Diagnostik der CLL und monoklonalen B-Lymphozytose Hendrik Veelken

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1 Diagnostik der CLL und monoklonalen B-Lymphozytose Hendrik Veelken Leiden University. The university to discover.

2 Chronische lymphatische Leukämie 1

3 Chronische lymphatische Leukämie indolente klonale Expansion reifzelliger B-Lymphozyten mit Phänotyp CD20 low CD19 + CD5 + CD23 + sig low 2

4 Chronische lymphatische Leukämie indolente klonale Expansion reifzelliger B-Lymphozyten mit Phänotyp CD20 low CD19 + CD5 + CD23 + sig low Klinik: ~ 40% beschwerdefrei Indolente Symptome der lymphatischen Expansion Symptom / Zeichen Ungefähre Häufigkeit Leitsymptom: indolente Lymphadenopathie 60-80% Splenomegalie 60-78% Reduzierter Allgemeinzustand 35-48% Infektneigung 50% Hepatomegalie 30-60% Blässe 20-34% Blutungszeichen 4-22% Selten: Akute Symptome (Infekte, Autoimmunhämolyse, Richter-Transformation) 3

5 Vorläufer-B-NHL 3,8% Hodgkin-Lymphom 8,5% Reifzellige B-NHL 83,8% Vorläufer-T-NHL 1,3% Reifzell. T/NK-NHL 5,7% Lymphominzidenzen nach WHO-Klassifikation (USA, ) Total: 33.65/ /year CLL/SLL: 5.17/ /year Mittleres Alter bei Diagnose = 65 Jahre selten in Asien familiäre Häufung DLCL 22,7% MM 18,0% CLL 16,5% FL 10,1% Maligne Lymphome: Relative Inzidenz nach WHO- Klassifikation Morton et al., Blood 2006 MZL 3,1% IC/WM 2,0% MCL 1,6% HCL 1,1% BL 0,9% "Most common leukemia in the Western World? 4

6 CLL: Prävalenz IARC 10y partial prevalence estimation (EU, 2006): 107,000 = 20 / Watson et al., EJH 2008 SEER estimation (USA, 2000): incidence (5.17) x median OS (10y) = 50 / Morton et al., Blood 2006 "Most common leukemia in the Western World? 5

7 Chronische lymphatische Leukämie Klinik: beschwerdefrei - indolente lymphatische Expansion Biopsie/Morphologie: Peripheres Blut: >5000 Lymphozyten/µl Copyright by Gower Medical Publishing (Sandoz Atlas) 6

8 Chronische lymphatische Leukämie 7

9 Chronische lymphatische Leukämie Klinik: beschwerdefrei - indolente lymphatische Expansion Biopsie/Morphologie: leukämische Form Peripheres Blut: >5000 Lymphozyten/µl in asymptomatischen Patienten oder weniger bei Zytopenien bzw. assoziierten Symptomen > 3 Monate nodale Form = "kleinzelliges lymphozytisches Lymphom" / SLL < 5000 Lymphozyten/µl keine Zytopenie Lymphoadenopathie mit CLL-Morphologie, proliferative Zentren 8

10 Chronische lymphatische Leukämie Klinik: beschwerdefrei - indolente lymphatische Expansion Biopsie/Morphologie: >5000 klonale B-Lymphozyten/µl peripheres Blut reifzellig, Gumprecht' Kernschatten, vereinzelt Prolymphozyten Immunphänotypisierung: deutlich positiv: CD19, CD5, CD23 schwach positiv: CD20, CD22, sigm negativ: FMC7, CD10, CD103 Matutes-Score (Leukemia, 1994) CD5 CD23 FMC7 scd22 IgM positiv positiv negativ schwach positiv schwach positiv 9

11 Chronische lymphatische Leukämie - Differentialdiagnose CLL splenisches Marginalzonen -lymphom Prolymphozytenleukämie Haarzellleukämie Lymphoplasmozytisches Lymphom Mantelzelllymphom Klinik indolente Lymphadenopathie führende Splenomegalie führende Splenomegalie Morphologie reifzellig Kernschatten >55 % Prolymphozyten Haarzellen villöse Lymphozyten lymphoplasmozytische Differenzierung Immunphänotyp Matutes CD5 häufig negativ CD103 + CD25 + CD5 - CD5 negativ CD5 negativ CD23 negativ CD5 positiv 10

12 Chronische lymphatische Leukämie Klinik: beschwerdefrei - indolente lymphatische Expansion Biopsie/Morphologie: >5000 klonale B-Lymphozyten/µl peripheres Blut reifzellig, Gumprecht' Kernschatten, vereinzelt Prolymphozyten Immunphänotypisierung: CD20 low CD19 + CD5 + CD23 + sig low Genetische Aberrationen: REGION ZIELGEN METHODE del13q14 MIRN15A / MIRN16-1 FISH/SNP-Array +12 (Hedgehog-Signalweg?) FISH/SNP-Array del11q22.3 ATM FISH/SNP-Array del17p13 / Mutationen P53 FISH/SNP-Array, PCR del6q +2p16 REL? FISH/SNP-Array balancierte Translokationen Zytogenetik 11

13 Chronische lymphatische Leukämie CN 4 0 P-value LOH CN 4 0 P-value LOH CN 4 0 P-value Mb (REL, BCL11A) LOH 12

14 Chronische lymphatische Leukämie - Differentialdiagnose CLL splenisches Marginalzonen -lymphom Prolymphozytenleukämie Haarzellleukämie Lymphoplasmozytisches Lymphom Mantelzelllymphom Klinik indolente Lymphadenopathie führende Splenomegalie führende Splenomegalie Morphologie reifzellig Kernschatten >55 % Prolymphozyten Haarzellen villöse Lymphozyten lymphoplasmozytische Differenzierung Immunphänotyp Matutes- Score CD5 häufig negativ CD103 + CD25 + CD5 negativ CD5 negativ CD23 - CD5 + CD5 - Genetik Del13q14 Trisomie 12 Del11q22 del17p13 t(11;14) IgH - cyclind1 13

15 Chronische lymphatische Leukämie Weitere Diagnostik: Hämolyseparameter Immunfixation und Ig-Klassen quantitativ Virusserologie (CMV, HSV, EBV, HIV, HBV, HCV) TK, scd23, ß2-Mikroglobulin Mutationsstatus des klonalen IgH ZAP-70-Expression Körperliche Untersuchung (LK, Milzgröße) Sonographie Rö-Thorax Fakultativ: KMP (z.b. ITP vs. Verdrängung, V.a. Richter-Transformation) Schnittbilddiagnostik (CT, NMR) Rassenti et al., NEJM

16 Klinik: beschwerdefrei Monoklonale B-Lymphozytose Biopsie/Morphologie: <5000 klonale B-Lymphozyten/µl peripheres Blut reifzellig, Gumprecht' Kernschatten, vereinzelt Prolymphozyten Immunphänotypisierung: CD20 low CD19 + CD5 + CD23 + sig low 15

17 Klinik: beschwerdefrei Monoklonale B-Lymphozytose Biopsie/Morphologie: <5000 klonale B-Lymphozyten/µl peripheres Blut reifzellig, Gumprecht' Kernschatten, vereinzelt Prolymphozyten Immunphänotypisierung: CD20 low CD19 + CD5 + CD23 + sig low Allgemeiner: Monoklonale B Zellpopulation im peripheren Blut (k:l > 3:1 or <0.3:1) und Lymphozyten/B-Zellen < 5x10 9 /l und Kein anderer Hinweis auf lymphoproliferative Erkrankung 80%: CLL-Phänotyp (CD19 + CD20 low CD5 + CD23 + Ig low ) Marti et al., BJH 2005, BJH

18 Monoklonale B-Lymphozytose Prävalenz (CLL-like MBL): 5.1% in Gesunden Jahre Rawstron et al., NEJM % in Gesunden Jahre Rawstron et al., Blood % in erstgradigen Verwandten von CLL-Patienten Rawstron et al., BJH 2007 in 98% von CLL-Patienten: MBL nachweisbar 3-77 Monate vor Diagnose Landgren at al., NEJM

19 Monoklonale B-Lymphozytose MBL Genotyp: Günstiger CLL-like Genotyp (del13q14, +12): 57% Ungünstiger Genotyp (del17p, del11q23): 0% IGHV mutiert: 85% Praevalente IGVH: V H 3-07, V H 3-23, V H 4-34 Rawstron et al., NEJM

20 <FL 4 Log>: CD5 PE-Cy5 <FL 4 Log>: CD5 PE-Cy5 <FL 4 Log>: CD5 PE-Cy5 <FL 4 Log>: CD5 PE-Cy5 Monoklonale B-Lymphozytose CD PE-Cy5 PBMC CLL PBMC / 3% CLL 10 3 PBMC / 1% CLL lambda <FL 8 PE Log>: CD19 APC <FL 8 Log>: CD19 APC <FL 8 Log>: CD19 APC <FL 8 Log>: CD19 CD19 APC APC kappa FITC <FL 1 Log>: Kappa-FITC <FL 1 Log>: Kappa-FITC <FL 1 Log>: Kappa-FITC <FL 1 Log>: Kappa-FITC <FL 2 Log>: LambdaPE <FL 2 Log>: LambdaPE <FL 2 Log>: LambdaPE <FL 2 Log>: LambdaPE T-Zellen non-mbl B MBL 19

21 Monoklonale B-Lymphozytose healthy sample without MBL after separation with RosetteSep and before sort 20

22 Monoklonale B-Lymphozytose healthy sample with MBL PB before separation 21

23 Die CLL/MBL- Landschaft MBL +Lymphozytose CLL Lym phozyten 22

24 Seromarker Die CLL/MBL- Landschaft MBL +Lymphozytose CLL del13q14 Normalkaryotyp p16? del11q22.3 del17p13/p53mut IgH mutiert IgH unmutiert Lym phozyten 23

25 Seromarker Die CLL/MBL- Landschaft MBL +Lymphozytose CLL del13q14 Normalkaryotyp p16? del11q22.3 del17p13/p53mut IgH mutiert IgH unmutiert Lym phozyten 24

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