Aufnahme einer Extinktionskurve. Themen. Prinzip. Material TEAS Photometrie, Extinktion, Verdünnung, Extinktionskurve
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- Peter Julius Böhme
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1 Aufnahme einer TEAS Themen Photometrie, Extinktion, Verdünnung, Prinzip Eine Farbstofflösung wird zunächst hergestellt und anschließend die Extinktion bei verschiedenen Wellenlängen gemessen. Anschließend kann aus den erhaltenen Werten eine erstellt werden. Material Studenten-Basis-Set 1 Mikroliterpipette µl Mikroliterpipette µl Reagenzglasgestell, PP, 12 Plätze Reagenzglas, d = 16 mm, l = 160 mm, 10 Stück Messpipette 10 ml, Teilung 0,1 ml Pipettierball Digitale Stoppuhr Laborschreiber, wasserfest Pipettenspitzen μl im Halter, 96 Stk Pipettenspitzen μl im Halter, Stk Einweghandschuhe, M, Latex, 100 Stk Einweg-Rührspatel, 500 Stk Halbmikro-Küvetten Küvettenständer Chemikalien 1 Azur-Eosin-Methylenblau-Lösung, 100 ml Wasser, destilliert, 5 l Laborausstattungs-Set 1 Photometer Abb. 1: P P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 1
2 TEAS Aufnahme einer Aufgabe Erstellen Sie die einer Giemsa-Lösung. Durchführung Probenvorbereitung Zunächst muss die Farbstofflösung verdünnt werden: - Für die Vorverdünnung werden 100 µl der Giemsa-Lösung mit 12 ml destilliertem Wasser gemischt. Aus der Vorverdünnung wird eine 1: 10 Verdünnung hergestellt: - Dazu müssen 1 Teil vorverdünnte Farbstofflösung mit 9 Teilen destilliertem Wasser gemischt werden. 1 Teil entspricht = 100 µl der Vorverdünnung sowie 9 Teile entsprechen = 900 µl destilliertem Wasser. Messung - Gerät einschalten: on/off Messung der Extinktion - Entsprechende Wellenlänge einstellen ( nm) - Leerwertküvette (nur destilliertes Wasser) in die Messzelle stellen, dann Referenz-Messung starten: Taste R drücken - Küvette mit Farbstofflösung in die Messzelle, Messung starten: Taste T drücken - Extinktion ablesen Diesen Ablauf (inklusiv Leerwertmessung!) für alle Wellenlängen wiederholen. - Gerät abschalten: on/off Grundlagen Um Proben quantitativ zu analysieren, benutzt man in klinisch-chemischen Laboratorien am häufigsten photometrische Messmethoden. In dieser Methode wird das durchgelassene Licht vom Photometer erfasst. Die Lichtdurchlässigkeit einer gefärbten Lösung ist bei einer geeigneten Wellenlänge von der Konzentration der Lösung abhängig. Die geeignete Wellenlänge ist in den Versuchen dieses Praktikums stets vorgegeben. Diese Vorübung ist konzipiert, das zugrunde liegende Prinzip zu verstehen und die Bedienung des Photometers zu erlernen. Auswertung Beispiel: Wellenlänge 470 nm 490 nm 520 nm 550 nm 580 nm 590 nm 680 nm 700 nm Extinktion 0,02 0,04 0,05 0,04 0,07 0,1 0,09 0,06 In unserem Beispiel ergab sich folgende Kurve: 2 PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P
3 Aufnahme einer TEAS Fragen - Warum wird die Farbstofflösung erst verdünnt? Die Absorptionsphotometrie gilt nur für stark verdünnte Lösungen! - Auf welche Wellenlänge würden Sie das Photometer einstellen, wenn die Giemsa-Lösung ein Farbindikator für die Konzentration eines Produktes wäre, dessen Konzentration Sie bestimmen wollen? 590 nm - Welcher Längenwellenbereich umfasst das für uns sichtbare Licht? Ca nm - Warum ist die Giemsa-Lösung blau? Licht mit einer Wellenlänge von nm wird von der menschlichen Auge als blau wahrgenommen. Dieser Wellenlängenbereich wird von der Giemsa-Lösung transmittiert. Die restlichen Anteile des Lichts werden hingegen absorbiert. P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 3
4 TEAS Aufnahme einer 4 PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P
5 Aufnahme einer TEAS Protokoll Sie können Ihre Ergebnisse in die folgende Tabelle eintragen. Wellenlänge 470 nm 490 nm 520 nm 550 nm 580 nm 590 nm 680 nm 700 nm Extinktion Zeichnen Sie Ihre Ergebnisse in einem Koordinatensystem! Fragen - Warum wird die Farbstofflösung erst verdünnt? - Auf welche Wellenlänge würden Sie das Photometer einstellen, wenn die Giemsa-Lösung ein Farbindikator für die Konzentration eines Produktes wäre, dessen Konzentration Sie bestimmen wollen? - Welcher Längenwellenbereich umfasst das für uns sichtbare Licht? - Warum ist die Giemsa-Lösung blau? P PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved 5
6 TEAS Aufnahme einer 6 PHYWE Systeme GmbH & Co. KG All rights reserved P
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