Ringversuch zur Qualitätssicherung in der Interphase-FISH-Diagnostik in der Tumorzytogenetik 2013 (QUITZ)

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1 Ringversuch zur Qualitätssicherung in der Interphase-FISH-Diagnostik in der Tumorzytogenetik 2013 (QUITZ)

2 Organisation - Ablauf Seit 2012 wird der RV Tumor-FISH durch den BVDH organisiert, dieser wird vollständig über die Website des BVDH abgewickelt Am wurde das RV-Informationsschreiben, das RV-Anschreiben, der Einsendeschein zu der zu untersuchenden Probe sowie der Auswertebogen für die Gutachter auf die Website des BVDH gestellt und diese zur Anmeldung für den Ringversuch frei geschaltet

3 Organisation - Ablauf Bis zum Anmeldeschluss am hatten sich 49 Labore angemeldet Ein weiteres Labor meldete sich im weiteren Verlauf an Die Aussendung des Materials erfolgte am Insgesamt wurden 50 Proben versendet Alle 50 Labore haben Befunde über die Website eingereicht

4 Fragestellung

5 Bewertungskriterien

6 Probenmaterial Es wurden periphere Blutproben von zwei Patienten mit CML zur Herstellung der Ringversuchproben verwendet Das periphere Blut der ausgewählten Patienten wurde zytomorphologisch untersucht und die Diagnose einer CML gestellt Das periphere Blut wurde nach Kurzzeitkultivierung (16h) ohne Zugabe von Colcemid nach einem Standard- Protokoll für Zytogenetik aufgearbeitet (Hypotone KCl- Lösung, Fixation mit Methanol/Eisessig 3:1)

7 Probenmaterial - Validierung Im MLL wurden zur Validierung Fluoreszenz in situ Hybridisierungen an peripheren Blut-Ausstrichen sowie an fixierten Zellen jedes einzelnen Patienten mit Sonden zum Nachweis eines BCR-ABL- Rearrangements (MetaSystems und Abbott) sowie 4 verschiedenen Sonden zum Nachweis einer TP53-Deletion (MetaSystems und Abbott) durchgeführt Alle Präparate wurden von zwei Untersuchern ausgewertet In allen Präparaten wurde ein BCR-ABL-Rearrangement in 95-99% der Zellen nachgewiesen In allen Präparaten fand sich kein Hinweis auf das Vorliegen einer TP53-Deletion Die beiden Patientenproben wurden gepoolt und nochmals im MLL mit Sonden für BCR-ABL und TP53 hybridisiert und ausgewertet. Die Ergebnisse entsprachen denen der Einzelanalysen Außerdem wurde jeweils ein Aliquot von 0,8 ml an die Labore in Kiel und Göttingen zur externen Validierung versandt

8 Externe Validierung

9 Gutachter-Gremium RV-Leiterin: PD Dr. med. Claudia Haferlach, MLL - Münchner Leukämie Labor Gutachter: Dr. rer. nat. Sönke Arps, MVZ genteq GmbH, Hamburg Prof. Dr. med. Detlef Haase, Abteilung für Hämatologie und Onkologie, Georg-August Universität Göttingen Dr. med. Lana Harder, Institut für Tumorgenetik Nord, Kiel Prof. Dr. Jürgen Kunz, Laborleitung Zytogenetik, IMMD Institut für Medizinische Molekular Diagnostik GmbH, Berlin Dr. rer. nat. Brigitte Mohr, Medizinische Klinik und Poliklinik 1, Zytogenetiklabor, Universitätsklinikum Dresden Dr. Antje-Friederike Pelz, Tumorzytogenetisches Labor, Institut für Humangenetik Medizinische Fakultät der Otto-von-Guericke-Universität, Magdeburg Prof. Dr. med. Harald Rieder, Institut für Humangenetik, Universitätsklinikum Düsseldorf Dr. rer. nat. Elisabeth Schrörs, MVZ Dortmund Dr. Eberhard & Partner, Dortmund Prof. Dr. med. Reiner Siebert, Institut für Humangenetik, Universitätsklinikum Schleswig-Holstein, Campus Kiel Dipl. biol. Friedel Wenzel, Spezialist Medizinisch-genetische Analytik FAMH, Abt. Medizinische Genetik, UKBB, Basel

10 Begutachtungsprozess erste Telefonkonferenz der Gutachter zur Abstimmung der Vorgehensweise bei der Begutachtung zweite Telefonkonferenz Unklarheiten bei der Bewertung diskutiert und gemeinsame Entscheidung des Gutachtergremiums zur Bewertung getroffen Zusammenführung der Bewertung der beiden Gutachter durch die Ringversuchleiterin

11 Bereitstellung der Ergebnisse Teilnahmebescheinigungen am Ringversuch werden vom BVDH versandt sofern die Rechnung für die Teilnahme am Ringversuch beglichen wurde (100,00 EUR für BVDH-Mitglieder und 125,00 EUR für Nicht- Mitglieder zzgl. 19 % MwSt) Präsentation der anonymisierten Gesamt-Ergebnisse auf der BVDH Website unter Ringversuche abgeschlossen Individuelle Ergebnisse sind für jedes Labor unter dem eigenen Login als Datei abrufbar

12 FISH Ringversuch (QUITZ) 2013 Gesamtauswertung: FISH Ringversuch 2013 Teilnehmer: 50 Maximale Punktzahl: Median =

13 FISH Ringversuch (QUITZ) 2013 Gesamtauswertung: FISH Ringversuch 2013 Teilnehmer: 50 Maximale Punktzahl: Median = x 82 Punkte 2 x 81 Punkte 14 x 80 Punkte 1 x 79 Punkte 6 x 78 Punkte 1 x 77 Punkte 1 x 76 Punkte 1 x 67 Punkte 1 x 57 Punkte 1 x 53 Punkte 1 x 49 Punkte % 4% 28% 2% 12% 2% 2% 2% 2% 2% 2%

14 FISH Ringversuch (QUITZ) 2013 Auswertung: Allgemeiner Teil Teilnehmeranzahl: 50 Maximale Punktzahl: x 5 Punkte 50 x 5 Punkte x 25 Punkte 47 x 25 Punkte x 0 Punkte 0 0 BCR-ABL-Rearrangement TP53-Deletion BCR-ABL-Rearrangement TP53-Deletion 96% 4% 98% 2% 96% 4% 98% 2% Fragestellung: Anzahl der analysierten Kerne Fragestellung: Ergebnis Max. Punktzahl: 10 P (Je richtiges Ergebnis 5 P) Max. Punktzahl: 50 P (Je richtiges Ergebnis 25 P)

15 FISH Ringversuch (QUITZ) 2013 Auswertung: Allgemeiner Teil Teilnehmeranzahl: 50 Maximale Punktzahl: Fragestellung: Anzahl der analysierten Kerne max. 10 P Fragestellung: Ergebnis max. 50 P

16 FISH Ringversuch (QUITZ) 2013 Auswertung: Gesamt - Formaler Teil Teilnehmeranzahl: 50 Maximale Punktzahl: Material-/Eingangsdatum Art des Untersuchungsmaterials Bearbeitungszeit Patientendaten: Name, Vorname, Geburtsdatum Korrekte Angabe des Adressaten/Einsender Auftrag und Fragestellung Datum des Berichts/Gutachtens Beschreibung Unterschriften/Freigabe durch verantwortliche Person, Angaben zu Hersteller Unterschriften/Freigabe durch verantwortliche Person

17 FISH Ringversuch (QUITZ) 2013 Auswertung: Bearbeitungszeit Teilnehmeranzahl: 50 Maximale Punktzahl: % 22% 14% 80% 10% 10% 0 < 7 Tage (4 P) 7-14 Tage ( 2 P) > 14 Tage (0 P)

18 FISH Ringversuch (QUITZ) 2013 Auswertung: Formaler Teil Teilnehmer: 50 Maximale Punktzahl: Material-/Eingangsdatum (2 P) 3. Material- /Eingangsdatum 4. Art des Untersuchungsmaterials (2 P) 5. Bearbeitungszeit (4 P) 5. Bearbeitungszeit 6. Patientendaten: Name, Vorname, Geburtsdatum ( 2P) 7. Korrekte Angabe des 7. Korrekte Angabe des Adressaten/Einsender (2 P) Adressaten/Einsender 8. Auftrag und Fragestellung (2 P) 9. Datum des Berichts/Gutachtens (2 P) 9. Datum des Berichts/Gutachtens 10. Beschreibung der DNA-Sonden (4 P) 11. Unterschriften/Freigabe durch verantwortliche Person (2 11. P) Unterschriften Punkte 2 Punkte 1 Punkt 0 Punkte

19 FISH Ringversuch (QUITZ) P

20 Ergebnisse Zusammenfassung Alle Labore erkannten das Vorliegen eines BCR-ABL- Rearrangements Der Anteil an Zellen mit BCR-ABL-Rearrangement wurde im Median mit 89% angegeben Schwankungsbreite % atypische BCR-ABL-Signakonstellationen (u.a. zusätzliche BCR-ABL Kolokalisationssignale) wurden von 5 Laboren angegeben. Bei zwei Laboren war die BCR-ABL-Signalkonstellation nicht ersichtlich. 47/50 Laboren gaben richtig an, dass keine TP53- Deletion vorlag 3/50 Laboren berichteten über das Vorhandensein einer TP53-Deletion (in 8%, 13% bzw. 14% der Kerne)

21 Anteil BCR-ABL+ Zellen Auswertung FISH Ringversuch 2013 Teilnehmer: 50 Anteil BCR-ABL+ Zellen (in %) Median: 89%

22 Hybridisierungseffizienz Auswertung FISH Ringversuch 2013 Hybridisierungseffizienz BCR-ABL und TP53 Teilnehmer: 50 % Kerne ohne Signale Hybridisierungseffizienz BCR-ABL Hybridisierungseffizienz TP53

23 erwartetes Ergebnis Nachweis eines BCR-ABL-Rearrangements in mehr als 80% der Kerne Kein Nachweis einer TP53-Deletion Interpretation: nach ISCN Diagnose CML bestätigt - Kein Hinweis auf eine Blastenkrise, jedoch Ausschluß einer Blastenkrise nicht möglich - Empfehlung weiterer Untersuchungen, z. B. Chromosomsenanalyse, Zytomorphologie nuc ish(abl1x3),(bcrx3),(abl1 con BCRx2)[85/100],(TP53,NF1)x2[100] oder nuc ish 9q34(ABL1x3),22q11(BCRx3),(ABL1 con BCRx2)[85/100],17p13(TP53x2),17q11(NF1x2)[100]

24 Anmerkung der Gutachter Häufige Kritikpunkte: Fehlende Interpretation des Ergebnisses Nicht korrekte oder fehlende ISCN-Formel

25 RiLiBÄK

26 Richtlinien Leitlinien Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung, Deutsches Ärzteblatt 108, 43, A2298-A2304, zweijährige Übergangsfrist endet am Guidelines for Quality Assurance for acquired cytogenetics, ECA Newsletter 2013, 7-21 S2 Leitlinie der GfH, BVDH, Med Genetik 2011, 23,

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