Analytik Synthese Abbau

Größe: px

Ab Seite anzeigen:

Download "Analytik Synthese Abbau"

Erica Berg
vor 6 Jahren
Abrufe

1 Analytik Synthese Abbau ASA Spezialenzyme GmbH / ABS: Eine neue verlässliche Nachweismethode für Pseudomonas aeruginosa ASA Spezialenzyme GmbH Dr. Arno Cordes / Am Exer 19 C D Wolfenbüttel Tel.: Fax: cordes@asa-enzyme.de

2 Gliederung 1. Pseudomonas aeruginosa: Vorkommen, Eigenschaften, Toxizität 2. Herkömmliche Nachweismethode: Cetrimid-Agar 3. Neue spezifische Nachweismethode: Gensonde 4. Vergleichende Untersuchungen: Cetrimid-Agar versus Gensonde 5. Zusammenfassung

1. Pseudomonas aeruginosa: Vorkommen, Eigenschaften, Toxizität Vorkommen - feuchte Böden - Oberflächengewässern - Leitungswasser, Waschbecken, Duschen, Toiletten, Spülmaschinen, Dialysegeräten,

3 1. Pseudomonas aeruginosa: Vorkommen, Eigenschaften, Toxizität Vorkommen - feuchte Böden - Oberflächengewässern - Leitungswasser, Waschbecken, Duschen, Toiletten, Spülmaschinen, Dialysegeräten, Medikamenten - Lebensmittel - destilliertem Wasser - einigen Desinfektionsmitteln - Shampoos Infektionen - Krankenhauskeim - ca. 10 % aller Krankenhausinfektionen - Pneumonien bei Mukoviszidose - Harnwegsinfektionen, Blutvergiftung, Meningitis, Infektionen auf Brandwunden Krankheitserreger - für immunkompetenten (gesunde) Menschen nicht gefährlich!! - bei Minderung der Keimabwehr durch eine Grunderkrankung (z.b. AIDS - bei Störung der Barrierefunktion der Haut und Schleimhäute - Mehrfachresistenzen gegenüber Antibiotika - Toxinbildner, zahlreiche Virulenzfaktoren

4 2. Herkömmliche Nachweismethode: Cetrimid-Agar Cetrimid-Agar - enthält neben Nährstoffen Cetrimid = Quartäre Ammoniumverbindung - Hemmung viele andere Organismen einschließlich vieler anderer Pseudonomaden-Spezies und verwandter Organismen Cetrimid Pyocyanin - fördert die Produktion von Pyocyanin sowie die Fluoreszenz von P. aeruginosa unter UV-Licht (254 nm) - typische P. aeruginosa Kolonien sind grünlich oder gelblich-grün - DIN EN (im informativen Anhang, der nicht Teil der Norm war) - Empfehlung des UBA/ der BWK (Bundesgesundheitsblatt 7/2007): Bebrütung bei 42 C zur Abgrenzung von P. aeruginosa von anderen Pseudomonaden, insbesondere von P. fluorescens und P. putida

5 2. Herkömmliche Nachweismethode: Cetrimid-Agar B Abb. 1: P. aeruginosa mit gelbgrünem Pyocyaninpigment auf Cetrimid-Agar Abb. 2: P. aeruginosa mit fluoreszierenden Pigment unter UV-Licht auf Cetrimidagar

3. Neue spezifische Nachweismethode: Gensonde Theoretischer Hintergrund -die Information zur Herstellung von Proteinen ist in den Chromosomen bzw.

6 3. Neue spezifische Nachweismethode: Gensonde Theoretischer Hintergrund -die Information zur Herstellung von Proteinen ist in den Chromosomen bzw. der DNA gespeichert - DNA: Alphabet aus nur vier Buchstaben - DNA-Sequenz: spezifische Reihenfolge der Buchstaben für jedes Protein (ab ca Buchstaben) - alle Pseudomonas aeruginosa-stämme haben spezifische, identische Abschnitte auf der DNA! Abb. 3: DNA-Doppelstrang

7 3. Neue spezifische Nachweismethode: Gensonde Theoretischer Hintergrund Abb. 4: DNA-Gensonde mit Fluoreszensfarbstoff

8 3. Neue spezifische Nachweismethode: Gensonde Schritt 1: Filtration der Wasserprobe auf den Membran Filter Schritt 2: Inkubation auf Cetrimid-Agar; Überführung des kultivierten Filters. Schritt 3: Auftropfen der Gensonde; Inkubation. Schritt 4:Waschen und inkubieren Schritt 5:Fluoreszensmikroskop, zwei separate Fluoreszensfiltersätze

9 4. Vergleichende Untersuchungen: Cetrimid-Agar versus Gensonde Vorgehensweise - Anzucht von Ps. aeruginosa PAO1 (Stamm DSMZ 22644) im Schüttelkolben h bei 30 C - Zählen der Keimzahl mittels Thomakammer - Herstellen einer Verdünnungsreihe bis 10 Keime/ml (Doppelbestimmung) - Mischkultur ASA T zu den Verdünnungen pipettieren (enthält u.a. Cellulomonas-, Bacillus-,Pseudomonas-Arten; Endkonz. 1,0 x 10 5 Keime/ml) - Ausstreichen der letzten sechs Verdünnungsstufen auf Cetrimid-Agar - Gensondentest (Nachweis unter Fluoreszensmikroskop - Fotos der grünen und roten Fluoreszens sowie der Platten

10 4. Vergleichende Untersuchungen: Cetrimid-Agar versus Gensonde Tab. 1: Testvergleich: Cetrimid-Agar / Gensonde Verdünnung Keimzahl [KBE/ml] Cetrimid-Agar Gensonde x x x Stammlösung Ps. aeruginosa (Thomakammer): 5,3 x 10 8 Keime/ml

11 4. Vergleichende Untersuchungen: Cetrimid-Agar versus Gensonde 300 Keimzahl [KBE/ml] Cetrimid-Plattentest Gensonde /Fluoreszenstest Probennummer Abb. 5: Testvergleich: Cetrimid-Agar / Gensonde

12 4. Vergleichende Untersuchungen: Cetrimid-Agar versus Gensonde ASA T auf Cetrimid- Agar ASA T + Ps. aeruginosa auf Cetrimid- Agar Abb. 6:Wachstum von Ps. aeruginosa auf Cetrimid-Agar in Gegenwart anderer Bakterien

13 4. Vergleichende Untersuchungen: Cetrimid-Agar versus Gensonde Abb. 7: Ps. aeruginosa-zellen unter dem Fluoreszensmikroskop

14 4. Vergleichende Untersuchungen: Cetrimid-Agar versus Gensonde Ps. aeruginosa Ps. putida Ps. stutzeri Ps. aeruginosa DSMZ DSMZ 33 DSMZ 5064 DSMZ 939 Abb. 8: Wachstum verschiedener Pseudomonas-Arten auf Cetrimid-Agar

15 4. Vergleichende Untersuchungen: Cetrimid-Agar versus Gensonde Ps. aeruginosa Ps. putida Ps. stutzeri Ps. aeruginosa DSMZ DSMZ 33 DSMZ 5064 DSMZ 939 Abb. 9: Wachstum verschiedener Pseudomonas-Arten auf Cetrimid-Agar

16 5. Zusammenfassung 1. Der Cetrimid-Agar-Test liefert in Gegenwart anderer Bakterienarten höhere Ergebnisse als der neue Gensonden-Test 2. Die eindeutige Auswertung des Cetrimid-Agar-Tests war nur möglich, da die zugegebenen Keime bekannt waren. So gab es bei Keimen von der ASA T- Bakterienmischkultur ebenfalls gelb-grüne Kolonien auf Cetrimid-Agar 3. Verschiedene Pseudomonadenstämme sind mit dem Cetrimid-Agar-Test nicht eindeutig zu unterscheiden. 4. Die Spezifität des Gensonden-Tests ist wesentlich größer 5. Der Gensonden-Test wird nicht durch die Begleitflora ASA T oder Ps. putida beeinflusst. Die Auswertung ist eindeutig.

Ähnliche Dokumente

Dr. habil. Anna Salek. Vorteile Serotypisierung Legionella: Falsch negatives oder positives Ergebnis

Dr. habil. Anna Salek. Vorteile Serotypisierung Legionella: Falsch negatives oder positives Ergebnis Dr. habil. Anna Salek Vorteile Serotypisierung Legionella: Falsch negatives oder positives Ergebnis Was ist in Ihrer Wasserleitung? Legionellen: Regelmäßige Kontrollen Regelmäßige Kontrollen sind unverzichtbar