Die Öffnung des Pyrazolinon-Heterozyklus im Stoffwechsel von Metamizol und Phenazon

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1 Die Öffnung des Pyrazolinon-Heterozyklus im Stoffwechsel von Metamizol und Phenazon Chemische und biochemische Untersuchungen zu Bildung und Verbleib potentiell reaktiver Metabolite dieser Arzneistoffe Von der Gemeinsamen Naturwissenschaftlichen Fakultät der Technischen Universität Carolo-Wilhelmina zu Braunschweig zur Erlangung des Grades einer Doktorin der Naturwissenschaften (Dr. rer. nat.) genehmigte Dissertation von Petra Dyckhoff aus Nordhorn

2 Inhalt SVERZEICHNIS. 1. ALLGEMEINERTEIL Einleitung Pyrazolinon-Derivate 1.2 Pharmakologie der Pyrazolinon-Derivate Pharmakodynamik Unerwünschte Arzneimittelwirkungen (UAW) Metabolismus Pharmakokinetik und Metabolismus von Metamizol Metabolismus von Phenazon Problemstellung und Zielsetzung Ausgangslage Problemstellung Zielsetzung Übersicht der verwendeten Methoden ERGEBNISSE UND DISKUSSION Methyl-2-phenyl-3,4-dioxopyrazolin Untersuchungen zur Stabilität im wässrigen Medium Charakterisierung im physiologischen System Lipophilie Proteinbindung Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure Analytik von 2-Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure HPLC-Analytik Probenaufarbeitung 38

3 Wiederfindung aus biologischer Matrix Proteinfällung durch methanolische Zinksulfat-Lösung Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure im Metamizol-Stoffwechsel In vivo-untersuchungen Ex vivo-untersuchungen am Modell der isolierten, Hämoglobin-frei perfundierten Rattenleber Diskussion der Ergebnisse Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure im Phenazon-Stoffwechsel In vivo-untersuchungen Ex vivo-untersuchungen am Modell der isolierten Hämoglobin-frei perfundierten Rattenleber Diskussion der Ergebnisse Zum Verbleib von 2-Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure Stabilität von 2-Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure in vitro Stabilität von 2-Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure ex vivo Diskussion der Ergebnisse Rubazonsäure und Methylrubazonsäure Analytik von Rubazonsäure und Methylrubazonsäure HPLC-Analytik Probenaufarbeitung Untersuchungen zur Stabilität von Rubazonsäure und Methylrubazonsäure Methylrubazonsäure-Bildung im Phenazon-Stoffwechsel Rubazon- und Methylrubazonsäure-Bildung im Metamizol-Stoffwechsel Massenspektrometrische Untersuchungen zum Nachweis intakter Phase-II-Metabolite Mipafox Hemmversuche Bestimmung der Cholinesteraseaktivität in Rattenplasma Hemmung der Ratten-Cholinesterase durch Mipafox in vitro Hemmung der Ratten-Cholinesterase durch Mipafox in vivo Stoffwechselversuche unter Mipafox Belastung an Ratten Synthese der Referenzsubstanzen ZUSAMMENFASSUNG 115

4 III 4. EXPERIMENTELLERTEIL Proteinbindung Bindung an Rinderserumalbumin Bindung an Rattenserumprotein Verteilungskoeffizient Spektroskopische Untersuchungen zur hydrolytischen Ringöffnung des Pyrazolinon-Heterozyklus Qualitative Untersuchungen Quantitative Untersuchungen Bestimmung des molaren Absorptionskoeffizienten Test der Übertragbarkeit der Phenylhydrazin-Gruppe von 2-Oxo-3-pheny lhy drazono-buttersäure auf Ketone In vivo-stoffwechselversuche Human-Versuch Ratten-Versuche Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure-Ausscheidung im Urin Cholinesterasehemmung durch Mipafox Ex vivo-stoffwechselversuche Modell der isolierten Hämoglobin-frei perfundierten Rattenleber Organpräparation Perfusions-Apparatur Perfusionsversuche Konjugat-Hydrolyse Saure Hydrolyse Enzymatische Hydrolyse Untersuchungen zur Stabilität von Rubazonsäure und Methylrubazonsäure HPLC-Analytik Oxo-3-phenylhydrazono-buttersäure(OPBS) 134, Festphasenextraktion zur OPBS-Analytik 135

5 jv Proteinfällung durch methanolische Zinksulfatlösung HPLC-Chromatographie zur OPBS-Analytik Methylrubazonsäure (MRS) Festphasenextraktion zurivirs-analytik HPLC-Chromatographie zur MRS-Analytik Rubazonsäure (RS) und Methylrubazonsäure (MRS) Festphasenextraktion zur RS-und MRS-Analytik HPLC-Chromatographie zur RS-und MRS-Analytik Dünnschichtchromatographie Massenspektrometrie Synthese der Referenzsubstanzen Chemikalien und Pufferlösungen Statistik Spektren: IR, EI-MS LITERATUR ANHANG Abkürzungen und Symbole Formelbilder und Nomenklatur Lebenslauf 169

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