Auf der Suche nach der Wundermedizin

Transkript

1 Auf der Suche nach der Wundermedizin Experimente im Schullabor 1

2 Herausgeber Novartis Pharma AG, CH-4002 Basel Autoren: Dr. Gesche Standke und Dr. Christiane Röckl Michel Zeichnungen: Fonds der Chemischen Industrie, Frankfurt a. Main Pharma Information, Basel Dr. Marcus Baumann Kontaktadresse: Novartis Pharma AG Dr. Christiane Röckl Michel Biotech Labor WKL A Postfach CH-4002 Basel Tel. 061/ Internet: Nachdruck mit Einverständnis des Herausgebers und Quellennachweis erlaubt. Kopien für den Schulgebrauch sind erwünscht. (Ausgabe 2012; Praktikum im Biotech Labor) 2

3 Inhalt Experiment A... 4 Experiment B... 5 Experiment C: Isolieren und Sichtbarmachen der eigenen DNA... 6 Labormaterialien

4 Experiment A Arbeitsweise: 1. Beschriften Sie die bunten Eppendorfröhrchen wie folgt: rot WM = Wundermedizin blau P1 = Pflanze 1 gelb P2 = Pflanze 2 grün P3 = Pflanze 3 Alle Deckel markieren Sie mit Ihrem Gruppenzeichen (zum Beispiel *,X, oder etc.) 2. Pipettieren Sie 10 µl jeder DNA-Probe aus der Stammlösung in das entsprechende farbige Eppendorfröhrchen. Die Stammlösungen stehen auf Eis. Verwenden Sie für jede DNA-Probe eine frische Pipettenspitze. 3. Pipettieren Sie 10 µl des Enzyms Nci1 in jedes Eppendorfröhrchens. Verwenden Sie für jede Probe eine frische Pipettenspitze. 4. Verschließen Sie die Eppendorfröhrchen fest und mischen Sie die Komponenten, indem Sie mit dem Finger gegen die Gefäße schnipsen. 5. Die Eppendorfröhrchen werden kurz zentrifugiert, damit sich alle Flüssigkeit am Boden des Gefässes sammelt. Achtung: Die Zentrifuge wird nur von der Kursleiterin bedient. 6. Setzen Sie die Eppendorfröhrchen in den Thermoblock und inkubieren Sie 45 Minuten bei 37 C. 4

5 Experiment B 1. Die Eppendorfröhrchen werden kurz zentrifugiert, damit sich alle Flüssigkeit am Boden des Gefässes sammelt. Achtung: Die Zentrifuge wird nur von der Kursleiterin bedient. 2. Geben Sie 5 µl Ladepuffer in jedes Eppendorfröhrchen, wobei Sie für jede Probe eine neue Pipettenspitze verwenden. Verschließen Sie die Eppendorfröhrchen und mischen Sie den Inhalt durch leichtes Schnipsen mit den Fingern gegen die Gefäße. 3. Zentrifugieren Sie die Eppendorfröhrchen kurz. 4. Pipettieren Sie jeweils 20 µl von jeder Probe in der folgenden Reihenfolge in 4 Geltaschen, wobei Sie für jede Probe eine frische Spitze verwenden: Tasche 1: WM Tasche 2: P1 Tasche 3: P2 Tasche 4: P3 5. Die Kursleiterin schliesst die Elektrophorese-Apparatur an das Spannungsgerät an und startet die Elektrophorese. 6. Die Elektrophorese dauert je nach Stromspannung Minuten! 7. Am Ende der Elektrophorese schaltet die Kursleiterin das Netzgerät ab. Achtung: Tragen Sie bei diesem und bei den nächsten Schritten Handschuhe! 8. Nehmen Sie den Gelschlitten mit dem Gel heraus. Schieben Sie das Gel vorsichtig in die Schale mit der blauen Färbelösung. 9. Färben Sie das Gel 10 Minuten, indem Sie die Schale hin und wieder kreisend bewegen. 10. Giessen Sie die Färbelösung zurück in die Flasche (am Waschbecken). Entfärben Sie nun das Gel 3 4 mal mit warmen, sauberen Wasser. Wenn das Wasser nur noch wenig Farbe enthält lassen Sie das Gel mit Wasser bedeckt 10 Minuten oder länger stehen. 11. Vergleichen Sie die Bandenmuster Ihrer Proben und identifizieren Sie die richtige Pflanze. Die Wundermedizin stammt aus Samenkörnern der Pflanze 5

6 Experiment C: Isolieren und Sichtbarmachen der eigenen DNA In den Experimenten A und B haben Sie DNA verwendet, die vom Schullabor-Team aus Bakterien isoliert wurde. In diesem Experiment isolieren Sie Ihre eigene DNA. Arbeitsweise: 1. Nehmen Sie ein Eppendorfröhrchen mit Lysepuffer und beschriften Sie es mit Ihren Initialen. 2. Schaben Sie die Innenseiten Ihrer Wangen 1 Minute lang mit der Bürste ab. 3. Stecken Sie die Bürste mit den Wangenzellen in das Eppendorfröhrchen mit dem Lysepuffer. Drehen Sie die Bürste und streifen Sie die Borsten am Gefässrand ab. Werfen Sie die Bürste in den Entsorgungsbeutel. 4. Pipettieren Sie 20 µl Protease in das Eppendorfröhrchen. Schliessen Sie das Röhrchen und kehren Sie es zum Mischen 5 Mal um. 5. Stellen Sie das Eppendorfröhrchen 5 Minuten bei 55 C in den Thermoblock. 6. Pipettieren Sie 20 µl NaCl-Lösung in das Röhrchen. Schliessen Sie das Röhrchen und kehren Sie es zum Mischen 5 Mal um. 7. Nehmen Sie ein mit Ethanol gefülltes Reagenzglas. Giessen Sie den Inhalt des Eppendorfröhrchens langsam in das Reagenzglas mit Ethanol. Halten Sie das Röhrchen dabei schräg. Werfen Sie das leere Eppendorfröhrchen in den Entsorgungsbeutel. 8. Verschliessen Sie das Reagenzglas mit dem Stopfen und stellen Sie es so in den Styroporständer. Lassen Sie die Mischung 5 Minuten ganz in Ruhe stehen. 9. Mischen Sie, indem Sie das Röhrchen 5 Mal langsam umkehren. 10. Im faserigen weissen Material befindet sich Ihre DNA! 11. Wenn Sie Ihre DNA mitnehmen möchten, drücken Sie den Stopfen wieder fest zu. Nehmen Sie ein Stück Parafilm und dichten Sie damit den Verschluss nochmals ab. 12. Oder: Leeren Sie das Reagenzglas in das Becherglas aus und werfen Sie das leere Reagenzglas in den Entsorgungsbeutel. 6

7 Labormaterialien 1.5mL 2mL 11 Eppendorfröhrchen Reagenzglas Pipettenspitze Mikroliterpipetten Zentrifuge Thermoblock Becherglas Gel-Elektrophoresekammer Spannungsgerät Rack 7