Unterscheidung von vakzinierten und infizierten Schweinebeständen durch Salmonellaspezifische

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1 Unterscheidung von vakzinierten und infizierten Schweinebeständen durch Salmonellaspezifische Antikörper mittels SALMOTYPE Pig STM-WCE ELISA Jörg Lehmann 1, Thomas Lindner 2, Thomas Kramer 1, Matthias Naumann und Jörg Gabert 1 1 Labor Diagnostik GmbH Leipzig, Leipzig; 2 Impfstoffwerk Dessau-Tornau GmbH, Rosslau; 3 Qualitype AG, Dresden

2 ... Salmonellenproblem??? Wie wär s mit Impfen?! Inaktivierte Vakzine Vorteile: - sicher - hohe Ig-Titer Nachteile: - schwache zelluläre Immunität - kurze Wirksamkeitsdauer - eingeschränkter Schutz (Stamm-abhängig) - wiederholte Applikation - hohe Dosen Attenuierte Lebend- Vakzine Vorteile: - starke zelluläre Immunität - lange Wirksamkeitsdauer - breiter Schutz Nachteile: - lebende Bakterien - Differenzierung zwischen Impf- und Wildtyp-Stamm ist erforderlich

3 Problem: Erkennung einer möglichen Infektion im geimpften Bestand 2 Lösungsansätze: Diskriminierung zwischen Salmonella-Impfstamm und -Wildstamm (z.b. Markervakzine) Exaktes serologisches Monitoring der Immunantwort nach Impfung (z.b. Salmotype Pig STM-WCE)

4 Testprinzip: Substrat (H 2 O 2 ) + Chromogen (TMB) Enzym (POD) Detektions-Ak-Enzym-Konjugat (z.b. Anti-Schwein-IgA POD) Testserum Salmonella-WCE-Ag

5 Basisvorausetzungen: Tiergruppen-spezifische Cut-off-Werte (SPF-Schweine, Ferkel, Läufer/Mastschweine, Zuchtsauen/-eber) anwendungsspezifische Untersuchung große Antigenbreite höhere analytische Sensitivität, bei ausreichend hoher Spezifität Erfassung der Immunglobulinklasse der Anti- Salmonellen-Antikörper Berücksichtigung des Antikörpertiters (Titration jeder Probe) präziser als Einpunktbestimmung

6 Auswertung: Referenzstandard-Methode Software SalmoSoft

7 Experimentelles Design: 1. Immunisierungs-/Challenge-Experiment mit SPF-Schweinen 4 Versuchsgruppen: Vor Challenge, 42. LT (Tag 21 post vacc.) Nach Challenge, 75. LT (Tag 7/12 post chall.) Kontrollgruppe Geimpfte Gruppe Kontrollgruppe Geimpfte Gruppe

8 Ergebnis: 1. Immunisierungs-/Challenge-Experiment mit SPF-Schweinen Erkennung STm-infizierter SPF-Schweine über die Detektion antigenspezifischer IgA-Antikörper P=0.001 P= P=0.001 P=0.005 Cut-off 1 Kontrolle geimpft Kontrolle geimpft vor Challenge nach Challenge Statistische Prüfung mittels u-test nach Mann u. Whitney

9 Experimentelles Design: 2. Immunisierungs-Feldexperiment 2 Versuchsgruppen: Kontrollgruppe (3 Blutungszeitpunkte) Geimpfte Gruppe Nach 1. Impfung Nach Boosterung (8 Blutungszeitpunkte)

10 Ergebnis: 2. Immunisierungs-Feldexperiment Kontrollgruppe geimpfte Gruppe Tag 0 Tag 4 p. vacc. 1. Immunisierung Tag 7 p. vacc.

11 Tag 14 p.vacc. Tag 9 p.vacc. Tag 11 p.vacc.

12 Tag 4 p.2. vacc. Tag 21 p.vacc. Tag 2 p. 2. vacc. 2. Immunisierung

13 Tag 11 p.2. vacc. Tag 7 p.2. vacc. Tag 9 p.2. vacc.

14 Tag 28 p.2. vacc. Tag 14 p.2. vacc. Tag 43 Tag 21 p.2. vacc.

15 Tag 64 Tag 42 p.2. vacc.

16 Zusammenfassung: Anwendung des Salmotype Pig STM-WCE gewährleistet eine detaillierte und präzise Erfassung der Immunantwort gegen Salmonella Typhimurium nach Impfung und Infektion Identifikation frischer Salmonellen-Infektionen über spezifische IgM-Antikörper Identifikation akuter Salmonellen-Infektionen über spezifische IgA-Antikörper bei geimpften und ungeimpften Tieren Salmonella-spezifischer IgG-Titer bleibt nach Immunisierung mit Lebendvakzine über längeren Zeitraum erhöht