Pancreatic Polypeptide RIA

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1 Instructions for Use Pancreatic Polypeptide RIA Radioimmunoassay for the quantitative determination of Pancreatic Polypeptide in human serum. MI For illustrative purposes only. To perform the assay the instructions for use provided with the kit have to be used. Distributed by: I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBLInternational.com D22335 Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 EURIAPP Pankreatisches Polypeptid Radioimmunoassay (Kat. Nr. RB 316) 100 Bestimmungen Nur für den professionellen Gebrauch Doc. no. E Dezember,

3 EINLEITUNG Pankreatisches Polypeptid (PP) wird als ein aminoterminales Molekül eines Vorläuferpeptids gebildet. Das vom Pankreas sezernierte PP hat 36 Aminosäuren mit einem Cterminalen Tyrosin. PP wird von den FZellen der Langerhanns schen Inseln gebildet. Es kommt überwiegend im Pankreas vor, kann aber auch in meßbaren Konzentrationen im ganzen GastroIntestinaltrakt auftreten. In Blut existiert PP in mindestens vier verschiedenen Formen: PP 136, PP 336 und zwei nicht näher charakterisierten Formen. PP wird während der Nahrungsaufnahme in das Plasma abgegeben. Seine physiologische Rolle besteht in der Hemmung der Magensäure und Pankreassekretion, sowie eines Einflusses auf die LeberGlukoseProduktion. Diese Wirkungen von PP werden durch spezielle Rezeptoren ausgelöst. RezeptorBindungsstudien haben gezeigt, daß das C terminale Tyrosinamid für die biologische Aktivität des Moleküls unbedingt notwendig ist. TESTPRINZIP Die Bestimmung von PP erfolgt ohne Extraktion durch einen kompetitiven RIA unter Verwendung eines KaninchenAntiserums gegen RinderPP. Das in Standards und Proben enthaltene PP konkurriert mit 125Ibeladenem humanem PP um eine begrenzte Anzahl von Bindungsstellen am Antikörper. 125IPP bindet sich im umgekehrten Verhältnis zur Konzentration von PP der Standards und Proben an den Antikörper. Das antikörpergebundene 125IPP wird von freiem PP durch Anwendung der DoppelAntikörperTechnik und PolyethylenGlykolZugabe getrennt. Die Radioaktivität des Präzipitates wird gemessen. Für die Standardisierung wird humanes, synthetisches PP benutzt. Für den professionellen Gebrauch im medizinischdiagnostischen Labor. KLINISCHE BEDEUTUNG Die Sekretion von PP wird während der Mahlzeiten insbesondere durch Protein und Fett angeregt. Aber PP wird auch von endokrin aktiven Tumoren des Pankreas' und des Gastro IntestinalTraktes produziert. Diese Tumoren bilden oft verschiedene Peptidhormone, z.b. PPVIP, PPGlukagon oder PPGastrin; es wurden aber auch Tumore beobachtet, die nur PP produzierten. Dies kann beim WDHA oder beim VernerMorrisonSyndrom vorkommen. Erhöhte SerumPPWerte nach Nahrungskarenz finden sich bei PPproduzierenden und endokrinen Tumoren des Pankreas und des GastroIntestinalTraktes. Normalwert von PP in humanem Serum: <100 pmol/l (nüchtern, bestimmt mit diesem Test). 3

4 VORSICHTSMASSNAHMEN Nur zum in vitro Gebrauch. Es ist notwendig, dass die für das Labor verantwortliche Person mit den im jeweiligen Land gültigen, gesetzlichen Bestimmungen im Umgang mit radioaktivem Material vertraut ist. Alle Reagenzien dieses Testbestecks, die humanes Material enthalten, ergaben bei der Prüfung auf HCV, HBsAg bzw. Antikörper gegen HIV I/IIVirus ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden. Es sollten geeignete Maßnahmen zum sicheren Umgang mit dem radioaktiven Material ergriffen werden. Nur autorisierte Personen sollten Zugang zu den Reagenzien haben. Die folgenden Vorsichtsmaßnahmen sollten beim Umgang mit radioaktivem Material beachtet werden: Radioaktives Material muß in speziell ausgewiesenen Räumen gelagert werden, die für nicht authorisiertes Personal nicht zugänglich sind. Der Umgang mit radioaktivem Material darf nur in speziell gekennzeichneten Räumen erfolgen. Vorsicht ist geboten vor oraler oder dermaler Aufnahme von radioaktiven Stoffen oder Kontamination von Kleidung. Nicht mit dem Mund pipettieren. Bei der Testdurchführung darf weder gegessen, getrunken oder geraucht werden. Es wird empfohlen Einmalhandschuhe zu tragen. Nach Gebrauch radioaktiven Materials Hände waschen. Beim Umgang mit radioaktivem Material sollten die Labortische mit absorbierendem, wegwerfbarem Material abgedeckt sein. Verschüttetes radioaktives Material sollte sofort aufgenommen werden und kontaminiertes Material als radioaktiver Abfall entsorgt werden. Kontaminierte Tischoberflächen sollten mit einem Detergenz gesäubert werden. Kitkomponenten enthalten Natriumazid. Kontakt mit Kupfer oder Bleirohren kann zur Bildung von hochexplosiven Ablagerungen führen. Daher beim Einbringen in Abflüsse mit reichlich Wasser nachspülen, was die Bildung von Metallaziden verhindert. Rohre, die wahrscheinlich dies explosiven Ablagerungen enthalten vorsichtig mit 10%iger Natronlauge spülen. 4

5 KOMPONENTEN DES KITS Die Reagenzien dieses Testkits sind ausreichend für 100 Bestimmungen. 1. AntiPP (Reagenz A) KaninchenAntiserum gegen RinderPP. Für 100 Röhrchen. Lyophilisiert in 5,0 ml 0,5 M Phosphatpuffer, ph 7,4, 2,5 % humanes Serumalbumin, 0,5 % Natriumazid. In 52 ml bidest. Wasser rekonstituieren IPP (Reagenz B) Enthält 0,75 µci oder 28 KBq 125IhPP am Tag der Markierung. Produziert durch Jodierung von synthetischem, humanem PP. HPLCgereinigt, monojodiert. Spezifische Aktivität: µci/nmol (6277 MBq/nmol). Lyophilisiert in 1,25 ml 0,5 M Phosphatpuffer, ph 7,4, 2,5 % humanes Serumalbumin, 0,5 % Natriumazid. Enthält 0,12 ml normales Kaninchenserum. In 12,5 ml bidest. Wasser rekonstituieren. 3. DoppelAntikörperPEG (Reagenz C) 50 ml verdünntes ZiegenAntiKaninchenIgAntiserum. Verdünner: 0,05 M Phosphatpuffer, ph 7,4, mit 0,25 % humanem Serumalbumin, und 0,05 % Natriumazid. Enthält 7,5 % w/v PolyethylenGlykol Standard Verdünner (Reagenz D) 10,0 ml PPfreies Humanserum. Lyophilisiert. Enthält 500 KIU Trasylol /ml. Rekonstitution in 10,0 ml bidest. Wasser. Wird für die Verdünnung des PPStandards benötigt. 5. PPStandard, pmol/l (8370 pg/ml) (Reagenz E) 5,00 ml, 2000 pmol/l synthetischer, HumanPPStandard. Lyophilisiert in 0,05 M Phosphatpuffer, ph 7,4, 0,25 % humanes Serumalbumin, 0,05 % Natriumazid. Rekonstitution in 5,00 ml bidest. Wasser. 6. Assaypuffer (Reagenz F) 5,0 ml 0,05 M Phosphatpuffer, ph 7,4, 0,25 % humanes Serumalbumin, 0,05 % Natriumazid. Zum Gebrauch anstelle von Antiserum in den nichtspezifischen Teströhrchen (NSB). 7. Kontrollen (Reagenz GH) Lyophilisierte Serumkontrollen mit niedriger (G) und hoher (H) PP Konzentration. Jedes Fläschchen mit 1,00 ml bidest. Wasser rekonstituieren. Die genauen PP Konzentrationen sind auf den Fläschchenetiketten angegeben. Enthält 0.05% NaN3. 5

6 ERFORDERLICHE LABORGERÄTE UND HILFSMITTEL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) Destilliertes Wasser EinmalTeströhrchen 1113 x 55 mm, Polystyrol Pipetten mit Einmalspitzen, 100 und 500 µl. GlasPipetten, 1,00; 5,00 und 10,00 ml Meßzylinder: 25 und 50 ml Vortexmixer Zentrifuge, geeignet für mindestes 1.700xg (vorzugsweise Kühlzentrifuge) GammaCounter PROBENGEWINNUNG Die Patienten sollten 10 Stunden vor Blutentnahme nüchtern sein. Venenblut wird in Röhrchen ohne Zusätze gesammelt. Die Proben werden bis zur Gerinnung in einem Eisbad gekühlt. Serum wird durch Zentrifugation bei +4 C gewonnen. Das Serum sollte nach der Entnahme innerhalb von 4 Stunden untersucht werden oder bei 18 C bis zur Analyse gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen sollte vermieden werden. 6

7 VORBEREITUNG UND LAGERUNG DER REAGENZIEN Die Reagenzien sollten bei 2 8 C gelagert werden. Das Verfallsdatum sowie die Chargenbezeichnung sind auf jedem Fläschchen angegeben. Bei lyophilisierten Reagenzien gilt das Verfallsdatum für die ungeöffnete Flasche. Nach Rekonstitution haben die Reagenzien eine Haltbarkeit von 10 Wochen, wenn ordnungsgemäß gelagert. Das für die Rekonstitution der lyophilisierten Reagenzien verwendete Wasser sollte mit einer Glasapparatur gewonnen werden, oder von entsprechender Reinheit sein. Den Inhalt der Fläschchen vorsichtig unter Vermeidung von Schaumbildung lösen. Reagenz A: AntiPP Mit 52 ml bidest. Wasser rekonstituieren. Lagerung bei 28 C. Reagenz B: 125 IPP Mit 12,5 ml bidest. Wasser rekonstituieren, Lagerung bei 18 C oder tiefer. Reagenz C: DoppelAntikörperPEG Gebrauchsfertig. Vor Gebrauch gründlich mischen, Lagerung bei 28 C. Reagenz D: Standard Verdünner Mit 10,0 ml bidest. Wasser rekonstituieren, Lagerung aliquotiert bei 18 C oder tiefer. Reagenz E: PPStandard, pmol/l Mit 5,0 ml bidest. Wasser rekonstituieren, Lagerung aliquotiert bei 18 C oder tiefer. Die Herstellung der gebrauchsfertigen Standards wird weiter unten beschrieben. Reagenz F: Assaypuffer Gebrauchsfertig; bei 2 8 C lagern Reagenz GH: Kontrollen Jedes Fläschchen mit 1 ml bidest. Wasser rekonstituieren; Lagerung bei 18 C oder tiefer. 7

8 TESTDURCHFÜHRUNG Rekonstituiere die Reagenzien wie beschrieben. Alle Reagenzien sollten vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden. Genauigkeit bei allen Pipettierschritten ist wichtig. Alle tests (Standards, Proben und Kontrollen) sollten in Doppelbestimmungen durchgeführt werden. Siehe Übersicht Seite 12. Ein kompletter Testansatz beinhaltet: Standards (StRöhrchen) Kontrollen (CRöhrchen) Proben (PRöhrchen) 7 Konzentrationen (0, 6.25, 12.5, 25.0, 50.0, 100 und 200 pmol/l) Röhrchen für die Bestimmung der nicht spezifischen Bindung (NSBRöhrchen) Röhrchen für die Bestimmung der Totalaktivität (TOTRöhrchen) ARBEITSSCHRITTE 1 Die Reagenzien entsprechend der Anweisung rekonstituieren. 2 Herstellung der PPArbeitsstandards durch Verdünnung des PP2000 pmol/lstandards (Reagenz E) mit dem Standard Verdünner (Reagenz D) wie folgt: a) 0,200 ml Standard 2000 pmol/l + 1,800 ml Verdünner = 200 pmol/l b) 1,00 ml Standard 200 pmol/l + 1,00 ml Verdünner = 100 pmol/l c) 1,00 ml Standard 100 pmol/l + 1,00 ml Verdünner = 50 pmol/l d) 1,00 ml Standard 50 pmol/l + 1,00 ml Verdünner = 25 pmol/l e) 1,00 ml Standard 25 pmol/l + 1,00 ml Verdünner =12,5 pmol/l f) 1,00 ml Standard 12,5 pmol/l + 1,00 ml Verdünner =6,25 pmol/l g) Standard Verdünner = 0 pmol/l Die Standardlösungen bei 18 C lagern, wenn sie wiederverwendet werden sollen µl Standards (0 200 pmol/l), Proben und Kontrollen in die betreffenden Röhrchen pipettieren und 100 µl des Nullstandards in die NSBRöhrchen µl AntiPP (Reagenz A) in alle Röhrchen (Ausnahme: NSB und TOTRöhrchen) pipettieren µl Assaypuffer (Reagenz F) in die NSBRöhrchen geben. 6 Vortexen, und 2024 Stunden bei 28 C inkubieren µl 125IPP (Reagenz B) in alle Röhrchen pipettieren; die TOTRöhrchen verschließen und zur Seite stellen. 8 Vortexen, und 2024 Stunden bei 28 C inkubieren. 8

9 9 500 µl DoppelAntikörperPEG (Reagenz C; vor dem Pipettieren gut mischen) in alle Röhrchen (außer TOT) pipettieren. 10 Vortexen, und 3060 Minuten bei 28 C inkubieren. 11 Alle Röhrchen 15 Minuten bei +4 C (1.700xg) zentrifugieren. 12 Die Überstände sofort nach dem Zentrifugieren dekantieren. 13 Messung der Radioaktivität des Präzipitates jedes Röhrchens 2 4 Minuten im Gamma Counter. TESTAUSWERTUNG 1. Die mittleren Counts/Minute (CPM) der unspezifischen Bindung (NSB) von den mittleren CPMs der Standard, Kontrollen und Patientenproben subtrahieren. 2. Die CPMs der Proben, Kontrollen und Standards durch die CPM der Totalaktivität teilen und das Ergebnis mit 100 multiplizieren (= %B/TOT). 3. Erstellen einer Standardkurve durch Auftragen der % B/TOT der Standards (yachse, linear) gegen ihre Konzentrationen (xachse, logarithmisch) auf semilogarithmischem Papier. 4. Die PPKonzentrationen der Proben und der Kontrollen können direkt aus dieser Standardkurve abgelesen werden. 5. Steht ein entsprechendes Computerprogramm zur Verfügung, so können die Erstellung der Standardkurve und die Berechnung der Konzentrationen in Proben und Kontrollen durch ein entsprechendes Computerprogramm (logitlog Regression, linear oder cubic spline) durchgeführt werden. 9

10 QUALITÄTSKONTROLLE Um eine gleichbleibende Testqualität sicherzustellen, sollte jedes Labor die folgenden Punkte beachten: a. Die wiedergefundenen Konzentrationen der Kontrollen sollten innerhalb der auf den Etiketten angegebenen Werten liegen. b. Total Counts Die gefundenen Counts sollten anhand der erwarteten CPM aufgrund des Wirkungsgrads des Counters und des radioaktiven Zerfalls abgeschätzt werden. Der Gehalt an 125 IPP dieses Kits beträgt ca CPM (5 %, +20 %) am Tag der Markierung (Wirkungsgrad des Counters = 80 %). c. Maximale Bindung (Bo/TOT) Für jeden Assay wird die gebundene Radioaktivität des Nullstandards (Bo/TOTx100) berechnet. Bo/TOTx100 beträgt normalerweise % am Tag der Markierung. Gegen Ende der Laufzeit kann der Wert um einige Prozent absinken. d. Unspezifische Bindung (NSB/TOT) Für jeden Assay wird die unspezifische Bindung in Prozent (NSB/TOTx100) berechnet. Die NSB/TOTx100 beläuft sich auf weniger als 7 %. e. Steigung der Standardkurve Als Marker für die Reproduzierbarkeit können die Punkte bei 80, 50 und 20 % der Standardkurve von Testlauf zu Testlauf verwendet werden. 10

11 TESTCHARAKTERISTIKA Sensitivität Die untere Nachweisgrenze, definiert als die zweifache Standardabweichung des Nullstandards, beträgt ca. 3 pmol/l (bezogen auf die Standardkurve). Richtigkeit Eine mittlere Wiederfindung von 104% (95113%) wurde erreicht, wenn PPKonzentrationen zu normalem Serum gespikt wurden. Präzision Intra assay Konzentration Variationskoeffizient (VK %) N 28.8 pmol/l pmol/l Inter assay (GesamtVariation) Konzentration Variationskoeffizient (VK %) N 38.8 pmol/l pmol/l Spezifität Folgende Kreuzreaktionen wurden gefunden: Peptid Kreuzreaktivität (%) PankreasPolypeptid, human 100 PankreasPolypeptid, Rind 120 Peptide YY, human < 1,0 Neuropeptide Y, human < 0,8 "Gastric Inhibitory"Peptid, Schwein 0,02 Cholecystokinin 39, Schwein 0,02 Sekretin, Schwein 0,02 Gastrin 34, human < 0,01 Gastrin 17, human < 0,01 Glukagon, human / Schwein 0,03 Insulin, Schwein < 0,01 ACTH 139, Schwein < 0,003 11

12 ASSAY SCHEMA Röhrchen TOT NSB Stand 0 Stand 6.25 Stand 12.5 Stand 25 Stand 50 Stand 100 Stand 200 Kontrolle (G) Kontrolle (H) Probe 1 Probe 2 etc. Röhrchen Nr Standard Probe oder Kontrolle AntiPP (A) Assay Puffer (F) 500 Vortexen und für 2024 h bei 28 C inkubiere n 125 IPP (B) Vortexen und für 2024 h bei 28 C inkubiere n Doppel Antikörper Festphase (C) Vortexen und für min bei 28 C inkubieren. 15 min bei 1700 x g und +4 C zentrifugieren. Dekantieren und Radioaktivität der Pellets messen. 12

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14 LITERATUR 1. Schwartz, T.W., Gingerich, R.L. and Tager, H.S. Biosynthesis of pancreatic polypeptide: identification of precursor and cosynthesized product. J Biol Chem 225: , Greider, M.H., Gersell, D.J. and Gingerich, R.L. Ultrastructural localization of pancreatic polypeptide in the F cell of the dog pancreas. J Histo Chem Society 26: , Gersell, R.J., Gingerich, R.L. and Greider, M.H. Regional distribution and concentration of pancreatic polypeptide in human and canine pancreas. Diabetes 28:1115, Chance, R.E., Moon, N.E. and Johnson, M.C. Human pancreatic polypeptide (HPP) and bovine pancreatic polypeptide (BPP). In B.M. Jaffe and H.R. Behlman (Eds). Methods of hormone radioimmunoassay. Academic Press, New York, 1979, Kimmel, J.R., Hayden, L.J. and Pollock, H.G. Isolation and characterization of a new pancreatic polypeptide hormone. J Biol Chem 250: , Adrian, R.E., Bloom, S.R., Bryant, M.G., Polak, J.M., Heitz, P.H. and Barnes, A. Distribution and release of human pancreatic polypeptide. Gut 17:940944, Hazelwood, R.L. Synthesis, storage, secretion and significance of pancreatic polypeptide in vertebrates. In S.J. Cooperstien and D. Watkins (Eds). The islets of Langerhans, Academic Press, New York, 1981, p.p Gingerich, R.L., Akpan, J.O., Leith, K.M. and Gilbert, W.R. Patterns of immunoreactive pancreatic polypeptide in human plasma. Regulatory Peptides 33:275285, Sun, Y.S., Brunicardi, F.C., Duck, P., Walfisch, S., Berlin, S.A., Chance, R.E., Gingerich, R.L., Elahi, D. and Andersen, D.K. Reversal of abnormal glucose metabolism in chronic pancreatitis by administration of pancreatic polypeptide. Am J Surgery 151:130140, Seymour, N.E., Brunicardi, F.C., Chaiken, R.L., Lebovitz, H.E., Chance, R.E., Gingerich, R.L., Elahi, D. and Andersen, D.K. Reversal of abnormal glucose production after pancreatic resection by pancreatic polypeptide administration in man. Surgery 104:119129,

15 ANHANG Erläuterung der Symbole ChargenNummer KatalogNummer Verfallsdatum Temperaturbereich Markierungsdatum Radioaktiv Biologische Gefährdung Gebrauchsanweisung beachten InvitroDiagnostikum Hersteller Anzahl Tests 15

16 REAG A Ab AntiPP REAG B Ag 125 I 125 IPP REAG C DAB DoppelAntikörperPEG REAG D DIL CAL Standard Verdünner REAG E CAL 2000 PPStandard 2000 pmol/l REAG F BUF AS Assaypuffer REAG G CONTROL Kontrolle, Level 1 (niedrig) REAG H CONTROL Kontrolle, Level 2 (hoch) 16

17 EURODIAGNOSTICA AB Medeon, SE MALMÖ, Sweden Phone: , Fax:

18 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.No.: / Kat.Nr.: / No. Cat.: / Cat.No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / ΑριθµόςΚατ.: LotNo.: / ChargenBez.: / No. Lot: / LotNo.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / InvitroDiagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για InVitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International B.V. Zutphenseweg 55, 7418 AH Deventer, The Netherlands IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: 11 IBL@IBLInternational.com WEB: Tel.: + 49 (0) Fax: 11 IBL@IBLInternational.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBLInternational.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer. Symbols Version 3.5 /