3,58 g 0,136 g. ad 100 ml

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1 9 Anhang 9.1 Rezepturen der Puffer und Lösungen Vorbereitung der Proben zur Extraktion Coon s-puffer (0,1 M, ph 7,2-7,6) Na 2 HPO 4 x 12 H 2 O KH 2 PO 4 Aqua dest. 3,58 g 0,136 g 8,77 g Aufbereitung der Pferdekotproben -Saccharose-Lösung Saccharose H 2 O 2880 g 2000 g ad 8000 ml DNA-Extraktion Die DNA-Extraktion erfolgte mit den kommerziell erhältlichen Test-Kits QIAamp DNA Blood Mini Kit, Dneasy Tissue Kit und QIAamp DNA Stool Mini Kit der Firma Qiagen (Hilden, Deutschland). Alle notwendigen Reagenzien zur Durchführung einer Extraktion waren im Kit enthalten PCR 10x PCR-Puffer (ph 8,3) 100 mm 1,211 g 500 mm KCL 3,728 g 1 % Triton X ml DNAase u. RNAase freies Aqua dest. 69

2 50 mm-mgcl 2 MgCl 2 DNAase u. RNAase freies Aqua dest. 0,476 g Elektrophorese 10x Elektrophorese-Puffer (ph 8,0) NaH 2 PO 4 EDTA Aqua dem. 43,6 g 41,4 g 3,72 g ad 1000 ml Zur Herstellung von 1x Elektrophorese-Puffer wurden 50,0 ml 10x Elektrophorese-Puffer mit 450,0 ml Aqua dem. gemischt. Der Puffer wurde bei 4 C aufbewahrt. Probenpuffer für die Gelelektrophorese 4x TBE-Puffer FICOLL- 400 SDS Bromphenolblau 10,0 ml 10 % (w/v) 0,4 % (w/v) 8,0 mg 10x TBE-Puffer (ph 8,1) zur Herstellung von Probenpuffer Borsäure EDTA MgCl 2 x 6H 2 O Aqua dem. 121,1 g 61,8 g 7,44 g 10,165 g ad 1000 ml 70

3 DNA-Marker DNA Marker 100 bp 50 µl Probenpuffer 300 µl DNAase u. RNAase freies Aqua dest. 650 µl Ethidiumbromid Zur Herstellung der Stammlösung wurden 10 mg Ethidiumbromidpulver in 1 ml DNAase und RNAase freiem H 2 O gelöst. Zu 25 ml Agarosegel wurden 2,5 µl dieser Stammlösung hinzugefügt, so entstand eine Endkonzentration von 0,01 %. 71

4 9.2 Reagenzien, Chemikalien und Enzyme Agarose 2 % Borsäure Bromphenolblau Chelex 100 Resin DNA 100 bp Marker DNAase u. RNAase freies H 2 O DNTPs EDTA Na 2 Ethidiumbromid FICOLL-400 KH 2 PO 4 MgCl 2 MgCl 2 x 6H 2 O Mineralöl Na 2 HPO 4 x H 2 O KCL Taq Gold Polymerase Triton X-100 Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland Pharmacia LKB, Uppsala, Schweden BIO-RAD, München, Deutschland Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland Serva Feinbiochemica GmbH, Heidelberg, Deutschland Perkin Elmer, Weiterstadt, Deutschland Roth GmbH, Karlsruhe, Deutschland 72

5 9.3 Geräte und Verbrauchsmaterial Absaugpumpe CUV-O-MAT Becherglas 500 ml Concentrator 5301 Elektrophoresekammer- Agargel Mini Eppendorf -Gefäße 1,5 ml Gefrierschrank Gene Quant Calculator Hämatokritzentrifuge - Biofuge pico Filmkasette Polaroid (ISO 3000/36 ) Kühlschrank Mikroskop Standard 25 Mikrowelle Pipetten(2,5; 10; 100; 1000 µl) Polaroid Gel-Cam mit Lichtblendenzubehör Schraubdeckelgefäße Stereomikroskop STEMI DV 4 TRIO-Thermoblock Ultratiefkühlschrank Sanyo MDF-U 3086 S UV-Transilluminator - CAMAG PEPROSTAR II Wasserbad, Köttermann Wasserbad Zentrifuge, Labofuge 400e Zentrifugenröhrchen 12 ml Hellma Laborgeräte, Müllheim, Deutschland Schott Duran, Mainz, Deutschland Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland Eppendorf,AG, Hamburg, Deutschland Bosch GmbH, Gerlingen, Deutschland Pharmacia Biotech, Freiburg, Deutschland Heraeus Instruments GmbH, Hanau, Deutschland Polaroid GmbH, Offenbach, Deutschland Bosch GmbH, Gerlingen, Deutschland Carl Zeiss AG, Oberkochen, Deutschland Sanyo Elektric Co., Ltd., Singapur Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland Polaroid GmbH, Offenbach, Deutschland Sarstedt, Nürmbrecht, Deutschland Carl Zeiss AG, Oberkochen, Deutschland Sanyo, Berlin, Deutschland Köttermann GmbH u. CO KG, Hänigsen, Deutschland Fried Electric, Haifa, Israel Heraeus Instruments GmbH, Hanau, Deutschland Schott Duran, Mainz, Deutschland 73