Einführung in die Technik. Mikroskopie. Kleines betrachten

Transkript

1 Einführung in die Technik Mikroskopie griechisch µικροσ = mikros = klein σκοπειν = skopein = betrachten Kleines betrachten Th. Beyer / Lungenklinik Ballenstedt Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 1 -

2 Einführung in die Technik Objektive am Mikroskop Welche sind sinnvoll? 4x 10x 40x 63x 100x ( Öl erforderlich ) Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 2 -

3 Einführung in die Technik Ohne oder mit Deckglaskorrektur? z.b. 40x / 0 40x/ 0,17 Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 3 -

4 Vergrößerung:Zweistufige Abbildung Gesamtvergrößerung am Mikroskop Vergrößerung = Maßstabszahl des Objektivs x Okularvergrößerung (z.b. Objektiv 10x und Okular 10x =>Gesamtvergrößerung 100fach) M Objektiv x V Okular Gegenstand Bild Gegenstandsweite Bildweite Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 4 -

5 Auflösung: Numerische Apertur Je größer der Öffnungswinkel des Objektives (2) desto stärker gebeugtes Licht wird eingefangen desto kleinere Strukturen (1) werden aufgelöst Maß für Öffnungswinkel: Numerische Apertur = N. A. = n x sin α n = Brechzahl des Mediums zwischen Präparat und Objektiv n Luft = 1, n Glas = 1,51 α = halber Öffnungswinkel des Objektivs α 1 2 α Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 5 -

6 Auflösung: Maximales Auflösungsvermögen Prof. Ernst Abbe ( ) Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 6 -

7 Kontrast: Phasenkontrast Prinzip des Phasenkontrasts: Phasenverschiebung wird in sichtbare Intensitätsdifferenz umgewandelt Resultat: Objektstrukturen dunkel auf grauem Hintergrund Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 7 -

8 Phasenkontrast Aufbau Ringblende im Kondensor in vorderer Brennebene, Präparat durch Ringblende beleuchtet Phasenring in Austrittspupille des Objektivs aufgedampft Ringblende wird auf Phasenring abgebildet, unbeeinflusstes Licht geht nur durch Phasenring und wird um 90 phasengedreht und abgeschwächt Von Präparatstrukturen gebeugtes und phasenverschobenes Licht trifft Phasenring nicht: keine Schwächung und zusätzlich noch weiter phasenverschoben Okular Zwischenbild Phasenring in Objektivpupille Objektiv Präparat Kondensor Ringblende Leuchtfeldblende Kollektor Lampe Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 8 -

9 Der Weg der Lichtstrahlen - von der Leuchte bis zum Auge 1 = Lampenwendel 2 = Aperturblende 3 = Objektivpupille 4 = Pupille des Beobachterauges A = Leuchtfeldblende B = Präparatebene C = Zwischenbild im Okular D = Netzhaut im Beobachterauge Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach - 9 -

10 Wie stelle ich mein Mikroskop richtig ein? Einschalten der Lichtquelle und Prüfen, ob Licht sichtbar wird Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach

11 Wie stelle ich mein Mikroskop richtig ein? Einstellen des richtigen Augenabstandes über Knickbrücke des Binokulartubus Es sollte nur ein Kreis sichtbar sein. Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach

12 Wie stelle ich mein Mikroskop richtig ein? Präparat scharf einstellen durch Bewegen des Fokussiertriebs Abgleich der Fokussebenen mittels fokussierbarem Okular Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach

13 Wie stelle ich mein Mikroskop richtig ein? Optimierung der Ausleuchtung des Präparats ( Köhlern ): Verkleinern der Leuchtfeldblende Scharfes Abbilden der Leuchtfeldblende durch Bewegen des Kondensortriebs Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach

14 Wie stelle ich mein Mikroskop richtig ein? unscharfes Abbild der Leuchtfeldblende in der Präparatebene scharfes Abbild der Leuchtfeldblende Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach

15 Wie stelle ich mein Mikroskop richtig ein? Zentrieren des Bildes mittels Zentrierschrauben am Kondensorträger Öffnen der Leuchtfeldblende Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach

16 Wie stelle ich mein Mikroskop richtig ein? Leuchtfeldblende geschlossen und zenriert Leuchtfeldblende soweit geöffnet, dass ihr Rand das Sehfeld nicht mehr begrenzt Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach

17 Wie stelle ich mein Mikroskop richtig ein? Optimierung des Kontrasts durch Veränderung der Aperturblende: Zum Betrachten der Aperturblende wird ein Okular herausgenommen. Justierung der Aperturblende (Maximale Auflösung wenn die Aperturblende auf 66% bis 80% des Pupillendurchmessers eingestellt ist) Carl Zeiss Center for Microscopy / Jörg Steinbach