VORSTELLUNG VON ZWEI ETHIDIUMBROMID (ETBR) ERSATZSTOFFEN

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1 VORSTELLUNG VON ZWEI ETHIDIUMBROMID (ETBR) ERSATZSTOFFEN

2 Warum sind Ethidiumbromid Ersatzstoffe dringend notwendig? 2

3 Somit müssen die Ersatzfarbstoffe nachweisen, dass Sie: Sicherer sind, als der zu ersetzende Stoff Die Testergebnisse müssen öffentlich gemacht worden sein (nachvollziehbar und im Detail) Das entsprechende Material safety data sheet (MSDS) muss diese Testergebnisse wiederspiegeln 3

4 Direkter Vergleich von EtBr und zwei Ersatzfarbstoffen Ethidiumbrom id Midori Green Advance Midori Green Direct Lösungsmittel? Wässrige Lösung Wässrige Lösung Wässrige Lösung Membranpermeabilität Mutationstest (z.b. Ames-Test) Ja Ja Nein Mutagen Nicht Mutagen Nicht Mutagen 4

5 Farbstoffe in welchen Lösungsmitteln gelöst? Ethidiumbromi d Midori Green Advance Midori Green Direct Lösungsmittel? Wässrige Lösung Wässrige Lösung Wässrige Lösung Alle Farbstoffe befinden sich in wässriger Lösung, d.h. kein Gefahrenpotential durch das Lösungsmittel! 5

6 Membranpermeabilität und Mutagenität der untersuchten Farbstoffe Membranpermeabilität Mutationstest (z.b. Ames-Test) Ethidiumbromi d (EtBr) Midori Green Advance (MiAd) Ja Ja Nein Midori Green Direct (MiDi) Mutagen Nicht Mutagen Nicht Mutagen MiDi nicht membranpermeabel, daher kein Eindringen in Zellen und somit Zellkern möglich EtBr und MiAd sind membranpermeabel, somit Mutationstests notwendig MiDi wurde trotz membranimpermeabilität Mutationstests unterzogen 6

7 Sicherheitstests an Midori Green Advance zur Überprüfung der Mutagenität und Toxizität 1. Ames Test 2. The Acute Oral Toxicity Test 3. The Mouse Bone Marrow Micronucleus Test 4. Chromosome Aberration Test 5. Latex And Nitrile Gloves Penetration Test 7

8 Testergebnisse des Ames-Test TA : versch. Salmonella Stämme (alle Histidin auxotroph) -S9: ohne Leberenzyme +S9: mit Leberenzymen, simuliert Stoffwechsel Die Daten zeigen keinen mutagenen Effekt durch MiAd Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety Report 8

9 Testergebnisse des Ames-Test TA : versch. Salmonella Stämme (alle Histidin auxotroph) -S9: ohne Leberenzyme +S9: mit Leberenzymen, simuliert Stoffwechsel Die Daten zeigen keinen mutagenen Effekt durch MiAd Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety Report 9

10 Testergebnisse des Ames-Test TA : versch. Salmonella Stämme (alle Histidin auxotroph) -S9: ohne Leberenzyme +S9: mit Leberenzymen, simuliert Stoffwechsel Die Daten zeigen keinen mutagenen Effekt durch MiAd Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety Report 10

11 Testergebnisse Acute Oral Toxicity Test Gesunden Kunmingmäusen wurden verschiedene Dosen MiAd verabreicht und über zwei Wochen beobachtet Es wurden keine Vergiftungserscheinungen, oder Todesfälle festgestellt Die Daten zeigen, dass MiAd nicht toxisch ist Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety Report 11

12 Testergebnisse Mouse Bone Marrow Micronucleus Test Testtiere waren gesunde Kunmingmäuse, pos. Kontrolle: Mitomycin C und neg. Kontrolle: Dest. Wasser Im Vergleich zur neg. Kontrolle zeigte MiAd keinen signifikanten Unterschied (P> 0,05) Die neg. Kontrolle zeigte einen signifikanten Unterschied zur Pos. Kontrolle (P< 0,01) Aufgrund der Ergebnisse ist MiAd nicht genotoxisch 12 Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety Report

13 Testergebnisse Mouse Bone Marrow Micronucleus Test Testtiere waren gesunde Kunmingmäuse, pos. Kontrolle: Mitomycin C und neg. Kontrolle: Dest. Wasser Im Vergleich zur neg. Kontrolle zeigte MiAd keinen signifikanten Unterschied (P> 0,05) Die neg. Kontrolle zeigte einen signifikanten Unterschied zur Pos. Kontrolle (P< 0,01) Aufgrund der Ergebnisse ist MiAd nicht genotoxisch Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety 13

14 Testergebnisse Chromosome Aberration Test Zellen: Eileiterzellen des Chinesischen Hamsters -S9: ohne Leberenzyme +S9: mit Leberenzymen, simuliert Stoffwechsel MiAd zeigt in vitro keine Chromosomenverändernde Wirkung Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety Report 14

15 Testergebnisse Chromosome Aberration Test Zellen: Eileiterzellen des Chinesischen Hamsters -S9: ohne Leberenzyme +S9: mit Leberenzymen, simuliert Stoffwechsel MiAd zeigt in vitro keine Chromosomenverändernde Wirkung Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety Report 15

16 Testergebnisse Latex And Nitrile Gloves Penetration Test Latex- und Nitril- Handschuhe in Chemikalienqualität zeigen keine Durchlässigkeit gegenüber MiAd Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Advance Safety Report 16

17 Zusammenfassung der Midori Green Advance Testergebnisse bezüglich der Mutagenität und Toxizität Midori Green Advance Ames Test Acute Oral Toxicity Test Mouse Bone Marrow Micronucleus Test Chromosome Aberration Test Nicht mutagen Nicht toxisch Nicht genotoxisch Nicht chromosomenverändernd Latex And Nitrile Gloves Penetration Durchdringt Handschuhe nicht Test Somit erbringt der Ersatzfarbstoff Midori Green Advance nachweisbar, dass er: Sicherer, als der zu ersetzende Stoff ist Die Testergebnisse sind nachvollziehbar und im Detail öffentlich gemacht worden Das entsprechende MSDS spiegelt die Testergebnisse wieder 17

18 Midori Green Advance Zusammensetzung und die Entsorgung Wässrige Lösung mit anorganischen und organischen Bestandteilen Unterliegt der Wassergefährdungsklasse 1 (schwach wassergefährdend weitere Infos folgen Folie 19) und muss daher wie normaler Laborabfall entsorgt werden Nicht giftig, karzinogen oder mutagen 18

19 Wassergefährdungsklasse (WGK) Der Begriff Wassergefährdungsklasse stammt aus der Verwaltungsvorschrift wassergefährdende Stoffe (VwVwS). Darin wird die Wassergefährdung von Stoffen näher bestimmt, teils als Stofflisten der Klassen, teils als vorgeschriebene Einstufungsverfahren. Diese Vorschrift leitet sich aus 19g Abs. 5 des Wasserhaushaltsgesetzes (WHG) in der vor dem 1. März 2010 gelten Fassung ab. Die potentiell wassergefährdenden Stoffe werden in 3 Klassen unterteilt: WGK 1 = schwach wassergefährdend WGK 2 = wassergefährdend WGK 3 = stark wassergefährdend 19

20 Wassergefährdungsklasse (WGK) Nachfolgend Folie 21 eine häufig eingesetzte Chemikalie in naturwissenschaftlichen Laboren, die ebenfalls der WGK1 unterliegt (Methanol) 20

21 Beispiel Entsorgung Methanol Gefährlicher Abfall nach Abfallverzeichnis-Verordnung (AVV) In Sammelbehälter für halogenfreie organische Lösemittel und Lösungen halogenfreier organischer Stoffe geben. Einsatz von Methanol im Labor z.b. : Transferpuffer, Coomassie-Lsg, Fixierung von Zellen/Gewebeschnitte u.s.w. Umweltschutzmaßnahmen: Nicht in die Kanalisation oder in Gewässer gelangen lassen 21

22 Sicherheitstests an Midori green Direct zur Überprüfung der Mutagenität und Toxizität 1. Latex Gloves Penetration Test 2. Cell staining test 3. Ames Test 4. Aquatic Toxicity Test 5. Corrosivity, Reactivity and Ignitability Tests 22

23 Testergebnis Latex Gloves Penetration Test Latexhandschuhe in Chemikalienqualität zeigen keine Durchlässigkeit gegenüber MiDi Aufgrund höherer Materialdichte gegenüber Latex wurden Nitrilhandschuhe nicht getestet Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Direct Safety Report 23

24 Testergebnis Cell staining HeLa-Zellen wurden mit SYBR-Green-(links) und Midori Green Direct- (rechts) Farbstoffen für 5/30 min inkubiert Midori Green Direct kann Zellmembranen nicht durchdringen Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Direct Safety Report 24

25 Testergebnisse Ames-Test Versuchsorganismus Salmonella TA98 +S9 +S9: mit Leberenzymen, simuliert Stoffwechsel Die Daten zeigen keinen mutagenen Effekt durch MiDi Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Direct Safety Report 25

26 Testergebnisse Ames-Test Salmonella Stamm TA1537 +S9 +S9: mit Leberenzymen, simuliert Stoffwechsel Die Daten zeigen keinen mutagenen Effekt durch MiDi Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Direct Safety Report 26

27 Testergebnis Aquatic Toxicity Versuchstiere Karpfenartige Fische (Pimephales promelas) 20 pro Konzentration MiDi nicht toxisch für Wasserlebewesen Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Direct Safety Report 27

28 Testergebnisse Corrosivity, Reactivity and Ignitability Tests Midori Green Direct ist nicht korrosiv und nicht gesunheitsgefährdend Ausführliches Testergebnis, siehe Midori Green Direct Safety Report 28

29 Zusammenfassung der Midori Green Advance Testergebnisse bezüglich der Mutagenität und Toxizität 29

30 Midori Green Direct Zusammensetzung und die Entsorgung Wässrige Lösung mit anorganischen und organischen Bestandteilen Unterliegt der Wassergefährdungsklasse 1 (schwach wassergefährdend) und muss daher wie normaler Laborabfall entsorgt werden Nicht giftig, karzinogen oder mutagen 30

31 Info zur Wassergefährdungsklasse 1 Alle durchgeführten Test zeigen deutlich, dass die Midori Green Farbstoffe sowohl ungiftig, als auch nicht karzinogen/mutagen sind. Ebenso konnte gezeigt werden, dass im Wasserlebende Tiere nicht durch diese Farbstoffe geschädigt werden. 31