Gebrauchsfertig. Enthält: Progesteron, Puffer, BSA, 0,1 % NaN3. Kontrolle 1+2 Gebrauchsfertig. Konzentrationen / Akzeptanzbereiche siehe QC- Zertifikat. Chemilumineszenzreagenz AP Gebrauchsfertig. Enthält: Acridiumester-Substrat. 1 x 100 ml 5 x 100 ml WASHBUF CONC Waschpuffer Konzentrat (10x) Enthält: Trispuffer, Tween, NaN3. 3 x 12 x FOIL Haftklebefolie Version / 8

4 8. ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 1. Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3 % VK). Volumina: 20; 50; 1000 µl 2. Geeignete Probenabnahmegefäße verwenden. (kann bei IBL separat bestellt werden unter REF RE69991) 3. Orbitalschüttler ( U/min) 4. Vortex-Mischer 5. 8-Kanal Mikropipette mit Reagenziengefäßen 6. Waschflasche, automatisches oder halbautomatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten 7. Lumineszenz Immunoassay-Messgerät 8. Bidest. oder deionisiertes Wasser 9. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr 9. HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG 1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten, Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden. 2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25 C) gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden. 3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue Einmal- Pipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden. 4. Enthalten Komponenten 250 µl Flüssigkeit, sollte sich vor dem Öffnen der gesamte Inhalt auf dem Boden des entsprechenden Fläschchens befinden. 5. Es wird empfohlen, Doppelbestimmungen durchzuführen, um eventuelle Pipettierfehler zu erkennen. 6. Es sollte ein Pipettierschema verwendet werden um die Identifikation der Standards und Proben auf der Platte sicherzustellen. 7. Die Inkubationszeiten beeinflussen die Ergebnisse. Bei jedem Pipettierschritt sollten alle Wells in der gleichen Reihenfolge und im gleichen Zeittakt behandelt werden. Die Verwendung einer 8-Kanal- Mikropipette zum Pipettieren in alle Wells wird empfohlen. 8. Die korrekte Durchführung der Waschschritte ist entscheidend. Ungenügend gewaschene Wells ergeben falsche Ergebnisse. Die Verwendung einer Multikanalpipette oder eines automatischen Waschsystems für Mikrotiterplatten wird empfohlen. Zwischen den Inkubationen die Wells nicht austrocknen lassen. Beim Waschen und Ausschütteln dürfen die beschichteten Wells nicht beschädigt werden. Alle Reagenzien müssen daher mit Vorsicht pipettiert werden. Beim Waschvorgang ist es wichtig, dass alle Wells vollständig und gleichmäßig mit Waschpuffer gefüllt werden und nach dem Ausschütteln kein Rückstand an Flüssigkeit zurückbleibt. 9. Feuchtigkeit beeinflusst die beschichteten Wells/Röhrchen. Verpackung nicht öffnen bevor Raumtemperatur erreicht ist. Nicht benötigte Wells/Röhrchen sofort in den wieder verschließbaren Beutel mit Trockenmittel zurückgeben. Version / 8

5 10. TESTVORBEREITUNGEN Der Inhalt des Kits für 96 Bestimmungen kann in 3 Läufe aufgeteilt werden. Die unten angegebenen Volumina sind für einen Lauf mit 4 Streifen (32 Bestimmungen) Vorbereitung lyophilisierter oder konzentrierter Komponenten Verd. / rekonst. Komponente Diluent Verhältnis Bemerkungen Lagerung Haltbarkeit 10 ml WASHBUF CONC 20 µl ENZCONJ CONC ad 100 ml mit 2 ml bidest. Wasser 1:10 Gründlich mischen. 2-8 C 4 Wochen ASSAYBUF 1:101 Ohne Schaumbildung mischen. Frisch herstellen und nur einmal verwenden Probenverdünnung Proben, bei denen eine Konzentration über dem höchsten Standard erwartet wird, müssen mit Standard A verdünnt werden. Für den Fall, dass Proben zur Messung anderer Analyten (z.b. für Progesteron, 17-beta Estradiol oder DHEA) kann an Stelle des kitspezifischen Standard A der Probenverdünner verwendet werden (erhältlich bei IBL unter REF KLZZ731). Die Verdünnung in Glasröhrchen durchführen. Die Messergebnisse müssen mit dem Verdünnungsfaktor multipliziert werden, um die tatsächlichen Ergebnisse zu erhalten. 11. TESTDURCHFÜHRUNG 1. Je 20 µl der Standards, Kontrollen und Proben in die entsprechenden Wells der Mikrotiterplatte pipettieren 2. Je 50 µl des frisch hergestellten gebrauchsfertigen Enzymkonjugats in jedes Well pipettieren. 3. Je 50 µl Progesteron-Antiserum in jedes Well pipettieren. Platte mit Haftklebefolie abdecken h bei RT (18-25 C) auf einem Orbitalschüttler ( rpm) inkubieren. 5. Folie entfernen. Inkubationslösung verwerfen. Platte 4 x mit je 250 µl verdünntem Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen. 6. Je 50 µl Chemilumineszenz-Reagenz AP in jedes Well pipettieren, in der gleichen zeitlichen Verzögerung, mit der das Luminometer später misst (Berthold Luminometer: 2 sec pro Well). 7. Nach 10 min die relativen Lumineszenzeinheiten (RLU) mit einem Luminometer messen. 12. QUALITÄTSKONTROLLE Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet wurde. Ferner muss der Anwender die GLP-Regeln (Good Laboratory Practice) oder vergleichbare Normen/Gesetze beachten. Anwender und/oder Labor müssen zur Diagnosestellung ein gemäß GLP validiertes System verwenden. Alle Kit-Kontrollen müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf den Etiketten und dem QC-Zertifikat angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus eigene bekannte Proben als weitere Kontrollen mitführen. Es wird empfohlen, an den einschlägigen Ringversuchen teilzunehmen. Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten) Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und Waschmethoden. 13. TESTAUSWERTUNG Die erhaltenen RLU Mittelwerte der Standards (y-achse, linear) gegen deren Konzentration (x-achse, logarithmisch) auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm. Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die Cubic-Spline-Methode, 4- Parameter-Analyse (lin-log) oder Logit-Log-Berechnung empfohlen. Zur Berechnung der Standardkurve sollten alle Werte der Standards verwendet werden (bei Doppelwerten kann ein offensichtlicher Ausreißerwert eliminiert und stattdessen der plausiblere Einzelwert verwendet werden). Die Konzentrationen der Proben können direkt von der Standardkurve abgelesen werden. Version / 8

6 Die Werte von verdünnten Proben müssen mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert werden. Proben, die oberhalb des höchsten Standards gemessen werden, müssen wie in TESTVORBEREITUNGEN beschrieben verdünnt und erneut analysiert werden. Salivaproben mit erheblich überhöhten Werten könnten mit Blut kontaminiert sein und sollten entsprechend überprüft werden. Umrechnung: Progesteron x 3,17 = pmol/l Messbereich: Saliva: 2, pg/ml Progesteron Typische Standardkurve (Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!) Standard Progesteron Mittelwert RLU RLU / RLUmax A B C D E F G RLU Progesterone pg/ml 14. NORMWERTE Therapeutische Konsequenzen sollten nicht allein aufgrund der mit diesem Test ermittelten Werte getroffen werden, sondern nur unter Berücksichtigung aller klinischen Beobachtungen und weiterer diagnostischer Mittel. Augenscheinlich gesunde Spender zeigten die folgenden Normwerte: Progesteron Prämenopausal Follikelphase pg/ml (n = 27 Monatsprofile) Lutealphase pg/ml Postmenopausal (n = 6) pg/ml n = 49 < 59 pg/ml Jedes Labor sollte unter Berücksichtigung regionaler Gegebenheiten eigene Normalwertbereiche erstellen. Eine Studie wurde durchgeführt, um den normalen Bereich zu bestimmen. Speichelproben wurden von scheinbar gesunden Frauen gesammelt, die als prämenopausal bekannt sind und keine Verhütungsmittel verwenden. Drei Speichelproben wurden pro Tag (AM, Mittag und PM) gesammelt, gepoolt und gefroren, bevor der Test durchgeführt wurde. Die Sammlung begann am letzten Tag der Blutung und ging täglich bis zum ersten Tag der Blutung. Insgesamt wurden 27 Frauen für die Studie ausgewertet. Der Bereich für prämenopausale Frauen im Alter von wurde mit pg/ml (Follikelphase) und pg/ml (Lutealphase) gefunden. Beachten Sie, dass die Speicheldrüsen-Progesteronspiegel von 32,2-94,3 für die Follikelphase und 106,3-311,0 für die Lutealphase aus der Literatur berichtet wurden. Vier Frauen in dieser Studie zeigten atypische Progesteronprofile. Speichelproben wurden von sechs Frauen gesammelt (eine von jeder Frau), die bekanntermaßen postmenopausal war und im Progesteron-LUM-Test untersucht wurde. Die Strecke für postmenopausale Frauen Alter wurde gefunden, um pg/ml zu sein. Speichelproben wurden von neunundvierzig gesunden männlichen Probanden (einer von jedem männlichen) gesammelt und im Progesteron-LUM-Test untersucht. Die Reichweite für Männer Alter wurde gefunden, um <59 pg/ml zu sein. Beachten Sie, dass Speichelprogesteronspiegel von 9-32 pg/ml bei Männern aus der Literatur berichtet wurden. Version / 8

7 Menstruationszyklus von 27 Frauen (Alter: Jahre) ohne Kontrazeptiva Saliva Progesteron Bleeding Tag des Menstruationszyklus 15. GRENZEN DES VERFAHRENS Die korrekte Durchführung der Probengewinnung und Aufbewahrung ist entscheidend für die Testergebnisse. Näheres siehe PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG. Angaben zu Kreuzreaktivitäten sind im Kapitel TESTCHARAKTERISTIKA zu finden. Der Einfluss von Blut, Thimerosal und Natriumazid auf den Assay wurde ebenfalls ausgewertet. Niedrige und hohe Progesteronspiegel weibliche Speichelproben wurden mit verschiedenen Konzentrationen von Vollblut angereichert, um die Wirkung auf gemessene Progesteronwerte zu sehen. Die Ergebnisse ergaben, dass Blutungen die Ergebnisse nicht beeinflussen, bis sie sichtbar sind (z.b.> 0,25% Blutkontamination in der Speichelprobe). Zunehmende Konzentrationen von Thimerosal wurden zu Speichelproben mit bekannten Konzentrationen von Progesteron hinzugefügt, um die Wirkung der Zugabe des Konservierungsmittels auf Speichel auf die Ergebnisse zu beurteilen. Thimerosal in sehr hohen Konzentrationen (z.b.> 0,25%, um Proben zu stabilisieren) können die Messung stören und falsch niedrige Ergebnisse liefern. Zunehmende Konzentrationen an Natriumazid wurden zu Speichelproben mit bekannten Konzentrationen von Progesteron zugegeben. Die Ergebnisse zeigten, dass hohe Konzentrationen (bis zu 1,0%) die Testergebnisse nicht beeinflussen. Es wurden Wiederfindungsraten zwischen 90 und 98% beobachtet. 16. TESTCHARAKTERISTIKA Analytische Spezifität (Kreuzreaktivität) Die Kreuzreaktivität des Progesteron-Antiserums wurde an verschiedenen Verbindungen gemessen. Die prozentuale Kreuzreaktivität wird als die Verhältnisse der Progesteronkonzentration zur Konzentration der reagierenden Verbindung bei 50% Bindung des Nullstandards ausgedrückt. Analytische Sensitivität (Nachweisgrenze) Substanz Kreuzreaktivität 17 -OH-Progesteron 1,84 6 -Methyl-17 -OH-Progesteron 1,41 Pregnenolon 0,41 Desoxy-Corticosteron 0,28 Androsteron Sulfat 0,25 Androstendion 0,20 Androsteron 0,20 DHEA-S 0,11 Corticosteron 0,06 2,6 pg/ml Funktionelle Sensitivität 7,6 pg/ml Mittelwert Konz. < 20 % CV Kreuzreaktivität aller anderen getesteten Substanzen 0,1 % Mittleres Signal (Nullstandard) - 2SD Der Null Standard A wurde in 20 Wiederholungen ausgegeben und getestet, um die unterer Bestimmungsgrenze zu bestimmen. Der Mittelwert minus 2SD wurde berechnet und mit einer Vier- Parameter-Kurvenanpassung berechnet. Version / 8

8 Linearität Wiederfindung Eine Reihe von sechs (6) Patienten-Speichelproben wurden zweimal mit dem Standard A aus dem Kit verdünnt. Alle Wiederfindungen lagen innerhalb des zulässigen Bereichs (80-120%) mit Ausnahme einer Verdünnung in einer Probe, bei der die Erholung 78% betrug. Die nachfolgenden Verdünnungen liegen jedoch im Bereich. Die Linearität des Tests wurde bestimmt bis 1200 pg/ml. Verdünnung Gemessen Verdünnung Gemessen Wiederfindung Wiederfindung - 337, , :2 155,6 92 1:2 59, :4 65,6 78 1:4 26,5 91 1:8 35,1 83 1:8 16, :16 17,5 83 1:16 7, :32 11, , , :2 349,5 90 1:2 773, :4 173,9 89 1:4 394, :8 82,6 85 1:8 209, :16 40,4 83 1:16 115, :32 20,9 86 1:32 52, :64 21, , , :2 325, :2 101,8 95 1:4 162, :4 45,3 84 1:8 76,9 98 1:8 26,3 98 1:16 41, :16 11,4 85 1:32 20, :32 7,9 118 Eine Reihe von fünf (5) Speichelproben wurden verwendet, um die Wiederfindung im LUM-Test zu bewerten. Gereinigtes Progesteron wurde gewogen und in den folgenden Konzentrationen 0, 10, 25, 50, 100, 300 und 1000 pg/ml zugegeben, die Proben wurden erneut getestet. Die Anfangskonzentrationen der Speichelproben lagen zwischen 27,1 und 199,5 pg/ml. Alle Wiederherstellungen mit Ausnahme einer Probe mit einer Wiederfindung von 121,4% waren innerhalb des akzeptablen Bereichs (80-120%). Zugefügt Gemessen Wiederfindung Gemessen 0 27, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,7 101 Wiederfindung Version / 8

9 Methodenvergleich versus RIA Das IBL Progesteron LUM wurde mit einem veröffentlichten RIA-Verfahren verglichen. Der Progesterongehalt von Speichelproben, die von scheinbar gesunden weiblichen Personen gesammelt wurden, wurde nach beiden Methoden beurteilt. Alle Proben wurden bei -20 C gefroren gelagert, aufgetaut und getestet. IBL-Assay = 0,89 x RIA + 25,5 pg/ml r 2 = 0,94; n = 97 RIA Bereich = pg/ml LUM Bereich = pg/ml Präzision und Reproduzierbarkeit Speichelproben von sechs (6) Personen wurden in jeweils zehn (10) Replikaten innerhalb eines Testlaufs durchgeführt, um die Präzision zu bestimmen. Die mittleren Konzentrationen reichten von 11,54 bis 822,10 pg/ml. Die Standardabweichungen (SD) reichten von 0,69 bis 5,92, was einen CV von 6,0 % ergab. Saliva Probe Intra Assay Mittelwert SD CV 1 11,54 0,69 6,0 2 24,73 0,69 2,8 3 50,21 1,53 3,1 4 99,99 5,02 5, ,01 5,06 2, ,10 5,92 0,7 Die Inter-Assay-Reproduzierbarkeit wurde durch Messungen von zehn (10) verschiedenen Speichelproben in zehn (10) verschiedenen Testläufen von drei (3) verschiedenen Chargen bestimmt. Die mittleren Konzentrationen reichten von 10,3 bis 817,1 pg/ml. Die SD reichten von 3,0 bis 42,6, was zu CVs zwischen 3,4 % und 18,8 % führte. Saliva Probe Inter Assay Mittelwert SD CV 1 10,3 4,0 38,9 2 20,9 4,2 20,2 3 21,6 3,0 13,9 4 37,7 4,7 12,5 5 46,2 5,2 11,3 6 76,4 5,9 7,7 7 97,1 3,3 3, ,7 16,2 6, ,6 42,6 8, ,1 41,0 5,0 17. LITERATUR ÜBER DAS PRODUKT 1. Lewis, J.G Steroid Analysis in Saliva: An overview. Clin Biochem Rev Vol Wood, P Salivary steroid assays research or routine? Ann Clin Biochem 46: Version / 8

10 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Rx only Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Prescription use only. / Anwendung nach Verordnung. / Prescription utilisation seulement. / Receta usar solamente. / Prescrizione utilizzare solo. / Prescrição usar apenas. / Συνταγή χρήση μόνο. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.7 /

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