INTERNATIONALER VERBAND ZUM SCHUTZ VON PFLANZENZÜCHTUNGEN TECHNISCHER AUSSCHUSS. Neunundvierzigste Tagung Genf, 18. bis 20.

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1 ORIGINAL: englisch DATUM: 7. Februar 2013 INTERNATIONALER VERBAND ZUM SCHUTZ VON PFLANZENZÜCHTUNGEN Genf G TECHNISCHER AUSSCHUSS Neunundvierzigste Tagung Genf, 18. bis 20. März 2013 TEILÜBERARBEITUNG DER PRÜFUNGSRICHTLINIEN FÜR TOMATE (DOKUMENT TG/44/11) Vom Verbandsbüro erstelltes Dokument 1. Die Technische Arbeitsgruppe für Gemüsearten (TWV) vereinbarte auf ihrer fünfundvierzigsten Tagung vom 25. bis 29. Juli 2011 in Monterey, Vereinigte Staaten von Amerika, dem Technischen Ausschuß (TC) vorzuschlagen, eine Teilüberarbeitung der Prüfungsrichtlinien für Tomate (Dokument TG/44/11) anzunehmen für die Aufnahme (a) (b) eines überarbeiteten Formats für Merkmale der Krankheitsresistenz entsprechend den Erläuterungen für Krankheitsresistenz in den Prüfungsrichtlinien, wie in Dokument TGP/12/2 Draft 2 Anleitung zu bestimmten physiologischen Merkmalen, Abschnitt 2.4 dargelegt und eines genspezifischen Markerverfahrens für die Prüfung der Resistenz gegen das Tomatenbronzefleckenvirus (TSWV) - Pathotyp 0 2. Der TC nahm auf seiner achtundvierzigsten Tagung vom 26. bis 28. April 2012 in Genf zur Kenntnis, daß in Beantwortung auf eine Zahl technischer Fragen betreffend Krankheitsresistenz, die von den beteiligten Sachverständigen nach der Tagung der TWV aufgeworfen wurden, vom Vorsitzenden der TWV, dem ehemaligen Vorsitzenden der TWV und dem Führenden Sachverständigen vereinbart wurde, auf der sechsundvierzigsten Tagung der TWV einen neuen Entwurf der Teilüberarbeitung der Prüfungsrichtlinien für Tomate zu prüfen (vergleiche Dokument TC/48/22 Bericht über die Entschließungen, Absatz 147). 3. Die TWV prüfte auf ihrer sechsundvierzigsten Tagung vom 11. bis 15. Juni 2012 in der Nähe von Venlo, Niederlande, das Dokument TWV/46/19 und vereinbarte eine Teilüberarbeitung der Prüfungsrichtlinien für Tomate (Dokument TG/44/11) vorzuschlagen, wie in den Anlagen zu diesem Dokument dargelegt: ANLAGE I: Vorschlag zur Berichtigung der Krankheitsbezeichnungen in Kapitel: 5.3, 7, 8 und 10 ANLAGE II: Aufnahme eines überarbeiteten Formats für Merkmale der Krankheitsresistenz entsprechend den Erläuterungen für Krankheitsresistenz in den Prüfungsrichtlinien, wie in Dokument TGP/12/2 Draft 2 Anleitung zu bestimmten physiologischen Merkmalen, Abschnitt 2.4 dargelegt (aktueller und vorgeschlagener neuer Wortlaut werden auf gegenüberliegenden Seiten dargestellt). ANLAGE III Ergänzung von Referenzliteratur in Kapitel 9: Literatur 4. Die Teilüberarbeitung von Dokument TG/44/11 würde als Dokument TG/44/11 Rev. angenommen werden. [Anlagen folgen]

2 ANLAGE I Vorschlag zur Berichtigung der Krankheitsbezeichnungen in Kapitel: 5.3, 7, 8 und 10 TQ English français deutsch español Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 49. (+) VG Resistance to Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Résistance à Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Resistenz gegen Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Resistencia a Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) 49. (+) VG Resistance to Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) Résistance à Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) Resistenz gegen Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) Resistencia a Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) English français deutsch español Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 51. (+) VG Resistance to Tomato Mosaic Tobamovirus (ToMV) Résistance au virus de la mosaïque de la tomate (ToMV) Resistenz gegen das Tomatenmosaikvirus, Tobamovirus (ToMV) Resistencia al virus del mosaico del tomate (ToMV) 51. (+) VG Resistance to Tomato mosaic virus (ToMV) Résistance au virus de la mosaïque de la tomate (ToMV) Resistenz gegen das Tomatenmosaikvirus (ToMV) Resistencia al virus del mosaico del tomate (ToMV) English français deutsch español Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 54. (+) VG Resistance to Stemphylium Résistance à Stemphylium Resistenz gegen Stemphylium Resistencia a Stemphylium 54. (+) VG Resistance to Stemphylium spp. (Ss) Résistance à Stemphylium spp. (Ss) Resistenz gegen Stemphylium spp. (Ss) Resistencia a Stemphylium spp. (Ss)

3 Anlage I, Seite 2 English français deutsch español Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 57. (+) VG Resistance to Tomato Yellow Leaf Curl Begomovirus (TYLCV) Résistance au bégomovirus des feuilles jaunes en cuillère de la tomate (TYLCV) Resistenz gegen gelbes Tomatenblattrollvirus, Begomovirus (TYLCV) Resistencia a Begomovirus del rizado amarillo de la hoja del tomate (TYLCV) 57. (+) VG Resistance to Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) Résistance au virus des feuilles jaunes en cuillère de la tomate (TYLCV) Resistenz gegen gelbes Tomatenblattrollvirus (TYLCV) Resistencia a virus del rizado amarillo de la hoja del tomate (TYLCV) English français deutsch español Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 58. (+) VG Resistance to Tomato Spotted Wilt Tospovirus (TSWV) Résistance au virus de la tache bronzée de la tomate (TSWV) Resistenz gegen das Tomatenbronzenfleckenvirus, Tospovirus (TSWV) Resistencia a Tospovirus del bronceado de tomate (TSWV) - Race 0 Pathotype 0 - Pathotyp 0 Raza (+) VG Resistance to Tomato spotted wilt virus (TSWV) Résistance au virus de la tache bronzée de la tomate (TSWV) Resistenz gegen das Tomatenbronzenfleckenvirus (TSWV) Resistencia a virus del bronceado de tomate (TSWV) - Race 0 Pathotype 0 - Pathotyp 0 Raza 1 English français deutsch español Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 61. (+) VG Resistance to Tomato Torrado Virus (ToTV) Résistance au virus Tomato Torrado (ToTV) Resistenz gegen Tomato Torrado Virus (ToTV) Resistencia al virus del torrado del tomate (ToTV) 61. (+) VG Resistance to Tomato torrado virus (ToTV) Résistance au virus tomato torrado (ToTV) Resistenz gegen Tomato Torrado Virus (ToTV) Resistencia al virus del torrado del tomate (ToTV) [Anlage II folgt]

4 ANLAGE II Aufnahme eines überarbeiteten Formats für Merkmale der Krankheitsresistenz (aktueller und vorgeschlagener neuer Wortlaut werden auf gegenüberliegenden Seiten dargestellt) Zu 46: Resistenz gegen Meloidogyne incognita (Mi) Methode Erhaltung des Pathotyps Natur des Mediums: Besondere Bedingungen: Wurzeln von anfälligen Sorten Faulen der Wurzeln vermeiden Durchführung der Prüfung: Temperatur: nicht über 28 ºC Anzucht: Art der Inokulation: vorzugsweise im Gewächshaus Pflanzen werden in infiziertem Boden ausgesät Dauer der Prüfung - Aussaat bis Inokulation: Inokulation vor der Aussaat - Inokulation bis Erfassung: 30 bis 45 Tage Anzahl der getesteten Pflanzen: 10 bis 20 Bemerkungen: Faulen der Wurzeln und hohe Temperaturen vermeiden Benotung: Anzahl der mit Eiern kontaminierten Wurzelknoten und Wurzeldegenerierung Standardsorten: anfällig: Clairvil, Casaque Rouge mäßig resistent: Madyta, Vinchy stark resistent: Anabel, Anahu, F1 Anahu x Monalbo

5 Anlage II, page 2 Zu 46: Resistenz gegen Meloidogyne incognita (Mi) 1. Pathogen...Meloidogyne incognita 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums...Naktuinbouw 1 (NL) oder GEVES 2 (FR) 5. Isolat...nicht resistenzbrechend 6. Feststellung der Isolatidentität...Verwendung von Standardunterlagen oder Tomatenstandardsorten 7. Feststellung der Pathogenität Verwendung anfälliger Standardunterlagen oder Tomatenstandardsorten 8. Vermehrung des Inokulums 8.1 Vermehrungsmedium...lebende Pflanze 8.2 Vermehrungssorte...vorzugsweise resistent gegen echten Mehltau 8.3 Pflanzenstadium bei der Inokulation...vergleiche Inokulationsmethode...vergleiche Ernte des Inokulums Wurzelsysteme werden mit Schere in Stücke von ca. 1 cm Länge geschnitten 8.7 Prüfung des geernteten Inokulums...visuelle Prüfung des Vorhandenseins von Wurzelknoten 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit des Inokulums...1 Tag 9. Prüfungsanlage 9.1 Anzahl der Pflanzen pro Genotyp...20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen...1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten... Anfällig:...Clairvil, Casaque Rouge Mäßig resistent:...campeon, Madyta, Vinchy Hoch resistent:...anabel, Anahu, Anahu x Casaque Rouge 9.4 Gestaltung der Prüfung...Einschluß von Standardsorten 9.5 Prüfungseinrichtung...Gewächshaus oder klimatisierter Raum 9.6 Temperatur...nicht über 28 C 9.7 Licht...mind. 12 Stunden pro Tag 10. Inokulation 10.1 Vorbereitung des Inokulums...kleine Teile erkrankter Wurzeln gemischt mit Erde Erde und erkrankte Wurzelstücke vermischen 10.2 Quantifizierung des Inokulums.....Verhältnis Erde:Wurzeln = 8:1, oder nach Erfahrung 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation...Samen oder Keimblätter 10.4 Inokulationsmethode...Pflanzen werden in verseuchtem Boden ausgesät oder Verseuchung der Erde nach der Aussaat, wenn sich die Pflänzchen im Keimblattstadium befinden 10.7 Abschließende Erfassungen bis 45 Tage nach Inokulation 11. Erfassungen 11.1 Methode...Untersuchung der Wurzeln 11.2 Erfassungsskala...Symptome: Knotenbildung, Wurzelfehlbildung, Wachstumsminderung, Absterben der Pflanze 11.3 Validierung der Prüfung...Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen an Standardsorten kalibriert werden 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten. Dabei ist zu beachten, daß resistente Sorten gegebenenfalls einige Pflanzen mit Knoten aufweisen können. Diese werden nicht als Abweicher betrachtet. Fehlend (anfällig)...[1] Wachstum stark verringert, viele Knoten Mittel (mäßig resistent)...[2] mittlere Wachstumsverringerung, mittelmäßig viele Knoten Vorhanden (hoch resistent)...[3] keine Wachstumsverringerung, keine Knoten 13. Kritische Kontrollpunkte: Faulen der Wurzeln ist zu vermeiden; hohe Temperaturen bewirken Zusammenbrechen der Resistenz. 1 Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl 2 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

6 Anlage II, page 3 Zu 47: Resistenz gegen Verticillium sp. (Va und Vd) Methode Erhaltung der Pathotypen Verwendet wird Pathotyp 0 repräsentiert, durch Stamm Toreilles Pathotyp 0 ist durch seine Eigenschaft, Pflanzen mit dem Ve Gen zu infizieren, definiert. Langzeitlagerung der Stämme: Konidiensuspension in Glycerollösung bei -80 C. Der Stamm kann auf Kartoffel-Dextrose-Agar-Nährmedium (Potato Dextrose Agar (PDA)) subkultiviert werden. Durchführung der Prüfung Pflanzenstadium: Die Pflanzen werden im Gewächshaus oder in Klimakammern angebaut. Die Inokulation kann vom Keimblattstadium (Erscheinen der ersten Blätter) bis zum zweiten Laubblatt-Stadium erfolgen. Folgende Sorten können zur Kontrolle verwendet werden. Es sollten mindestens eine resistente und eine anfällige Kontrolle in der Prüfung vorhanden sein. Die heterozygote Sorte hilft bei der Auswertung der Ergebnisse im Fall von aggressiven Prüfungen. Es könnte angebracht sein, Clarion zu den anfälligen Kontrollen hinzuzufügen, denn sie ist weniger anfällig und könnte außerdem helfen, den Inokulationsdruck der Prüfung zu testen. Diese 2 Sorten sind optional. Standardsorte Vd:0 Marmande verte, Flix S Clarion s Monalbo x Marmande verte RH Monalbo, Elias R R Resistenz vorhanden; keine Symptome RH Resistenz vorhanden; mitunter sehr schwache Symptome s Resistenz fehlend; leichte Symptome S Resistenz fehlend; deutliche Symptome Temperatur: Die Prüfung ist unter kontrollierten Bedingungen bei C durchzuführen. Inokulum: Die Anzucht von Verticillium sp. erfolgt 3 bis 7 Tage lang in Czapek-Dox-Nährlösung im Dunkeln bei 20 bis 25 C bei Belüftung. Die gewonnenen Sporen werden auf 10 6 sp/ml verdünnt. Art der Inokulation: Die Pflanzen werden geerntet, die Wurzeln gestutzt und 5 bis 15 Minuten in die Inokulumsuspension getaucht. Die Pflanzen werden dann wieder in den Boden gepflanzt. Dauer der Prüfung Mindestens 33 Tage von der Aussaat bis zur Erfassung. Anzahl der getesteten Pflanzen: Mindestens 20 Pflanzen. Benotung: Tage nach der Inokulierung. Notenskala und Auswertung der Ergebnisse R: keine Symptome S: Chlorose an unteren Blättern, verringertes Wachstum und braune Adern oder kein verringertes Wachstum und braune Adern. Die Analyse der Ergebnisse sollte anhand der Ergebnisse der R und S Kontrollen kalibriert werden.

7 Anlage II, page 4 Zu 47: Resistenz gegen Verticillium sp. (Va und Vd) 1. Pathogen...Verticillium dahliae oder Verticillium albo-atrum 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums...Naktuinbouw 3 (NL) und GEVES 4 (FR) 5. Isolat...Pathotyp 0 (z. B. Stamm ) 8. Vermehrung des Inokulums 8.1 Vermehrungsmedium...Kartoffeldextrose-Agar, Agar Medium S nach Messiaen 8.4 Inokulationsmedium...Wasser (um die Agarplatten abzuschaben) oder Czapek-Dox-Brühe, (3-7 Tage alte belüftete Kultur bei C, in Dunkelheit) 8.6 Ernte des Inokulums...durch doppeltes Musselintuch filtern 8.7 Prüfung des geernteten Inokulums Sporenzählung; anpassen an 10 6 pro ml 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit des Inokulums...1 Tag bei 4 C 9. Prüfungsanlage 9.1 Anzahl der Pflanzen pro Genotyp 35 Samen für 24 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen...1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten Anfällig. Flix, Marmande verte, Clarion, Santonio, Anabel Resistent.. Monalbo, Elias, Monalbo x Marmande verte, Daniela, Marmande VR 9.4 Gestaltung der Prüfung.. mindestens 20 inokulierte Pflanzen, mindestens 2 Nullproben 9.5 Prüfungseinrichtung Gewächshaus oder klimatisierter Raum 9.6 Temperatur optimal C, C nach Inokulation 9.7 Licht 12 Stunden oder länger 10. Inokulation 10.1 Vorbereitung des Inokulums belüftete, flüssige Kultur (8.4) 10.2 Quantifizierung des Inokulums Sporenzählung, anpassen an 10 6 pro ml 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation. Keimblatt bis 3. Blatt 10.4 Inokulationsmethode Wurzeln werden 4 bis 15 Min. lang in Sporensuspension getaucht 10.7 Abschließende Erfassungen Tage nach Inokulation 11. Erfassungen 11.1 Methode.. visuelle 11.2 Erfassungsskala Wachstumsverzögerung, Welken, Chlorose und Braunfärbung der Gefäße 11.3 Validierung der Prüfung... Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden. 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend [1] ausgeprägte Symptome vorhanden [9] keine oder schwach ausgeprägte Symptome 13. Kritische Kontrollpunkte Sämtliche Symptome können auch bei resistenten Sorten vorhanden sein, jedoch deutlich schwächer ausgeprägt als bei anfälligen Sorten. Normalerweise weisen resistente Sorten bedeutend weniger Wachstumsverzögerung als anfällige Sorten auf. Die Erfassung der Braunfärbung von Gefäßen ist wichtig für die Diagnose. Normalerweise breitet sich die Braunfärbung von Gefäßen bei resistenten Sorten nicht über das erste Blatt hinaus aus. Viele Hybridsorten sind Heterozygoten und scheinen im Biotest relativ schwach ausgeprägte Symptome zu haben. 3 Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl 4 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

8 Anlage II, page 5 Zu : Resistenz gegen Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) Pathotyp 0 (ex 1), Pathotyp 1 (ex 2) und Pathotyp 2 (ex 3) Methode Erhaltung der Pathotypen Langzeitlagerung der Stämme: bei -80 C in 20 % Glycerol. Verwendet werden Pathotyp 0, repräsentiert durch die Stämme Orange 71 oder PRI oder Fol 071, und Pathotyp 1, repräsentiert durch die Stämme 4152 (aggressiver) oder PRI40698 oder RAF 70 (weniger aggressiv). Die Stämme können auf PDA- oder S von Messiaen-Medium vermehrt werden. Durchführung der Prüfung Pflanzenstadium: Anzucht der Pflanzen im Gewächshaus oder Klimakammern 10 bis 18 Tage (Keimblattstadium bis zum ersten Laubblatt- Stadium) Folgende Sorten werden zur Kontrolle verwendet: Aus jeder Zeile sollte mindestens eine der angegebenen Sorten ausgewählt werden; der Resistenz-Phänotyp für die zwei Pathotypen von Fol ist jeweils angegeben. Die heterozygote Sorte hat normalerweise einen schwächeren Resistenz-Phänotyp als die homozygoten Linien. Diese geringe Resistenz kann verwendet werden, um die Grenze zwischen Resistenz und Anfälligkeit zu kalibrieren. Die heterozygote Kontrolle für Fol:1 ist optional. Kontrollen für Fol:0 Resistenzprüfung Fol:0 Fol:1* Marmande, Marmande verte, Resal S S Marporum x Marmande verte (heterozygous) R S Marporum, Larissa R S Motelle, Gourmet, Mohawk R R * Zur Information Kontrollen für Fol:1 Resistenzprüfung Fol:0* Fol:1 Cherry Belle, Roma, Marmande verte S S Ranco**, Marporum R S Motelle x Marmande verte R R Tradiro, Odisea R R * Zur Information ** Für Ranco: geringe Resistenz gegen Fol:0 mit zahlreichen Abweichern R S = Resistenz vorhanden = Resistenz fehlend Temperatur: Die Prüfung erfolgt in Klimakammern oder im Gewächshaus bei 24 bis 26 C. Bei aggressiven Prüfungen kann die Temperatur auf 20 bis 24 C herabgesetzt werden. Inokulum: Die Anzucht von Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici erfolgt 7 bis 10 Tage lang auf PDA- oder S von Messiaen-Medium oder in belüfteter Czapek-Dox-Nährlösung. Die gewonnenen Sporen werden auf 10 6 sp/ml verdünnt. Bei besonders aggressiven Isolaten kann die Konzentration des Inokulums verringert werden. Art der Inokulation: Wurzeln (Schneiden der Wurzeln freigestellt) und Hypocotylachse werden 5 bis 10 Minuten in Inokulumlösung getaucht und die inokulierten Pflanzen wieder in den Boden. Dauer der Prüfung Mindestens 28 Tage von Aussaat bis Inokulation. Anzahl der getesteten Pflanzen: Mindestens 20 Pflanzen. Benotung: Mindestens 21 Tage nach der Inokulierung Notenskala: 4 Klassen: 0: keine Symptome 1: äußerlich gesundes Aussehen der Pflanze (ohne Wachstumsverringerung) mit braunen Adern (manchmal Ausdehnung über Keimblätter, allgemein unter den Keimblättern) 2: verringertes Wachstum und braune Adern über den Keimblättern 3: tote Pflanze Auswertung der Skala: Allgemein sind 0 und 1 äquivalent zu resistent, 2 und 3 sind anfällig, aber die Ergebnisse sollten mit den Ergebnissen der Kontrollen R und S kalibriert werden.

9 Anlage II, page 6 Zu 48: Resistenz gegen Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) 1. Pathogen...Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums...Naktuinbouw 5 (NL) und GEVES 6 (FR) 5. Isolat...Pathotyp 0 (ex 1) (z. B. Stämme Orange 71 oder PRI oder Fol (ex 2) (z. B. Stämme 4152 oder PRI40698 oder RAF 70 und 2 (ex 3) Einzelne Stämme können hinsichtlich der Pathogenität abweichen 6. Feststellung der Isolatidentität...Verwendung von Vergleichssorten (vergleiche 9.3) 7. Feststellung der Pathogenität...an anfälligen Tomatensorten 8. Vermehrung des Inokulums 8.1 Vermehrungsmedium...Kartoffeldextrose-Agar, Medium S nach Messiaen 8.4 Inokulationsmedium...Wasser, um die Agarplatten abzuschaben oder Czapek-Dox-Kulturmedien (7 Tage alte belüftete Kultur) 8.6 Ernte des Inokulums...durch doppeltes Musselintuch filtern 8.7 Prüfung des geernteten Inokulums...Sporenzählung; anpassen an 10 6 pro ml 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit des Inokulums Std., kühl stellen, um Keimen der Sporen zu verhindern 9. Prüfungsanlage 9.1 Anzahl der Pflanzen pro Genotyp...mind. 20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen Wiederholung 9.3 Kontrollsorten für die Prüfung mit Pathotyp 0 (ex 1) Anfällig...Marmande, Marmande verte, Resal Nur für Pathotyp 0 resistent...marporum, Larissa, Marporum x Marmande verte, Marsol, Anabel Resistent für Pathotyp 0 und 1...Motelle, Gourmet, Mohawk Kontrollsorten für die Prüfung mit Pathotyp 1 (ex 2) Anfällig...Marmande verte, Cherry Belle, Roma Nur für Pathotyp 0 resistent...marporum, Ranco Resistent für Pathotyp 0 und 1...Tradiro, Odisea Anmerkung:...Ranco ist etwas weniger resistent als Tradiro Kontrollsorten für die Prüfung mit Pathotyp 2 (ex 3) Anfällig für Pathotyp 0, 1 und 2...Marmande verte, Motelle, Marporum Resistent für Pathotyp 0, 1 und 2...Tributes, Murdoch, Marmande verte x Florida 9.4 Gestaltung der Prüfung...>20 Pflanzen; z. B. 35 Samen für 24 Pflanzen, einschl. 2 Nullproben 9.5 Prüfungseinrichtung...Gewächshaus oder klimatisierter Raum 9.6 Temperatur C (strenge Prüfung mit mildem Isolat) C (weniger strenge Prüfung mit starkem Isolat) 9.7 Licht...12 Stunden pro Tag oder länger 9.8 Jahreszeit...alle Jahreszeiten 9.9 Besondere Maßnahmen...leicht saurer Torfboden ist optimal; Boden feucht, aber nicht zu naß halten 10. Inokulation 10.1 Vorbereitung des Inokulums...belüftete Messiaen oder PDA oder Agar Medium S nach Messiaen oder Czapek-Dox- Kultur oder Abschaben der Platten 10.2 Quantifizierung des Inokulums...Sporenzählung, anpassen an 10 6 Sporen pro ml, Geringere Konzentration für ein sehr aggressives Isolat 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation Tage, Keimblatt bis 1. Blatt 10.4 Inokulationsmethode Wurzeln und Hypocotyle werden 5-15 Min. in Sporensuspension etaucht; Kürzen der Wurzeln optional 10.7 Abschließende Erfassungen Tage nach Inokulation 11. Erfassungen 11.1 Methode...visuelle 11.2 Erfassungsskala...Symptome: Wachstumsverzögerung, Welken, Vergilbung Braunfärbung der Gefäße bis oberhalb Keimblatt 11.3 Validierung der Prüfung...Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden. Standards in der Nähe des Grenzbereichs R/S helfen, zwischen verschiedenen Labors zu vergleichen. 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend [1] ausgeprägte Symptome vorhanden [9] schwache oder keine Symptome 13. Kritische Kontrollpunkte Die Prüfungsergebnisse können hinsichtlich des Inokulumdrucks aufgrund von Unterschieden bei Isolat, Sporenkonzentration, Bodenfeuchtigkeit und Temperatur leicht abweichen. 5 Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl 6 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

10 Anlage II, page 7 Zu 49: Resistenz gegen Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Methode Erhaltung des Pathotyps Natur des Mediums: Besondere Bedingungen: PDA oder synthetisches Medium (nach Messiaen) Kühlschrank, 4 C Durchführung der Prüfung: Pflanzenstadium: Temperatur: Licht: Anzucht: Art der Inokulation: 3 Laubblätter Tag: 22 C, Nacht: 16 C 14 Stunden Klimakammer oder Gewächshaus Fünfminütiges Tauchen der Wurzeln und der Hypocotylachse im Inokulum Dauer der Prüfung - Aussaat bis Inokulation: 18 bis 20 Tage - Inokulation bis Erfassung: 10 Tage Anzahl der getesteten Pflanzen: Bemerkungen: 10 bis 20 Pflanzen regelmäßige Erneuerung der Pathotypen erforderlich wegen von Verlust der Pathogenität Standardsorten: - anfällig: Motelle - resistent: - Momor (homozygot) - F1 Momor x Motelle (heterozygot) - das Frl Gen kontrolliert die Krankheit im heterozygoten Stadium nicht vollständig.

11 Anlage II, page 8 Zu 49: Resistenz gegen Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) 1. Pathogen...Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums...Naktuinbouw 7 (NL) und GEVES 8 (FR) 5. Isolat Feststellung der Pathogenität...Symptome bei anfälligen Tomaten 8. Vermehrung des Inokulums 8.1 Vermehrungsmedium...Kartoffeldextrose-Agar oder Medium Agar S nach Messiaen 8.4 Inokulationsmedium...Wasser, um die Agarplatten abzuschaben oder Czapek-Dox (7 Tage alte belüftete Kultur) 8.6 Ernte des Inokulums...durch doppeltes Musselintuch filtern 8.7 Prüfung des geernteten InokulumsSporenzählung; anpassen an 10 6 pro ml 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit des Inokulums Std., kühl stellen, um Keimen der Sporen zu verhindern 9. Prüfungsanlage 9.1 Anzahl der Pflanzen pro Genotyp.mind. 20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen...1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten Anfällig:...Motelle, Moneymaker Resistent:...Momor, Momor x Motelle Anmerkung:... Momor x Motelle leicht weniger resistent als Momor 9.4 Gestaltung der Prüfung...>20 Pflanzen; z. B. 35 Samen für 24 Pflanzen, einschl. 2 Nullproben 9.5 Prüfungseinrichtung...Gewächshaus oder klimatisierter Raum 9.6 Temperatur C (strenge Prüfung mit mildem Isolat) C (weniger strenge Prüfung mit starkem Isolat) 9.7 Licht...mindestens 12 Stunden pro Tag 9.8 Jahreszeit...alle Jahreszeiten 9.9 Besondere Maßnahmen....leicht saurer Torfboden ist optimal; Boden feucht, aber nicht zu naß halten 10. Inokulation 10.1 Vorbereitung des Inokulums...belüftete Kultur oder Platten abschaben 10.2 Quantifizierung des Inokulums Sporenzählung, anpassen an 10 6 Sporen pro ml 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation Tage, Keimblatt bis drittes Blatt 10.4 Inokulationsmethode Wurzeln und Hypocotyle werden 5-15 Min. in Sporensuspension getaucht 10.7 Abschließende Erfassungen Tage nach Inokulation 11. Erfassungen 11.1 Methode....visuelle; einige Pflanzen werden am Ende der Prüfung angehoben 11.2 Erfassungsskala...Symptome: Absterben der Pflanzen, Wachstumsverzögerung aufgrund von Wurzeldegradation Wurzeldegradation, nekrotische Punkte und nekrotische Läsionen an den Trieben 11.3 Validierung der Prüfung Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend...[1] Symptome vorhanden...[9] keine Symptome 13. Kritische Kontrollpunkte: Temperatur sollte während der Prüfung nie 27 C übersteigen; häufige Erneuerung der Genotypen kann aufgrund von Pathogenitätsverlust erforderlich sein. 7 Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl 8 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

12 Anlage II, page 9 Zu Resistenz gegen Fulvia fulva (Ff) (ex Cladosporium fulvum) Methode Erhaltung der Pathotypen Natur des Mediums: Besondere Bedingungen: PDA oder synthetisches Medium Subkultivierung der Isolate Durchführung der Prüfung: Pflanzenstadium: Temperatur: Licht: Anzucht: Art der Inokulation: 3 Laubblätter Tag: 24 C, Nacht: 16 C 12 Stunden Klimakammer mit möglichst hoher Luftfeuchtigkeit, Hemmen des Wachstums einige Tage vor der Inokulation durch Gießen der Wurzeln mit ALAR 85 (daminazoide), oder im Gewächshaus mit hoher Luftfeuchtigkeit, z.b. unter Polyethylenfolie. Besprühen der Blätter mit Pilzlösung Dauer der Prüfung - Aussaat bis Inokulation: 22 bis 25 Tage - Inokulation bis Erfassung: 20 bis 25 Tage Anzahl der getesteten Pflanzen: Bemerkungen: 30 Pflanzen Die Ausprägung der Symptome kann zwischen den Pflanzen aufgrund komplexer Resistenzgene variieren. Standardsorten: - anfällig: Monalbo - resistent: sind entsprechend der betroffenen Allele auszuwählen cf1: Stirling Castle cf2: Vetomold cf3: V 121 cf4: Purdue 135 cf5: IVT 1149 cf2 cf4: Vagabond cf2 cf5: F1 Vetomold x IVT 1149 cf2 cf4 cf5: F1 Vagabond x IVT 1149 cf6: F cf9: IVT 1154 Pathotyp 0: Gruppe A: Gruppe B: Gruppe C: Gruppe D: Gruppe E: Angela, Estrella, Sonatine, Sonato, Vemone Angela, Estrella, Sonatine, Sonato Angela, Estrella, Sonatine, Sonato, Vemone Angela, Estrella, Sonatine Estrella, Sonatine, Vemone Sonatine

13 Anlage II, page 10 Zu 50: Resistenz gegen Fulvia fulva (Ff) 1. Pathogen...Fulvia fulva (ex Cladosporium fulvum) 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums...Naktuinbouw (NL) 9 oder GEVES 10 (FR) 5. Isolat...Pathotyp Gruppe 0, A, B, C, D und E 6. Feststellung der Isolatidentität...mit genetisch definierten Vergleichssorten von GEVES (FR) A bricht Cf-2, B Cf-4, C Cf-2&4, D Cf-5, E Cf-2&4&5 7. Feststellung der Pathogenität...Symptome bei anfälligen Tomaten 8. Vermehrung des Inokulums Vermehrungssmedium...Kartoffeldextrose-Agar oder Malz-Agar oder ein synthetisches Medium 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit des Inokulums...4 Std., kühl lagern 9. Prüfungsanlage 9.1 Anzahl der Pflanzen pro Genotyp...über 20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen...1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten Anfällig:...Monalbo, Moneymaker Resistent für Pathotyp 0:...Angela, Estrella, Sonatine, Sonato, Vemone, Vagabond, IVT 1149, Vagabond IVT 1149, IVT 1154 Resistent für Pathotyp Gruppe A:...Angela, Estrella, Sonatine, Sonato Resistent für Pathotyp Gruppe B:...Angela, Estrella, Sonatine, Sonato, Vemone Resistent für Pathotyp Gruppe C:...Angela, Estrella, Sonatine Resistent für Pathotyp Gruppe D:...Estrella, Sonatine, Vemone Resistent für Pathotyp Gruppe E:...Sonatine, Jadviga, Rhianna, IVT Prüfungseinrichtung...Gewächshaus oder klimatisierter Raum 9.6 Temperatur...Tag 22 C, Nacht: 20 oder Tag: 25 C, Nacht 20 C 9.7 Licht...12 Stunden oder länger 9.9 Besondere Maßnahmen...Je nach Einrichtung und Wetter kann es notwendig sein die Feuchtigkeit zu erhöhen z. B. Feuchtigkeitszelt 3-4 Tage nach Inokulation geschlossen; und danach zu 66% bis 80% tagsüber geschlossen, bis Ende 10. Inokulation Vorbereitung des Inokulums...gleichmäßig kolonisierte Platten vorbereiten, z. B. 1 für 36 Pflanzen; Sporen durch Schaben mit Wasser und Tween20 von den Platten ablösen; durch doppeltes Musselintuch filtern 10.2 Quantifizierung des Inokulums...Sporenzählung; anpassen an 10 5 Sporen pro ml oder mehr 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation Tage (einschl. 12 T. bei 24 ), 2-3 Blätter 10.4 Inokulationsmethode...auf trockene Blätter sprühen 10.7 Abschließende Erfassungen...14 Tage nach Inokulation 11. Erfassungen 11.1 Methode visuelle Untersuchung der achsentfernten Seite der inokulierten Blätter 11.2 Erfassungsskala...Symptom: samtig, weiße Flecken 11.3 Validierung der Prüfung... Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend...[1] Symptome vorhanden...[9] keine Symptome Extrem hohe Luftfeuchtigkeit kann schroffe braune Flecken auf allen Blättern verursachen. Diese sollen nicht als Abweicher betrachtet werden. 13. Kritische Kontrollpunkte: Ff Sporen haben variable Größe und Morphologie. Auch kleine Sporen sind lebensfähig. Pilzplatten werden nach 6-10 Wochen allmählich steril werden. Gute Kultur bei -80 C lagern. Aus praktischen Gründen können die Pflanzen nicht länger als 14 Tage in einem Zelt belassen werden. 9 Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl 10 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

14 Anlage II, page 11 Zu : Resistenz gegen das Tomatenmosaikvirus, Tobamovirus (ToMV) Pathotypen 0, 1 und 2 Methode Erhaltung der Pathotypen Langzeitlagerung der Stämme als getrocknete Blätter unter 10 C. Verwendet wird Pathotyp, 0 repräsentiert durch Isolat INRA Avignon (Acuba-Mosaik-Pathotyp). Der Virus sollte vor der Verwendung zur Inokulation der Prüfung auf der anfälligen Kontrolle vermehrt werden. Durchführung der Prüfung Pflanzenstadium: Die Pflanzen werden im Gewächshaus oder in Klimakammern bis zum Keimblattstadium (Erscheinen der ersten Blätter) oder bis zum zweiten Laubblatt-Stadium kultiviert. In jede Prüfung ist mindestens eine resistente und eine anfällige Sorte aufzunehmen. Folgende Sorten werden zur Kontrolle verwendet: Aus jeder Zeile sollte mindestens eine der angegebenen Sorten gewählt werden, die jeweils einen Resistenz-Phänotyp vertritt; der Resistenz-Phänotyp für die 3 Pathotypen von ToMV ist angegeben. Mobaci und Moperou ermöglichen die Prüfung der Identität des Pathotyps des Virus. Monalbo x Momor hilft bei der Auswertung des unterscheidbaren Resistenz-Phänotys mit Nekrosen. Sorte Resistenz-Phänotyp ToMV:0 ToMV:1 ToMV:2 Marmande, Monalbo S S S Mobaci R S R Moperou R R S Monalbo x Momor RN RN RN Momor, Gourmet R R R R = Resistenz vorhanden; keine Symptome RN = Resistenz vorhanden; eine variabler Anteil Pflanzen mit einiger oder starker Nekrose; alle anderen Pflanzen ohne Symptome. S = Resistenz fehlend; Mosaiksymptome Temperatur: Die Prüfung erfolgt in Klimakammern oder im Gewächshaus bei 24 bis 26 C. Bei höheren Temperaturen kann die Resistenz verlorengehen. Inokulum und Art der Inokulation: Mechanische Inokulation durch Einreiben von Keimblättern (erste hervortretende Blätter) oder von zwei entfalteten Laubblättern mit Inokulumlösung aus pulverisierten befallenen Blättern in einem Puffer mit Carborundum. Die Blätter können nach der Inokulation gespült werden. Für die Ausprägung der Symptome ist Belichtung wichtig. Dauer der Prüfung 24 bis 42 Tage von Aussaat bis Inokulation. Anzahl der getesteten Pflanzen: Mindestens 20 Pflanzen. Benotung: 12 bis 21 Tage nach der Inokulation, wenn die Systeme auf der anfälligen Kontrollsorte gut entwickelt sind. Notenskala und Auswertung der Ergebnisse: R: ohne Symptome oder mit Nekrosen (Nekrose können an heterozygoten Pflanzen für Resistenzgen erfasst werden, diese Pflanzen sind nicht resistent) S: Mosaiksymptome.

15 Anlage II, page 12 Zu 51: Resistenz gegen das Tomatenmosaikvirus (ToMV) 1. Pathogen...Tomatenmosaikvirus 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums...Naktuinbouw (NL) 11 oder GEVES 12 (FR) 5. Isolat...Stamm 0 (z. B. Isolat INRA Avignon ) 1 und 2 6. Feststellung der Isolatidentität...genetisch definierte Tomatenstandardsorten Mobaci (Tm1), Moperou (Tm2), Momor (Tm2 2 ) 7. Feststellung der Pathogenität...bei anfälligen Pflanzen 8. Vermehrung des Inokulums 8.1 Vermehrungsmedium...lebende Pflanze 8.2 Vermehrungssorte...z. B. Moneymaker, Marmande 8.7 Prüfung des geernteten Inokulums...Option: an Nicotiana tabacum Xanthi, Läsionen nach 2 Tagen prüfen 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit des Inokulums...frisch >1 Tag, getrocknet >1 Jahr 9. Prüfungsanlage 9.1 Anzahl der Pflanzen pro Genotyp...mind. 20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen...1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten Anfällig...Marmande, Monalbo Resistent gegen ToMV: 0 und 2...Mobaci Resistent gegen ToMV: 0 und 1...Moperou Resistent mit Nekrose... Monalbo x Momor Resistent...Gourmet 9.4 Gestaltung der Prüfung...Behandlung der Nullproben mit PBS und Carborundum oder vergleichbarer Pufferlösung 9.5 Prüfungseinrichtung...Gewächshaus oder klimatisierter Raum 9.6 Temperatur...24 bis 26 C 9.7 Licht...12 Stunden oder länger 9.8 Jahreszeit...Symptome sind im Sommer ausgeprägter 10. Inokulation 10.1 Vorbereitung des Inokulums...1 g Blatt mit Symptomen mit 10 ml PBS oder vergleichbarer Pufferlösung homogenisieren, Carborundum zu Pufferlösung hinzufügen (1g/30ml) 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation...Keimblätter oder 2 Blätter 10.4 Inokulationsmethode...vorsichtiges Einreiben 10.7 Abschließende Erfassungen Tage nach Inokulation 11. Erfassungen 11.1 Methode...visuelle 11.2 Erfassungsskala...Symptome für die Anfälligkeit: Mosaik oben, Missbildung der Blätter Resistenzsymptome (basierend auf Überempfindlichkeit): Lokale Nekrose, Topnekrose, systemische Nekrose 11.3 Validierung der Prüfung...Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden Anmerkung: bei einigen heterozygoten Sorten kann ein variabler Anteil an Pflanzen ausgeprägte systemische Nekrose oder einige nekrotische Punkte aufweisen, wohingegen andere Pflanzen keine Symptome aufweisen. Dieser Anteil kann von Versuch zu Versuch unterschiedlich hoch sein. 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend...[1] Symptome für Anfälligkeit vorhanden...[9] keine Symptome oder Symptome von Überempfindlichkeitsresistenz 13. Kritische Kontrollpunkte: Temperatur und Licht können die Entwicklung von Nekrose beeinflussen. Mehr Licht bedeutet mehr Nekrose. Bei Temperaturen über 26 C kann die Resistenz zusammenbrechen. Resistente heterozygote Sorten können symptomfreie Pflanzen und Pflanzen mit schwerer Nekrose aufweisen. Trotz der offensichtlichen Aufspaltung kann die Probe als beständig für Resistenz betrachtet werden. Anmerkung: Empfohlen wird der Stamm INRA Avignon für ToMV: 0. Dieser Stamm verursacht ein auffallend gelbes Aucuba-Mosaik. 11 Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl 12 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

16 Anlage II, page 13 Zu 52: Resistenz gegen Phytophthora infestans (Pi) Methode Erhaltung des Pathotyps Natur des Mediums: Besondere Bedingungen: Agarmedium 18 C Durchführung der Prüfung: Pflanzenstadium: Temperatur: Licht: Anzucht: Art der Inokulation: Dauer der Prüfung 10 Laubblätter 18 C nach Inokulation 24 Stunden Dunkelheit, danach 10 Stunden Dunkelheit pro Tag Klimakammer oder Gewächshaus Besprühen mit Sporensuspension, Isolat frisch von Blättern gewonnen - Aussaat bis Inokulation: 6 bis 7 Wochen - Inokulation bis Erfassung: 7 bis 8 Tage Luftfeuchtigkeit: während der ersten vier Tage nach Inokulation sehr hoch (Pflanzen mit Polyethylenfolie abdecken) Bemerkungen: heterozygote Sorten können Symptome mit einer etwas geringeren Ausprägung aufweisen Standardsorten: - anfällig: Saint Pierre, Heinz resistent: Pieraline, Heline, Pyros, F1 Pieraline x Pieralbo

17 Anlage II, page 14 Zu 52: Resistenz gegen Phytophthora infestans (Pi) 1. Pathogen...Phytophthora infestans 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums Isolat...stark pathogen auf Tomate 6. Feststellung der Isolatidentität...Biotest 7. Feststellung der Pathogenität...Biotest 8. Vermehrung des Inokulums Vermehrungsmedium...V8 Agar oder PDA oder Malzextrakt-Agar Medium 8.2 Vermehrungssorte...anfällige Tomatensorte 8.3 Pflanzenstadium bei der Inokulation 4 Wochen 8.4 Inokulationsmedium...Wasser 8.5 Inokulationsmethode...Besprühen 8.6 Ernte des Inokulums...Sporen von angefeuchteten Platten waschen 8.7 Prüfung des geernteten Inokulums Sporangiosporen zählen 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit des Inokulums...4 h nach Kühlung auf 8-10 C 9. Prüfungsanlage Anzahl der Pflanzen pro Genotyp.20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen...1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten... Anfällig...Saint Pierre, Heinz 1706 Resistent...Pieraline, Heline, Pyros, Pieraline x Pieralbo, Fline Bemerkung: heterozygote Sorten können eine etwas geringere Ausprägung aufweisen. 9.5 Prüfungseinrichtung...Gewächshaus 9.6 Temperatur...18 C 9.7 Licht:...nach Inokulation 24 Stunden Dunkelheit, danach 10 Stunden Dunkelheit pro 24 Stunden 9.9 Besondere Maßnahmen...Feuchtekammer während vier Tagen nach Inokulation 10. Inokulation Vorbereitung des Inokulums...Sporen von Sporenbildungsplatten abwaschen, bei 8-10 kühl lagern Kühlung löst Freisetzung von Zoosporen aus Bemerkung...Frische Sporen verwenden aus wiederholten Infektionszyklen an Tomatenpflanzen während 3 Wochen vor der Inokulation 10.2 Quantifizierung des Inokulums...Sporenzählung, anpassen an 10 4 Sporen pro ml 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation..10 entfaltete Blätter (6 bis 7 Wochen) 10.4 Inokulationsmethode...Besprühen 10.7 Abschließende Erfassungen Tage nach Inokulation 11. Erfassungen Methode...visuelle 11.2 Erfassungsskala...Symptome: wässrige Läsionen, Vergilben und Absterben 11.3 Validierung der Prüfung...Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend [1] starke Symptome vorhanden [9] keine Symptome oder leichte Symptome 13. Kritische Kontrollpunkte: Resistenz ist nur in ausgewachsenen Pflanzen gut ausgeprägt.

18 Anlage II, page 15 Zu 53: Resistenz gegen Pyrenochaeta lycopersici (Pl) Methode Erhaltung des Pathotyps: 1. Methode: an Wurzeln von Pflanzen, die im Gewächshaus in natürlich (oder verstärkt natürlich) kontaminierter Erde aufwuchsen 2. Methode: Kultivierung von Inokulum auf im Autoklaven sterilisiertem Sand oder Gartenerde, vermischt mit Hafermehl (künstliche Infektion) Durchführung der Prüfung: Pflanzenstadium: 1. Methode: an ausgewachsenen Pflanzen etwa bei Fruchtreife 2. Methode: 4 bis 6 Wochen nach Aussaat (erster blühender Blütenstand) Temperatur: Licht: Tag: 24 C, Nacht: 14 C mindestens 12 Stunden Anzucht und Art der Inokulation: 1. Methode: Pflanzen werden ausgepflanzt in infiziertem Boden, der mit infizierten Wurzelstücken vermischt ist 2. Methode: Pflanzen werden ausgesät in dampfdesinfizierter sandiger Gartenerde, die mit Inokulum vermischt ist Dauer der Prüfung - Aussaat bis Inokulation: 1. Methode: 6 Wochen 2. Methode: bei Aussaat - Inokulation bis Erfassung: 1. Methode: 3-4 Monate 2. Methode: 4 bis 6 Wochen Anzahl der getesteten Pflanzen: mindestens 10 Bemerkungen: 1. Methode: ist wirksamer zur deutlichen Trennung anfälliger von resistenten Sorten 2. Methode: die Pathogenität der Stämme sollte vor der Inokulation an Wurzeln junger Pflanzen getestet werden Standardsorten: anfällig: Montfavet H 63.5 resistent: Kyndia, Moboglan, Pyrella

19 Anlage II, page 16 Zu 53: Resistenz gegen Pyrenochaeta lycopersici (Pl) 1. Pathogen...Pyrenochaeta lycopersici 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums Isolat Feststellung der Pathogenität...Biotest 8. Vermehrung des Inokulums 8.1 Vermehrungsmedium...V8 Agar 8.2 Vermehrungssorte...anfällige Tomatensorte 8.3 Pflanzenstadium bei der Inokulation Samen 8.4 Inokulationsmedium...Mischung aus Erde, z. B. (70%), Sand (20%) und Inokulum (10.1) (10%) oder Erde vermischt mit erkrankten, in kleine Teile geschnittenen Wurzeln 8.5 Inokulationsmethode......aussäen oder zur Fruchtreife verpflanzen 8.6 Ernte des Inokulums...erkrankte Wurzeln werden nach 2-4 Monaten geerntet 8.7 Prüfung des geernteten Inokulumsvisuelle Kontrolle von Läsionen an den Wurzeln 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit des Inokulums...der Pilz wird nicht schnell absterben, kann aber seine Pathogenität innerhalb von 1 Woche nach Isolation auf einem Agarmedium verlieren 9. Prüfungsanlage Anzahl der Pflanzen pro Genotyp.20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen...1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten... Anfällig:...Montfavet H 63.5 Resistent:...Kyndia, Moboglan, Pyrella 9.5 Prüfungseinrichtung...Gewächshaus oder Klimazelle 9.6 Temperatur...Tag 24 C, Nacht 14 C 9.7 Licht...mind. 12 Stunden 10. Inokulation 10.1 Vorbereitung des Inokulums...z. B. zweifach autoklavierte Mischung aus Erde mit 10% Hafermehl z. B. Inkubation über Tage bei 20 C, gelegentlich wiederholt wenden 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation.6 Wochen 10.4 Inokulationsmethode....Verpflanzen in Mischung aus Erde, Sand und Inokulum (8.4) oder Erde vermischt mit erkrankten, in kleine Teile geschnittenen Wurzeln...oder natürlich infizierter Erde 10.7 Abschließende Erfassungen 6-8 Wochen nach Verpflanzung (blühende Pflanze) 11. Erfassungen 11.1 Methode...visuelle 11.2 Erfassungsskala...Symptome: braune Läsionen an Wurzeln 11.3 Validierung der Prüfung...Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend [1] Symptome vorhanden [9] keine Symptome 13. Kritische Kontrollpunkte: Der Pilz verliert seine Pathogenität schnell nach Isolation auf einem Agarmedium. Das Isolat sollte auf lebenden Pflanzen am Leben erhalten werden.

20 Anlage II, page 17 Zu 54: Resistenz gegen Stemphylium Methode Erhaltung des Isolats Natur des Mediums: Besondere Bedingungen: auf PDA oder synthetischem Medium Kühlschrank, 4 C, ohne Beleuchtung Durchführung der Prüfung: Pflanzenstadium: Temperatur: Licht: Anzucht: Art der Inokulation: drei Laubblätter konstant Tag: 24 C, Nacht: 24 C 12 Stunden Gewächshaus oder Klimakammer Besprühen der Blätter Dauer der Prüfung - Aussaat bis Inokulation: 20 bis 22 Tage - Inokulation bis Erfassung: 10 Tage Anzahl der getesteten Pflanzen: Bemerkungen: Standardsorten: 30 Pflanzen Herstellung des Inokulums auf V8 Medium unter Licht anfällig: Monalbo resistent: Motelle, F1 Motelle x Monalbo

21 Anlage II, page 18 Zu 54: Resistenz gegen Stemphylium spp. (Ss) 1. Pathogen...Stemphylium spp. z. B. Stemphylium solani 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums...GEVES 13 (FR) 5. Isolat Feststellung der Pathogenität...Biotest 8. Vermehrung des Inokulums 8.1 Vermehrungsmedium...PDA (12 Stunden pro Tag unter nah-ultraviolettem Licht, um...sporenbildung zu induzieren) oder V8 9. Prüfungsanlage Anzahl der Pflanzen pro Genotyp.mind. 20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen...1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten... Anfällig:...Monalbo Resistent:...Motelle, F1 Motelle x Monalbo 9.5 Prüfungseinrichtung...Gewächshaus oder Klimazelle 9.6 Temperatur...24 C 9.7 Licht...mind. 12 Stunden 9.9 Besondere Maßnahmen...Inkubation in Tunnel mit 100% relativer Feuchtigkeit oder Feuchtigkeitszelt 5 Tage nach Inokulation geschlossen; danach 80% bis Ende 10. Inokulation Vorbereitung des Inokulums...Sporenbildungsplatten (8.1) werden abgeschabt und über Nacht...luftgetrocknet Am nächsten Tag werden die Platten 30 Min. lang in einem Gefäß mit demineralisiertem Wasser eingeweicht und bewegt, oder Sporenbildungsplatten werden mit Wasser und Tween abgeschabt Die Sporensuspension wird durch ein doppeltes Musselintuch gefiltert Quantifizierung des Inokulums Sporen pro ml 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation Tage (drei entfaltete Blätter) 10.4 Inokulationsmethode.... Sprühen 10.7 Abschließende Erfassungen Tage nach Inokulation 11. Erfassungen Methode...visuelle 11.2 Erfassungsskala...Symptome: nekrotische Läsionen an Keimblättern und Blättern; Vergilbung von Blättern 11.3 Validierung der Prüfung...Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend [1] Symptome (11.2) vorhanden [9] keine Symptome oder weniger als Resistenzstandard 13. Kritische Kontrollpunkte: und 10.1 Anmerkung: Einige Isolate von Stemphylium können nicht leicht entweder Stemphylium solani oder einer verwandten Arten zugeordnet werden. Diese Stemphylium-Isolate können aber dennoch zur Prüfung der Resistenz gegen Stemphylium solani nützlich sein. 13 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

22 Anlage II, page 19 Zu 55: Resistenz gegen Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst) Methode Erhaltung der Pathotypen Natur des Mediums: Besondere Bedingungen: KING B Medium C, im Dunkeln, Transplantieren alle 10 Tage Durchführung der Prüfung: Pflanzenstadium: Temperatur: Licht: Anzucht: Art der Inokulation: drei Laubblätter Tag: 22 C, Nacht: 16 C 12 Stunden Klimakammer im Sommer, Gewächshaus im Winter Besprühen der Blätter Dauer der Prüfung - Aussaat bis Inokulation: 20 bis 22 Tage - Inokulation bis Erfassung: 8 Tage Anzahl der getesteten Pflanzen: Bemerkungen: Standardsorten: 30 Pflanzen jährliche Erneuerung der Pathotypen anfällig: Monalbo resistent: Ontario 7710, F1 Monalbo x Ontario 7710

23 Anlage II, page 20 Zu 55: Resistenz gegen Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst) 1. Pathogen...Pseudomonas syringae pv. tomato 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums...GEVES 14 (FR) oder Naktuinbouw 15 (NL) 5. Isolat Feststellung der Isolatidentität Feststellung der Pathogenität...Biotest 8. Vermehrung des Inokulums Vermehrungsmedium...King s B Agar Medium, Dunkelheit 8.2 Vermehrungssorte...anfällige Sorte 8.4 Inokulationsmedium...Wasser 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit...Platte wird nach 10 Tagen unbrauchbar des Inokulums 9. Prüfungsanlage Anzahl der Pflanzen pro Genotyp.mindestens 20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen 1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten... Anfällig:...Monalbo Resistent:...Ontario 7710, Monalbo x Ontario 7710, Tradiro, Hypeel Prüfungseinrichtung...Gewächshaus oder Klimakammer 9.6 Temperatur...Tag: 22 C, Nacht: 16 C oder 20 C 9.7 Licht...12 Stunden 9.9 Besondere Maßnahmen...Feuchtekammer 3 Tage oder länger erforderlich 10. Inokulation Vorbereitung des Inokulums...Sporen von der Platte waschen. Die Platte sollte mehr als 2-4 Tage alt sein Quantifizierung des Inokulums...Verdünnen auf 10 6 Kolonien formende Einheiten pro ml 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation..drei entfaltete Blätter (20-22 Tage) 10.4 Inokulationsmethode...Besprühen der Blätter mit Bakterienlösung 10.7 Abschließende Erfassungen...8 Tage oder länger nach der Inokulation 11. Erfassungen Methode...visuelle 11.2 Erfassungsskala...schmierig aussehende, bakterielle Flecken, Chlorose am Rand punktgroße Läsionen < 1.0 mm 11.3 Validierung der Prüfung...Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend...[1] bakterielle Flecken vorhanden...[9] keine Symptome oder punktgroße Läsionen 13. Kritische Kontrollpunkte:...Pathotypen können bei der Lagerung an Ansteckungskraft verlieren 14 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr 15 Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl

24 Anlage II, page 21 Zu 56: Resistenz gegen Ralstonia solanacearum (Rs) Pathotyp 1 Methode Erhaltung des Pathotyps: Natur des Mediums: Besondere Bedingungen: Zwei Pathotypen können die Tomate befallen: Pathotyp 1 (aktiv bei C) und Pathotyp 3 (aktiv bei C) Gefrieren bei -80 C Kultur in PYDAC unter Öl; Suspension in sterilem destilliertem Wasser Konservierung bei 15 C in sterilem destilliertem Wasser Durchführung der Prüfung: Pflanzenstadium: Temperatur (in der Klimakammer): Licht: Anzucht: zwei Möglichkeiten: Art der Inokulation: 3 bis 4 Laubblätter Tag C, Nacht: 25 C Monate - in der Klimakammer: schneller Test - im Freiland: langdauernder Test (nur unter Klimabedingungen wie in den Tropen anwendbar) vor dem Pflanzen am Fuß jeder Pflanze mindestens 2 ml des Inokulums deponieren, das auf 10 7 Kolonien pro ml verdünnt wurde Dauer der Prüfung - Aussaat bis Inokulation: 3 bis 4 Wochen - Inokulation bis Erfassung: - 3 Wochen für den schnellen Test - 2 Monate für den langdauernden Test Anzahl der getesteten Pflanzen: mindestens 30 hohe Luftfeuchtigkeit sicherstellen Standardsorten: - anfällig: Floradel - resistent: Caraïbo

25 Anlage II, page 22 Zu 56: Resistenz gegen Ralstonia solanacearum, Pathotyp 1 (Rs) 1. Pathogen...Ralstonia solanacearum (ex Pseudomonas solanacearum) 2. Quarantänestatus...ja 3. Wirtsarten...Solanum lycopersicum 4. Quelle des Inokulums Isolat...Pathotyp 1 hat einen weitreichenden Wirtskreis, einschließlich Tomate Pathotyp 3 hat einen eingeschränkten Wirtskreis, ebenfalls eingschließlich Tomate 8. Vermehrung des Inokulums Vermehrungsmedium...Yeast Peptone Glukose (YPG) Agar oder PYDAC Besondere Bedingungen: C (Pathogen 3 erfordert normalerweise C) 8.5 Inokulationsmethode...Vor der Verpflanzung 2 ml Inokulum am Fuß jedes Pflanzlings deponieren 8.8 Haltbarkeit/Lebensfähigkeit...Lösung in sterilem destillierten Wasser bei 15 C (<1 Jahr) des Inokulums 9. Prüfungsanlage Anzahl der Pflanzen pro Genotyp.20 Pflanzen 9.2 Anzahl der Wiederholungen 1 Wiederholung 9.3 Kontrollsorten... Anfällig:...Floradel Resistent:...Caraibo 9.5 Prüfungseinrichtung...Klimakammer 9.6 Temperatur...Tag: C, Nacht: 25 C 9.7 Licht Stunden 9.9 Besondere Maßnahmen...hohe Luftfeuchtigkeit 10. Inokulation Quantifizierung des Inokulums...Dichte 10 7 Kolonien formende Einheiten pro ml 10.3 Pflanzenstadium bei Inokulation..drei bis vier voll entwickelte Blätter (3 Wochen) 10.4 Inokulationsmethode Abschließende Erfassungen...3 Wochen nach Inokulation 11. Erfassungen...bei Zwischenstufen resistenter Sorten, könnten Bakterien am unteren Teil der Pflanze vorhanden sein 11.3 Validierung der Prüfung...Die Bewertung der Sortenresistenz sollte mit den Ergebnissen resistenter und anfälliger Kontrollen kalibriert werden 12. Auswertung der Testergebnisse im Vergleich mit Kontrollsorten fehlend [1] Symptome vorhanden [9] Symptomfrei oder geringer als bei Resistenzstandard 13. Kritische Kontrollpunkte: Ralstonia solanacearum hat in einigen Ländern Quarantänestatus und steht auf der EPPO-Warnliste.