Pharmazeutische Chemie. Bestimmung des Arzneistoffs Thiotepa und seines Metaboliten Tepa durch GC-MS

Transkript

1 A Pharmazeutische Chemie Bestimmung des Arzneistoffs Thiotepa und seines Metaboliten Tepa durch GC-MS Inaugural-Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Naturwissenschaften im Fachbereich Chemie und Pharmazie der Mathematisch-Naturwissenschaftlichen Fakultät der Westfälischen Wilhelms-Universität Münster vorgelegt von Martin Wilhelm Heuermann aus Hamm/Westf. 1999

2 Inhaltsverzeichnis I. Theoretischer Teil 1 Einleitung und Zielsetzung 2 2 Eigenschaften, Wirkung und Biotransformation Eigenschaften Wirkungsmechanismus Toxikologische Eigenschaften Anwendung Nebenwirkungen Biotransformation Besondere Vorsichtsmaßnahmen und Handhabung 9 3 Grundlagen der GC-MS (ION TRAP) Technik Trenntechniken und Geräteaufbau Aufbau der ION TRAP und Funktionsweise 11 4 Synthese des Hauptmetaboliten Tepa Synthese Aufreinigung des Rohprodukts Identifizierung des Syntheseprodukts GC-MS H-NMR C-NMR 21

3 5 Versuche zur Bestimmung von Thiotepa und Tepa durch GC-MS Methodenentwicklung [GC Parameter ] Auswahl der GC-Säule Auswahl und Präparierung des Liners Auswahl der Split Bedingungen Variation der Injektortemperatur Auswahl der Starttemperatur Variation der Aufheizgeschwindigkeit Methodenentwicklung [MS Parameter] Wahl des Extraktionsmittels Wahl der Quantifizierungsmassen Wahl des internen Standards Bestimmung des Verhältnisses von Plasma zum Extrak- 39 tionsmittel 5.7 Extraktionszusätze zum Plasma Versuche zur Aufkonzentrierung Zusammenfassung der Methodenentwicklung Empfindlichkeitsabnahme bei zunehmender Injektionszahl Gerätebedingte Artefaktbildung Dimerenbildung Massenverteilung im Peak Validierung der Methode Linearität Präzision und Richtigkeit Bestimmungsgrenze 59 6 Untersuchungen zu Hydrolyseprodukten in Humanurin Problemstellung Methodenentwicklung GC-MS Parameter 60 II

4 6.2.2 Alkylierende Aktivität Wahl der Detektionswellenlänge Absorptionsbeeinflussende Parameter Validierung der Extraktion von Thiotepa 66 und Tepa aus Humanurin Linearität Präzision und Richtigkeit Vergleich der alkylierenden Aktivität mit der extrahierbaren Menge Zersetzung bei erhöhter Temperatur 71 7 Direktinjektion von flüssigen Proben zur Untersuchung der Zer- 79 setzung von Tepa 7.1 Zersetzung bei ph 3, Verhalten in bidestilliertem Wasser 81 8 Zusammenfassung 85 II. Experimenteller Teil 1 Geräte Allgemeine Geräte GCQ LCQ 91 2 Erläuterungen Statistische Kenngrößen Verwendete Abkürzungen 92 in

5 3 Liste der Verbindungen und deren Abkürzung 94 4 Synthese des Hauptmetaboliten Tepa Synthese Aufreinigung des Rohprodukts Identifizierung des Syntheseprodukts GC-MS Elementaranalyse H-NMR C-NMR 98 5 Bestimmung von Thiotepa und Tepa aus Plasma durch GC-MS Methodenentwicklung [GC Parameter] Auswahl der GC Säule Auswahl und Präparierung des Liners Auswahl der Split Bedingungen Variation der Injektortemperatur Variation der Aufheizgeschwindigkeit Methodenentwicklung [MS Parameter] Wahl des Extraktionsmittels Wahl der Quantifizierungsmassen Wahl des internen Standards Bestimmung des Verhältnisses von Plasma zum Extrak- 110 tionsmittel 5.7 Extraktionszusätze zum Plasma Versuche zur Aufkonzentrierung Empfindlichkeitsabnahme bei zunehmender Injektionszahl Gerätebedingte Artefaktbildung Dimerenbildung Massenverteilung im Peak 123 IV

6 5.11 Validierung der Methode Linearität Präzision und Richtigkeit Untersuchungen zu Hydrolyseprodukten in Humanurin Methodenentwicklung Alkylierende Aktivität Wahl der Direktionswellenlänge Absorptionsbeeinflussende Parameter Validierung der Extraktion aus Humanurin Linearität Präzision und Richtigkeit Vergleich der alkylierenden Aktivität mit der extrahierbaren Menge Zersetzung bei erhöhter Temperatur Direktinjektion von wäßrigen Proben zur Untersuchungen der 145 Zersetzung von Tepa Literaturverzeichnis 147 v