Kontrolle des murinen Cytomegalovirus durch. y6 T-Zellen
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- Stefanie Charlotte Bachmeier
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1 Kontrolle des murinen Cytomegalovirus durch y6 T-Zellen Der Naturwissenschaftlichen Fakultät der Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg zur Erlangung des Doktorgrades Dr. rer. nat. vorgelegt von Sabrina Seil aus Wolfenbüttel
2 Inhaltsverzeichnis 1 Zusammenfassung 1 2 Summary 2 3 Einleitung Das Cytomegalovirus (CMV) Klassifizierung und Morphologie Epidemiologie, Pathogenese und klinische Relevanz Die Immunantwort gegen CMV Angeborene Immunität gegen CMV Die adaptive zelluläre Immunantwort gegen CMV Die adaptive humorale Immunantwort gegen CMV y6t-zellen y6 T-Zell-Entwicklung Das y6 T-Zell-Rezeptor-Repertoire Diversität des ystcr-repertoires Der y6 T Zell-Rezeptor Antigen-Erkennung Effektorfunktionen von y6 T-Zellen Immunosurveillance durch y6 T-Zellen y6 T-Zellen und CMV 24 4 Fragestellung 26 5 Ergebnisse Vordaten: Schutz durch y6 T-Zellen aus CDS'^JHT-Donoren Schutz durch y6 T-Zellen aus TCRa^'-Donoren Etablierung einer in i/ivo-cd4-/cd8-depletion Schutz durch y6 T-Zellen aus naiven und infizierten C57BL/6-Donoren Infektionsverlauf in TCRa^'-Mäusen Sekundärinfektion von TCRa~'~-Mäusen Verlauf einer MCMV-Infektion in TCRS'^-Mäusen Numerische und phänotypische Veränderungen von y6 T-Zellen nach Infektion Absolute y6 T-Zell-Zahlen in CDS'jHT-Mäusen nach MCMV-Infektion 40 I
3 5.8.2 Proliferation der y6 T-Zellen in CDS^'JHT-Mäusen nach MCMV-Infektion Phänotypische Veränderungen der y6 T-Zellen nach MCMV-Infektion Verlauf des Virustiters in CDS'^JHT- und C57BL/6-Mäusen Stabilität des durch MCMV hervorgerufenen Phänotyps Transfer-Experimente Transfer von immunen CD8 + aß T-Zellen oder Immunserum IL-33 als potentieller Aktivator der y6 T-Zellen y6 T-Zell-Rezeptor-Repertoire Durchflusszytometrische Analyse Next Generation Sequencing (NGS) Effektorfunktionen der yß T-Zellen gegen MCMV IFN-y und IL-17 als potentielle Effektormoleküle Perforin als potentielles Effektormolekül 85 6 Diskussion Schutz durch y6 T-Zellen Gedächtnisfunktion der y6 T-Zellen Veränderungen der y6 T-Zell-Population nach MCMV-Infektion Veränderungen des y6 T-Zell-Rezeptor-Repertoires Rolle des TCR Effektormechanismen y6 T-Zellen als zelluläre Therapie Zusammenfassung und Ausblick Material Chemikalien und Reagenzien Zellkulturreagenzien Plastik- und Verbrauchsmaterialien Kits Puffer, Lösungen und Medien Biologische Materialien Versuchstiere Zelllinien Viren Antikörper für Durchflusszytometrie In vivo applizierte Antikörper 114 II
4 7.9 Sonstige Antikörper Konjugate Oligonukleotide Geräte Software Methoden Zellkulturverfahren Kultivierung adhärenter Zellen Gewinnung von Croma 101-Zellkulturüberständen Molekularbiologische Methoden Isolierung von RNA cdna-synthese Polymerase-Kettenreaktion (PCR) Next Generation Sequencing (NGS) DNA-Gelelektrophorese Proteinbiochemische Methoden Herstellung von Zelllysaten Quantitative Bestimmung von Proteinkonzentrationen Virologische Methoden In iz/fro-amplifikation und Aufreinigung von MCMV-Virionen Bestimmung des Titers der MCMV-Präparationen Bestimmung des Virustiters in Organen Immunbiologische Methoden Durchflusszytometrie von murinen Zellen aus Milz, Lymphknoten, Lunge und Leber Durchflusszytometrie von murinem Vollblut Färbung von Vy Intrazelluläre Cytokin-Färbung Intrazelluläre Färbung von BrdU Analysen zur Zellzahlbestimmung mittels Trucount Beads FACS (Fluorescence-activated cell sorting) Depletion von Zellen mit MACSiBead Particles Tierexperimentelle Techniken Infektion In v/vo-applikation depletierender oder blockierender Antikörper Blutentnahme 133
5 8.6.4 In v/vo-biolumineszenz-analyse Adoptiver Zell- und Serumtransfer Isolation und Aufreinigung muriner Zellen Aufreinigung von murinen Milz-Zellen Aufreinigung von murinen Lymphknoten-Zellen Aufreinigung von murinen Leber- und Lungen-Zellen Literaturverzeichnis Abkürzungsverzeichnis Abkürzungen Einheiten Vorsatzzeichen Griechische Buchstaben Danksagung 157 IV
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