Immunologie: Primärantikörper

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1 Immunologie: Primärantikörper Monoklonale Antikörper maßgeschneidert von der Peptid- oder Antigensynthese über die Antikörperproduktion zur Konjugation mit Detektionsreagenzien Die angebotenen Programme setzten sich aus verschiedenen Teilbereichen zusammen. Diese gliedern sich in: Immunisierung Fusion Analyse der Klone Reklonierung Produktion von Kulturüberstand Reinigung monoklonaler Antikörper Markierung Kopplung an Farbstoffe/Enzyme Fragmentierung von Antikörpern Bei den unten aufgeführten Dienstleistungen handelt es sich grundsätzlich um Standardleistungen. Darüber hinaus besteht jederzeit die Möglichkeit, ein Protokoll nach Ihren Wünschen und Vorstellungen zu erstellen. Für weitere Beratungsgespräche stehen wir Ihnen jederzeit gerne mit Rat und Tat zur Seite.

2 Komplettprogramme MONOKLONAL BASISPROGRAMM Immunisierung * 3 Balb/c Mäuse, je 4 Immunisierungen innerhalb von 3 Monaten, ELISA zur Bestimmung der Antikörper-Titer Fusion Milzzellen-Präparation der Maus mit dem höchsten Antikörper-Titer, Fusion, Aussaat in 96- well Platten, Selektion der Hybridzellen, 10 Platten gesamt Analyse Nachweis spezifischer Antikörper in Kulturüberständen, ELISA mit 1 Antigen, Versand von 20 Kulturüberständen mit der stärksten Immunreaktivität, Weiterzucht von 5 positiven Klonen, Versand von 5 vitalen bzw. (falls gewünscht) kryokonservierten Klonen gesamt: 6.340,- MONOKLONAL STANDARDPROGRAMM Immunisierung * 3 Balb/c Mäuse, je 4 Immunisierungen innerhalb von 3 Monaten, ELISA zur Bestimmung der Antikörper-Titer Fusion Milzzellen-Präparation der Maus mit dem höchsten Antikörper-Titer, Fusion, Aussaat in 96-well Platten, Selektion der Hybridzellen, 20 Platten gesamt Analyse Nachweis spezifischer Antikörper in Kulturüberständen, ELISA mit 1 Antigen, Versand von 30 Kulturüberständen mit der stärksten Immunreaktivität, Weiterzucht von 10 posi-tiven Klonen, Versand von 10 vitalen bzw. (falls gewünscht) kryokonservierten Klonen gesamt: ,- (*) Anmerkung: Sollte aufgrund niedriger Immunogenität des Antigens keines der Tiere einen ausreichend hohen positiven Titer entwickelt haben, kann der Herstellungsprozess hier gestoppt werden, ohne dass weitere Kosten entstehen.

3 INDIVIDUELLE SERVICE MODULE 1. IMMUNISIERUNG BALB/C MÄUSE Mausstamm: Balb/c (andere Stämme auf Anfrage); Dreifach-Nachimmunisierung über einen Zeitraum von 3 Monaten; ELISA zur Kontrolle des Serum-Antikörpertiters; bei paralleler Immunisierung mehrerer Tiere: Selektion des Tieres mit dem höchsten Antikörpertiter für die erste Fusion (*) (*) Anmerkung: Sollte aufgrund niedriger Immunogenität des Antigens keines der Tiere einen ausreichend hohen positiven Titer entwickelt haben, kann der Herstellungsprozess gestoppt werden, ohne dass weitere Kosten entstehen. Preis je Tier 342,- Die Weiterhaltung parallel immunisierter Tiere bei monatlicher Auffrischung der Immunisierung zwecks einer potentiellen weiteren Fusion ist möglich Preis je Tier und Monat 67,- jede weitere Serumprobe 25,- 2. FUSION Präparation der Milzzellen, Fusion mit der Maus-Myelomzellinie P3-X63-Ag8.653; Aussaat in 96-well Platten (i.d.r. werden bei einer Fusion 6-10 Platten ausgesät; zusätzliche Platten sind möglich); Selektion der Hybridomzellen Preis je 96-well Platte 354,- 3. ANALYSE

4 3. ANALYSE 3.1. Standardanalyse Nachweis spezifischer monoklonaler Antikörper in Kulturüberständen, ELISA von 96 Überständen mit 1 Antigen (Immunisierungs-Antigen); Kryokonservierung aller Antigenpositiven Kulturüberstände; Versand von 20 Kulturüberständen mit der stärksten Immunreaktivität Versand von 5 positiv getesteten, vitalen Klonen oder 5 kryokonservierten Klonen Preis je fusionierter Platte 278, Standardanalyse mit Kontrolle Nachweis spezifischer monoklonaler Antikörper in Kulturüberständen Doppel-ELISA mit 2 Antigenen (Immunisierungs-Antigen + Kontrolle) Kryokonservierung aller Antigenpositiven Kulturüberstände Versand von 20 Kulturüberständen mit der stärksten Immunreaktivität Versand von 5 positiv getesteten, vitalen Klonen oder 5 kryokonservierten Klonen Preis je fusionierter Platte 428, Einlagerung Lagerung eines kryokonservierten Zellklons in N2 (fl.) zur Sicherung Preis je Klon und Jahr 109, Anzucht Revitalisierung und Anzucht eines kryokonservierten Zellklons 3.5. Isotyp-Analyse Preis je Klon 158,- Preis je Antikörper 71,- 4. REKLONIERUNG Revitalisierung (falls kryokonserviert) und Anzucht des Zellklons; Reklonierung; Nachweis spezifischer monoklonaler Antikörper in Kulturüberständen durch ELISA mit dem Immunisierungs-Antigen; Versand des vitalen Zellklons oder des kryokonservierten Klons mit dem höchsten Antikörper-Titer an den Kunden Preis je reklonierter Hybridomlinie 1.883,- Preis für jede weitere Hybridomlinie parallel 537,- 5. PRODUKTION VON KULTURÜBERSTAND Vitale oder kryokonservierte Zellen werden vom Auftraggeber zur Verfügung gestellt und in Kultur genommen. Die Produktionsrate der Zellen kann ggf. ermittelt und optimiert werden. Produktion von Kulturüberstand (ZKÜ) bis 500 ml ZKÜ bis 1000 ml ZKÜ jede weitere 1000 ml ZKÜ 216,- 300, ,- 6. REINIGUNG MONOKLONALER ANTIKÖRPER

5 6. REINIGUNG MONOKLONALER ANTIKÖRPER 6.1. Affinitätsreiniung Reinigung monoklonaler Antikörper aus Kulturüberstand (ZKÜ); Ammoniumsulfat- Fällung des Kulturüberstands (Produktionsrate > 10 µg/ml); Affinitätschromatographie an Protein A bzw. G ; Aufkonzentrierung des Eluats; Dialyse; Proteinbestimmung; Reinheitsbestimmung durch FPLC-analytische Gelausschlusschromatographie; ausführliche Dokumentation Small scale Reinigung (bis zu 30 mg gereinigtem Antikörper): Basis-Preis (Reinigung von bis zu 30 mg aus bis zu 1000 ml ZKÜ) jeder weitere Liter ZKÜ (Reinigung bis insgesamt 30 mg) Large scale Reinigung (über 30 mg gereinigtem Antikörper) Preis je mg gereinigtem Antikörper (Basis-Preis bereits mit inbegriffen): Lyophilisierung zur Konservierung größerer MAK-Mengen auf Anfrage mg mg mg bulk 495,- + 98,- 16,- 15,- 12,- auf Anfrage 6.2. SDS-PAGE Gelelektrophorese 2 Minigele mit je 1 Standard und je bis zu 8 Proben/PAGE; Coomassie-Färbung; digitaler Print je PAGE 295,-

6 7. MARKIERUNG KOPPLUNG AN ANTIKÖRPER 7.1. Fluoreszenzfarbstoffe* Kopplung von FITC, Rhodamin, TRITC etc. an Antikörper, Abtrennung unkonjugierten Farbstoffs, Bestimmung des Markierungsgrads, Dokumentation mit Fluorescein, Rhodamin, TRITC und viele weitere Farbstoffe 208,- + 38,- *Kopplung weiterer Fluoreszenzfarbstoffe auf Anfrage 7.2. Phycobiliproteine (z.b. PE) Kopplung von PE an 1 mg Antikörper (~ 1:1), FPLC-chromatographische Reinigung, Bestimmung des Kopplungsgrads, ausführliche Dokumentation 675,- *Kopplung weiterer Phycobiliproteine auf Anfrage 7.3. Peroxidase* (POD) schonende Thioether-Kopplung mittels heterobifunktionaler Crosslinker, FPLCchromatographische Aufreinigung, Bestimmung des Kopplungsgrads, Dokumentation 495,- + 98, Alkalische Phosphatase* (AP) Thioether-Kopplung mittels heterobifunktionaler Crosslinker, AP > 7000 U/mg, FPLC-chromatographische Aufreinigung, Bestimmung des Kopplungsgrads, Dokumentation 595, ,- *weitere Enzyme auf Anfrage 7.5. Biotin oder LC-Biotin Thioether-Kopplung mittels heterobifunktionaler Crosslinker, FPLCchromatographische Aufreinigung, Bestimmung des Kopplungsgrads, Dokumentation 195,- + 32,-

7 8. FRAGMENTIERUNG VON ANTIKÖRPERN 8.1. Herstellung von Maus Fab-Antikörperfragmenten* Papain-Spaltung von bis zu 3 mg gereinigtem Maus-IgG; präparative Abtrennung der Bruchstücke und Isolierung der Fab-Fragmente; Aufkonzentrierung, Umpufferung und OD280-Bestimmung; FPLC-analytische Reinheitskontrolle durch Gelausschlusschromatographie; Bestimmung der Gesamtausbeute * Maus IgG1 auf Anfrage 8.2. SDS-Page Gelelektrophorese Analyse der Fragmentierungsprodukte über SDS-PAGE Gelelektrophorese; 2 Minigele mit je 1 Proteinstandard und je bis zu 8 Proben pro Gel 8.3. Lyophilisierung von affinitätsgereinigten Antikörpern pauschal 1.250,- je PAGE 295,- Probenvorbereitung (Dialyse), Lyophillisierung von bis zu 280 mg Antikörper je batch in Portionen von 1 mg, Etikettierung Preis pro batch auf Anfrage 9. TESTENTWICKLUNG < Entwicklung von maßgeschneiderten immunologischen Tests (ELISA, Streifentests, Beads, Schnelltests,...) < Test-Optimierung < Test-Validierung < OEM-Produktion auf Anfrage Die Preise (Stand März 2009) verstehen sich zzgl. der ges. MWSt. und der Transportkosten. Lieferzeiten nach Absprache. Version 005, letzte Änderung: 18/03/2009 Firma: dianova Gesellschaft für biochemische, immunologische und mikrobiologische Diagnostik mbh Anschrift: Warburgstraße 45, D Hamburg Handelsregister: Amtsgericht Hamburg, Abteilung B, HRB Geschäftsführer: Jürgen A. Frerichs

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