Benutzerhandbuch Version PathoTrack EDIM ELISA. Testkit zum Nachweis von Anti körpern gegen das murine Rotavirus (EDIM)

Transkript

1 Benutzerhandbuch Version PathoTrack EDIM ELISA Testkit zum Nachweis von Anti körpern gegen das murine Rotavirus (EDIM)

2 2 Inhaltsverzeichnis Auf einen Blick Produktbeschreibung Inhalt des Kits Versand & Lagerung Testprinzip Zusätzliche Materialien Nutzungshinweise Vor dem Start PathoTrack ELISA Protokoll Auswertung Bestellinformationen Kurzprotokoll Inhaltsverzeichnis

3 Auf einen Blick hochsensitiv ( > 99,5 %) hochspezifisch ( > 99,8 %) schnell: Testergebnisse innerhalb von 2 Stunden Streifenplatte mit 96 wells (8 x 12) optimierte Ausnutzung der Testplatte, 94 wells für Proben nutzbar < 3 µl Probenmaterial pro Tier erforderlich mit Feldproben umfangreich validiert Rundum-Service und persönliche, fachkompetente Beratung und Betreuung Auf einen Blick 3

4 4 Produktbeschreibung Der von GVG Diagnostics ist ein indirekter Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) für den schnellen und zuverlässigen Nachweis von Antikörpern gegen das murine Rotavirus (EDIM) in Serumproben von Mäusen. Der Test ist hochspezifisch, hochsensitiv und schnell! Der ist umfangreich validiert (Daten auf Anfrage). Sensitivität und Selektivität sind höher als 99 Prozent. Eine Kreuzreaktivität zu anderen FELASA-Erregern wurde nicht beobachtet. Das murine Rotavirus EDIM ist ein unbehülltes, doppelsträngiges RNA-Virus aus der Familie der Reoviridae. Das Virus ist hochansteckend, wird fäkal-oral übertragen und zeigt eine hohe Prävalenz innerhalb von Maushaltungen. Aufgrund der enorm hohen Infektionsrate werden die Diagnostik und das Monitoring von EDIM-Infektionen von der FELASA (Federation of European Laboratory Animal Science Association) vierteljährlich empfohlen. Produktbeschreibung

5 Inhalt des Kits Jedes Kit enhält die folgenden Komponenten. Bis auf den Wash Buffer sind alle Reagenzien gebrauchsfertig. ELISA Streifen, beschichtet mit EDIM-Antigen 12 x 8 Sample Buffer Wash Buffer (10 x) Conjugate Solution Substrate Solution Stop Solution 3 Achtung: Die Stop Solution enthält 0.5 M Schwefelsäure Positive Control Negative Control S W 1 2 PC NC 20 ml 120 ml 12 ml 12 ml 12 ml 1 ml 1 ml Benutzerhandbuch inkl. Kurzanleitung & Analysezertifikat Versand & Lagerung Das Kit wird bei Umgebungstemperatur versendet. Alle Komponenten des Kits sind bei 2 8 C zu lagern. Verwendbarkeit: siehe Packungsetikett und Reagenzien Inhalt des Kits, Versand & Lagerung 5

6 6 Testprinzip Die -Mikrotiterplatte (96 wells) ist mit einem EDIM-spezifischen Antigen beschichtet. A. In einem ersten Schritt binden spezifische Antikörper aus der Serumprobe an das Antigen, ungebundenes Material wird durch Waschen entfernt. B. Anschließend wird ein Anti-Maus-Peroxidase-Konjugat zugegeben. Dieses erkennt Immunglobulin G- und Immunglobulin M-Antikörper (IgG, IgM) aus der Mausprobe und bindet an sie. Ungebundene Konjugatantikörper werden durch Waschen entfernt. C. Im Folgenden wird das Substrat (TMB) zugegeben, welches durch das Peroxidase-Konjugat zu einem blauen Farbstoff umgesetzt wird. D. Die Reaktion wird mit Schwefelsäure abgestoppt. Dabei schlägt die Farbe der Lösung von blau nach gelb um. Die Absorption der Lösung wird bei 450 nm in einem Photometer bestimmt und verhält sich proportional zur Anzahl der EDIM-spezifischen Antikörper in der Probe. Testprinzip

7 Antigen (EDIM) A. Probe Antikörper (EDIM) B. Konjugat Antikörper (unspezifisch) Konjugat C. Substrat Konjugat (inaktivert) D. Stopp Testprinzip 7

8 8 Zusätzliche Materialien Folgende Geräte und Materialien werden außerdem benötigt: Glasgeräte (Bechergläser, Messzylinder) Ein- und Mehrkanalpipetten inklusive Einwegpipettenspitzen Vorverdünnungsplatten oder Einweg - reaktions gefäße Vorlegewannen Destilliertes Wasser (ab VE-H 2 O oder besser) Spektrophotometer Zusätzliche Materialien

9 Nutzungshinweise Vermeiden Sie eine Kontamination der einzelnen Komponenten. Schütten Sie das benötigte Volumen der Lösungen direkt in die Vorlegewannen. Verwerfen Sie nicht genutzte Lösungen. Vermischen Sie keine Bestandteile des PathoTrack EDIM ELISA Kits mit Komponenten anderer ELISA Kits. Der ist für die Nutzung von destilliertem Wasser aus Ionenaustauscheranlagen (VE-H 2 O) geeignet. Insofern in Ihrem Labor vorhanden, wird die Nutzung von hochreinem bidestillierten Wasser oder Reinstwasser (Milli-Q o.ä.) empfohlen. Verwenden Sie kein Leitungswasser! Benutzen Sie keine Bestandteile des Kits nach Ablauf der Haltbarkeit. Das Verfallsdatum finden Sie auf dem Packungsetikett und den Reagenzien. Voraussetzung für die Präzision der Messergebnisse ist die Verwendung sauberer Glasmaterialien, das sorgfältige Pipettieren und die Einhaltung des Protokolls unter Beachtung der Nutzungshinweise. Nutzungshinweise 9

10 10 Vor dem Start Bringen Sie alle Lösungen und Reagenzien unmittelbar vor Benutzung auf Raumtemperatur (18 25 C). Eine zu hohe oder zu niedrige Temperatur der Lösungen kann die Testresultate beeinflussen. Verdünnen Sie den W Wash Buffer (10 x) 1:10 mit destilliertem Wasser. Für die Herstellung von z. B. 200 ml verdünntem W Wash Buffer (1 x), geben Sie 20 ml W Wash Buffer (10 x) zu 180 ml destilliertem Wasser. Verdünnen Sie die Serumproben 1:50 in S Sample Buffer. Für die Herstellung von 150 µl Serumverdün nung pipettieren Sie 3 µl Serum in 147 µl S Sample Buffer. Für die Verdünnung des Serums können Sie 0,5 ml oder 1,5 ml Einwegreaktionsgefäße sowie unbeschichtete Vorverdünnungsplatten verwenden. Mischen Sie gut. Vor dem Start

11 Arbeiten Sie zügig. Die Verwendung von Mehrkanalpipetten wird empfohlen. Setzen Sie den keiner direkten Sonneneinstrahlung oder starken Lichtquellen aus. PC Positiv Control und NC Negative Control sind gebrauchsfertig und werden nicht verdünnt. Vor dem Start 11

12 12 PathoTrack ELISA Protokoll 1. Pipettieren Sie jeweils 100 µl der gebrauchsfertigen PC Positive Control und NC Negative Control sowie der verdünnten Serumproben in die wells der Mikrotiterplatte. 2. Decken Sie die Platte ab und inkubieren Sie diese 45 Minuten bei Raumtemperatur. Entfernen Sie die Lösung durch Absaugen oder Ausklopfen. 3. Waschen Sie die Platte 3 x mit je 300 µl W Wash Buffer (1 x). Klopfen Sie die Platte vorsichtig auf einem Einwegtuch trocken. 4. Pipettieren Sie 100 µl 1 Conjugate Solution in jedes well, decken Sie die Platte ab. 5. Inkubieren Sie die Platte 30 Minuten bei Raumtemperatur. Entfernen Sie die Lösung durch Absaugen oder Ausklopfen. 6. Waschen Sie 3 x mit je 300 µl W Wash Buffer (1 x). Klopfen Sie die Platte vorsichtig auf einem Einwegtuch trocken. PathoTrack ELISA Protokoll

13 7. Pipettieren Sie 100 µl 2 Substrate Solution in jedes well und decken Sie die Platte ab. 8. Inkubieren Sie die Platte 15 Minuten bei Raumtemperatur. 9. Stoppen Sie die Reaktion durch die Zugabe von 100 µl 3 Stop Solution. 10. Messen Sie die Absorption (OD) bei einer Wellenlänge von 450 nm innerhalb von 20 Minuten in einem Spektrophotometer. PathoTrack ELISA Protokoll 13

14 14 Auswertung Validierung des Tests Um die Testergebnisse auswerten zu können, müssen folgende Kriterien erfüllt werden: Der Absorptionswert der 1,0 sein. Der Absorptionswert der 0,3 sein. Positive Control muss Negative Control muss Sollten diese Kriterien nicht erfüllt sein, muss der Test wiederholt werden. Bei Fragen oder für Hilfe zur Fehlersuche wenden Sie sich bitte an das GVG Diagnostics Team. Wir helfen Ihnen schnell und unkompliziert weiter. PC NC Auswertung

15 Interpretation der Ergebnisse Für die Auswertung des werden die Mess werte OD Probe zunächst auf die Kontrollen PC und NC normiert. Benutzen Sie dafür folgende Formel: OD Probe OD NC OD % = x 100 % OD PC OD NC Proben mit OD % > 40 % sind als positiv zu bewerten. Antikörper gegen EDIM wurden nachgewiesen. Proben mit OD % 40 % sind als negativ zu bewerten. Antikörper gegen EDIM wurden nicht nachgewiesen. Tipp: Eine automatische Normierung der Messwerte ist in den gängigen Spektrophotometern möglich. Auswertung 15

16 16 Bestellinformationen Bestellen Sie telefonisch unter: +49 (0) 341 / , online auf: oder per an: info@gvg-diagnostics.de. Produkt Inhalt Katalog-Nr. PathoTrack EDIM ELISA Kit mit 96 well EDIM- Platte, PathoTrack PC und NC, Conjugate Solution, Substrate Solution, Stop Solution, Sample Buffer, Wash Buffer (10 x) EDIM-K-001 PathoTrack PC Positive Control EDIM EDIM-P-001 PathoTrack NC Negative Control EDIM EDIM-N-001 PathoTrack 20 ml EDIM-A-001 Sample Buffer PathoTrack 12 ml EDIM-C-001 Conjugate Solution PathoTrack 12 ml EDIM-T-001 Substrate Solution PathoTrack Stop Solution 12 ml EDIM-S-001 Bestellinformationen

17 " Kurzprotokoll PathoTrack EDIM ELISA 1 Probe 100 µl/well PC NC 2 Inkubation 45 min bei Raumtemperatur 3 Waschen 3 x 300 µl/well Wash Buffer (1 x) 4 Konjugat 100 µl/well Conjugate Solution 5 Inkubation 30 min bei Raumtemperatur 6 Waschen 3 x 300 µl/well Wash Buffer (1 x) 7 Substrat 100 µl/well Substrate Solution 8 Inkubation 15 min bei Raumtemperatur 9 Stopp 100 µl/well Stop Solution 10 Detektion Absorption bei 450 nm S W 1 W 2 3 Kurzprotokoll 17

18 PathoTrack EDIM ELISA Benutzerhandbuch Version GVG Diagnostics GmbH Deutscher Platz 5b Leipzig Telefon: +49 (0) 341 / Fax: +49 (0) 341 / info@gvg-diagnostics.de