1 Reaktions/ 2 HTS 1 Zell und
1 Zell und 2 HTS Technische Informationen 8 I 2 Vapour Diffusion Anwendungen 8 I 4 Well CrystalQuick TM 8 I 4 24 Well ComboPlate TM 8 I 6 CrystalBridge TM 8 I 6 Deckgläser 8 l 6 Microbatch unter Öl Anwendungen 8 I 7 60 Well TerasakiPlatte 8 I 7 72 Well TerasakiPlatte 8 I 7 Well IMP@CT TM Platte 8 I 8 156 Well IMP@CT TM Platte 8 I 8 CrystalSlide TM 8 l 9 1 Reaktions/
Proteinkristallisation Eine wichtige Methode zur Strukturbestimmung von Proteinen ist die Röntgenstrukturanalyse von Proteinkristallen. Die Bestimmung der dreidimensionalen Struktur von Proteinen hat zu wesentlichen Fortschritten in der Grundlagenforschung und vor allem auch in den Bereichen Structural Genomics und Structurebased Drug Design beigetragen. Die gängigste Methode zur Kristallisation von Proteinen ist die Dampfdiffusion (Vapour Diffusion), welche die Sitting Drop und die Hanging Drop Technik umfasst (Abb. 1a und Abb. 1b). Ein Tropfen Proteinlösung wird hierbei mit einem Tropfen Reagenzienlösung vermischt und gemeinsam mit einem größeren Volumen an Reagenzienlösung in einem abgedichteten Well inkubiert. Konzentrationsgradienten zwischen Probetropfen und Reagenzienlösung werden durch Diffusion ausgeglichen, wodurch, wenn die richtigen Bedingungen gewählt wurden, der Kristallisationsprozess induziert wird. Deckglas Probetropfen Öl Reagenzienlösung Probetropfen a) Hanging Drop b) Sitting Drop c) Microbatch Silikonfett VIEWseal TM Abbildung 1: Kristallisationsmethoden a) Hanging Drop b) Sitting Drop c) Microbatch Inzwischen ebenfalls weit verbreitet ist die Microbatch unter Öl Methode (Abb. 1c). Hierbei wird der Probetropfen mit Öl überschichtet. Die Auswahl des verwendeten Öls bestimmt die Diffusionsgeschwindigkeit des Wassers im Probetropfen durch das Öl hindurch. Eine Vielzahl von Faktoren beeinflusst die Kristallisation von Proteinen. Da die optimalen Kristallisationsbedingungen im Allgemeinen nicht vorhersehbar sind, ist oftmals eine Vielzahl von Ansätzen notwendig, um geeignete Kristallisationsbedingungen zu ermitteln und zu optimieren. Die Proteinkristallisation stellt deshalb immer noch einen Engpass bei der Strukturaufklärung dar. Der Einsatz von Hochdurchsatz Technologien, wie Pipettierroboter und standardisierte, erlaubt es, eine große Anzahl von Kristallisationsbedingungen in kurzer Zeit und mit relativ geringen Proteinmengen zu testen. Unter dem Namen CrystalStar TM hat Greiner BioOne eine Familie von und Zubehör entwickelt, die den Anforderungen der HochdurchsatzKristallisation gerecht werden. Format Auf die Eignung unserer Proteinkristallisationsplatten für die Verwendung mit automatisierten Systemen legen wir großen Wert. Deshalb haben alle Kristallisationsplatten, mit Ausnahme der TerasakiPlatten, Grundmaße, die dem ANSI 12004 Standard entsprechen. Weitere Informationen finden Sie auf unserer Website: /technische_informationen 1 Reaktions/ 2 HTS 1 Zell und 8 2
1 Zell und BarcodeEtikettierung Eine kundenspezifische BarcodeEtikettierung ist auf Wunsch bei allen Kristallisationsplatten, mit Ausnahme der TerasakiPlatten, möglich. Material Polystyrol (PS) ist der am häufigsten verwendete Rohstoff für Kristallisationsplatten aus Kunststoff (Ausnahme: Platten, s. unten). Polystyrol zeichnet sich durch hohe Transparenz und somit hervorragende optische Eigenschaften aus. Hydrophobe Platten Platten mit hydrophober Oberfläche eignen sich besonders gut für die NanoliterKristallisation von Membranproteinen. Die Oberflächeneigenschaften hydrophober Platten wirken dem Spreizen detergenzienhaltiger Tropfen bzw. Tropfen mit oberflächenaktiven Fällungsmitteln, wie MPD, effizient entgegen (Abb. 2). Zusätzlich wird der Meniskus der ScreeningLösung im Reservoir deutlich reduziert, sodass Kontaminationen durch Kriechen der ScreeningLösung in die Kristallisationsnäpfchen vermieden werden. Platten (low birefringence) Platten sind besonders für die Verwendung von polarisiertem Licht geeignet. Die Platten sind aus einem zyklischen Polyolefin gefertigt. Sie zeichnen sich durch eine sehr geringe Doppelbrechung im Vergleich zu Platten aus Polystyrol aus (Abb. ). Außerordentliche Transparenz, hohe Chemikalienbeständigkeit und geringe Wasserabsorption sind weitere Merkmale der Platten. 1a) a) b) Abbildung 2: Vergleich von (a) Plus mit hydrophober Oberfläche und (b) Standard. Das Tropfenvolumen beträgt 100 nl, die verwendete Lösung enthält 50 mm noctylglucosid. Veröffentlichung der Aufnahmen mit freundlicher Genehmigung von Karl Harlos, The Wellcome Trust Centre for Human Genetics, Oxford, UK. 2a) a) 1b) 2b) b) Abbildung : Platten in polarisiertem Licht: (a) Standard Versionen mit starker Doppelbrechung, (b) Versionen mit geringerer Doppelbrechung. (1) RW (2) SW () LP Weitere Informationen über Proteinkristallisation Forum No. 7: Advanced highthroughput platforms for protein crystallisation (F07 016) 2 HTS Kat.Nr. 662 150 662 050 609 101 609 801 609 10 609 80 609 120 609 820 609 171 609 871 609 180 65 102 654 102 67 170 790 801 676 070 676 040 662 145 501 870 50 870 50 850 Name ComboPlate ComboPlate SW (Quadratische Wells) SW (Quadratische Wells) Plus SW (Quadratische Wells) Plus SW (Quadratische Wells) RW (Runde Wells) RW (Runde Wells) LP (Niedrige Ausführung) LP (Niedrige Ausführung) Plus LP (Niedrige Ausführung) TerasakiPlatte TerasakiPlatte IMP@CT Platte IMP@CT Platte VIEWseal AMPLIseal CrystalBridge Deckglas, 18 mm ø, Stärke 2 (0,19 0,22 mm) Deckglas, 22 mm ø, Stärke 2 (0,19 0,22 mm) Deckglas, 22 mm ø, Stärke 5 (0,5 0,6 mm) Tabelle 1: Übersicht CrystalStar Kristallisationsplatten und Zubehör Anzahl Probennäpfchen Vapour Diffusion Microbatch 60 72 156 Zubehör Anzahl Reservoire 24 24 1 Besonderheit vorgefettet hydrophob, hydrophob hydrophob Glas, silikonisiert Glas, silikonisiert Glas, silikonisiert 1 Reaktions/ 8
Vapour Diffusion Anwendungen 1 Zell und 2 HTS Vapour Diffusion Anwendungen Well Platten für Sitting Drop Anwendungen Greiner BioOne hat in Zusammenarbeit mit dem Genomics Institute of the Novartis Research Foundation (GNF) in San Diego (USA), dem MaxPlanckInstitut (MPI) und der Proteinstrukturfabrik (PSF) in Berlin eine Familie von für Sitting Drop Anwendungen im Well Format entwickelt. Jedes der Reservoire beinhaltet eine erhöhte Plattform mit je einem oder je drei Kristallisationsnäpfchen. Die Platten sind für das Abdichten mit VIEWseal Klebefolie ( S. 12 l 4) optimiert. Die Maße und Toleranzen der Platten sind für automatisierte Anwendungen geeignet. Alle Platten sind in einer Version für die Arbeit mit polarisiertem Licht erhältlich. Platten mit hydrophober Oberfläche finden Sie in der Tabelle unter Plus Platten. Abbildung : Näpfchengeometrie, CrystalQuick TM RW SW Quadratische Wells (Abb. 1, Abb. 2) SW bietet mit jeweils drei quadratischen Kristallisationsnäpfchen pro Reservoir die Möglichkeit, Ansätze pro Platte zu testen. Der e Boden der Wells sorgt für gute optische Eigenschaften. Das maximale Volumen der Kristallisationstropfen beträgt 4 µl (USPatent Nr. 7005008 B2). Abbildung 4: Proteinkristalle in CrystalQuick TM RW, mit freundlicher Genehmigung von B. Blattmann, NCCR Structural Biology, Schweiz LP Niedrige Ausführung (Abb. 5, Abb. 6) LP (niedrige Ausführung) zeichnen sich durch exzellente optische Eigenschaften aus. Die Kristallernte wird durch die abgeschrägten Seitenwände der Kristallisationsnäpfchen erleichtert. Das niedrige Profil verringert den Platzbedarf bei der Lagerung. Abbildung 1: Näpfchengeometrie, CrystalQuick TM SW Abbildung 5: Näpfchengeometrie, CrystalQuick TM LP 1 Reaktions/ Abbildung 2: Kristallisation von Lysozym in CrystalQuick TM SW RW Runde Wells (Abb., Abb. 4) Crystal Quick RW bietet mit jeweils drei runden Kristallisationsnäpfchen pro Reservoir die Möglichkeit, Ansätze pro Platte zu testen. Der Boden der Kristallisationsnäpfchen ist konkav. Das maximale Volumen der Kristallisationstropfen beträgt 1,9 µl. 0.50 mm Abbildung 6: Kristallisation von Lysozym in CrystalQuick TM LP, mit freundlicher Genehmigung von RoboDesign International Inc., Carlsbad (USA) Alle Platten verfügen über eine alphanumerische Näpfchenkennzeichnung. 8 4
Vapour Diffusion Anwendungen 1 Zell und 609 101 609 10 609 801 609 80 609 120 609 820 609 171 609 180 609 871 Well CrystalQuick TM Well CrystalQuick TM Plus Abdeckplatten und folien S. 12 I 2 ff. Kristallisationsplatten für Sitting Drop Anwendungen mit unterschiedlichen Näpfchengeometrien und Alphanumerische Näpfchenkennzeichnung 2 HTS CrystalQuick TM Kat.Nr. 609 101 609 801 609 120 609 820 609 171 609 871 Standard Standard Standard Näpfchengeometrie Näpfchenboden Näpfchen je Reservoir quadratisch (SW) quadratisch (SW) rund (RW) konkav rund (RW) konkav quadratisch (LP) 1 quadratisch (LP) 1 Max. Näpfchenvolumen [µl] 4,1 4,1 1,9 1,9,9,9 Volumen je Reservoir [µl] Höhe [mm] 140 8,0 (low profile) 140 8,0 (low profile) Stück pro Beutel/Karton 20/80 20/80 CrystalQuick TM Plus Kat.Nr. 609 10 Plus 609 80 Plus 609 180 Plus Näpfchengeometrie Näpfchenboden hydrophob quadratisch (SW), hydrophob quadratisch (SW) hydrophob quadratisch (LP) Näpfchen je Reservoir 1 Max. Näpfchenvolumen [µl] Volumen je Reservoir [µl] Höhe [mm] 4,1 4,1,9 140 8,0 (low profile) Stück pro Beutel/Karton 20/80 1 Reaktions/ 8 5
1 Zell und 2 HTS Vapour Diffusion Anwendungen 24 Well ComboPlate TM, CrystalBridge TM und Deckgläser 662 050 662 150 24 Well ComboPlate, CrystalBridge TM und Deckgläser 662 145 ComboPlate TM Die ComboPlate TM wurde als eine universelle Plattform zur Kristallisation im 24 Well Format in Zusammenarbeit mit Hampton Research entwickelt (Abb. 8). Glasklares Polystyrol in Verbindung mit einem en, verzerrungsfreien Boden bietet ausgezeichnete optische Eigenschaften. Ein abgeter, erhabener Ring um jedes Well verringert die Gefahr von Kreuzkontaminationen und ermöglicht die Abdichtung der Wells mit Silikonfett und Deckgläsern (ø 18 mm) oder VIEWseal TM Klebefolie (Kat.Nr. 676 070). Eine leicht erhabene Abdeckplatte schützt Deckgläser und Klebefolie während Transport und Lagerung. Abdeckplatten und folien S. 12 I 2 ff. Universelle 24 Well Kristallisationsplatte Vorgefettete Platten erhältlich Silikonisierte Deckgläser erhältlich Die ComboPlate TM ist auch vorgefettet oder für die Verwendung in polarisiertem Licht in einer Version erhältlich. Als Zubehör für die ComboPlate TM bietet Greiner BioOne silikonisierte Deckgläser (rund, ø 18 mm) an (Abb. 9). Silikonisierte Deckgläser für LinbroPlatten (rund, ø 22 mm) finden Sie ebenfalls in unserem Sortiment. Abbildung 8: Näpfchengeometrie, 24 Well ComboPlate Abbildung 9: ComboPlate mit Deckgläsern verschlossen CrystalBridge Sitting Drop Experimente sind in Kombination mit CrystalBridge TM Einsätzen möglich, die genau in die Wells der ComboPlate TM passen. Das in die CrystalBridge TM integrierte Näpfchen mit konkavem Boden fasst ein Volumen von 45 µl. CrystalBridge TM Einsätze können bei Bedarf im Laufe eines Experiments in ein anderes Well umgesetzt werden. Kat.Nr. 662 150 ComboPlate 662 050 ComboPlate 662 145 CrystalBridge Format Näpfchenboden 24 Well vorgefettet 24 Well 1 Well konkav ø Näpfchen [mm] Max. Näpfchenvolumen [µl] Abdeckplatte Stück pro Beutel/Karton 16, 00 + 6/24 16, 00 + 6/24 4,6 45 250 Kat.Nr. 501 870 runde Deckgläser silikonisiertes Glas 50 870 runde Deckgläser silikonisiertes Glas 50 850 runde Deckgläser silikonisiertes Glas 1 Reaktions/ ø [mm] Stärke [mm] Stück pro Box/Karton 18 0,19 0,22 100/1000 22 0,19 0,22 100/1000 22 0,5 0,6 100/1000 8 6
Microbatch unter Öl Anwendungen 60 Well und 72 Well TerasakiPlatten Microbatch unter Öl Anwendungen 1 Zell und 2 HTS 65 102 60 Well / 72 Well TerasakiPlatten Oberflächenbehandelte TerasakiPlatten S. I 11 1 Reaktions/ 60 Well und 72 Well TerasakiPlatten Die Verwendung von TerasakiPlatten für die Microbatch Kristallisation ist weit verbreitet. Der Kristallisationstropfen ist durch die konische Wellgeometrie zentral lokalisiert und durch den en Wellboden optimal zu beobachten (Abb. 10). Der Rand der TerasakiPlatten ermöglicht es, alle Wells auf einmal mit Öl zu befüllen. Durch die geringen Außenmaße und das niedrige Profil der TerasakiPlatten ist der Platzbedarf zur Lagerung relativ gering. Die TerasakiPlatten werden mit einem passenden Deckel geliefert. Die Platten sind auch oberflächenbehandelt erhältlich ( S. I 11). Die Behandlung der Platten beeinflusst das Anheften des Kristallisationstropfens am Wellboden. Abbildung 10: Näpfchengeometrie, TerasakiPlatte Kat.Nr. 65 102 654 102 TerasakiPlatte TerasakiPlatte Format 60 Well 72 Well Näpfchengeometrie konisch konisch Näpfchenboden ø Näpfchenboden [mm] 1, 1, Arbeitsvolumen pro Well [µl] 10 10 Max. Volumen pro Well [µl] 11,5 11,5 Höhe [mm] x Breite [mm] x Länge [mm] 8, x 58 x 10 8, x 58 x 10 Oberflächenbehandlung Stück pro Beutel/Karton 10/580 10/270 8 7
1 Zell und 2 HTS Microbatch unter Öl Anwendungen Well und 156 Well IMP@CT Platten IMP@CT Platten Die IMP@CT Platten sind speziell für Microbatch unter Öl Anwendungen konzipierte für die Hochdurchsatz Kristallisation. Die IMP@CT Platten zeichnen sich durch konische Wells mit em Boden aus. Die konische Form der Wells bewirkt, dass die Kristallisationstropfen auch bei kleinen Probenvolumina zentriert lokalisiert sind. Durch den en Wellboden sind die Kristallisationsansätze optimal zu beobachten. Eine passende Abdeckplatte ist erhältlich. Well IMP@CT Platte (Abb. 11) Die Well IMP@CT Platte wurde in Zusammenarbeit mit Hampton Research (USA) und Allan D Arcy entwickelt. Durch den Doppelrand der Platte können die Wells separat oder zusammen mit Öl befüllt werden. Durch das Einfüllen eines wässrigen Gels in den Doppelrand der IMP@CT Platte ist die Kontrolle der Wasserevaporation aus den Kristallisationstropfen möglich. a) b) Diese Platte zeichnet sich aus durch extrem niedriges Streulicht zwischen den einzelnen Wells und durch eine geringe Doppelbrechung. 156 Well IMP@CT Platte (Abb. 12) Die 156 Well IMP@CT Platte wurde in Zusammenarbeit mit dem HauptmanWoodward Medical Research Institute in Buffalo (USA) für den Einsatz in automatisierten HochdurchsatzSystemen entwickelt. Die optimierte Wellgeometrie ermöglicht, dass auch Kristallisationstropfen mit sehr kleinem a) b) Abbildung 12a: Näpfchengeometrie, 156 Well IMP@CT Platte Abbildung 12b: Kristallisation von Lysozym in der 156 Well IMP@CT Platte, mit freundlicher Genehmigung des HauptmanWoodward Medical Reseach Institute, Buffalo (USA) Volumen im Zentrum der Wells lokalisiert sind. Glatte, e Wellböden schaffen optimale Voraussetzungen zum Beobachten und Bewerten der Kristallisationsansätze. Die 156 Well IMP@CT Platte ist als Version erhältlich und somit für die Verwendung von polarisiertem Licht geeignet. Abbildung 11a: Näpfchengeometrie, Well IMP@CT Platte Abbildung 11b: Proteinkristalle in der Well IMP@CT Platte 67 170 790 801 Well / 156 Well IMP@CT Platte Abdeckplatten und folien S. 12 I 2 ff. Platten für Kristallisation unter Öl Kat.Nr. 67 170 790 801 Format IMP@CT transparent Well IMP@CT transparent, 156 Well Max. Näpfchenvolumen [µl] 8,0 10,1 1 Reaktions/ ø Näpfchenboden [mm] Höhe [mm] Stück pro Beutel/Karton 1, 0,9 10,4 15/60 8 8
CrystalSlide TM CrystalSlide TM Microstrukturierte Kunststoffplattform für Counter Diffusion Anwendungen 1 Zell und 2 HTS Greiner BioOne hat eine neue Plattform im Objektträgerformat für Counter Diffusion Anwendungen entwickelt. Die Entwicklung von CrystalSlide erfolgte in Zusammenarbeit mit dem Labor von Peter Kuhn, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA. CrystalSlide besitzt 12 mikrostrukturierte Kanäle (0,1 mm x 0,1 mm x 20 mm). Die Geometrie der Einfüllreservoire ist für das Befüllen der Kanäle mit Greiner a) BioOne KristallPipettenspitzen ( S. 6 l 5) optimiert. Zur Verwendung von CrystalSlide in automatisierten Systemen können jeweils vier CrystalSlide in einen Rahmen mit Standardformat eingesetzt werden. Design und erlauben die direkte Analyse von Proteinkristallen in einer Röntgenstrahlquelle sowie Anwendungen mit polarisiertem Licht und UVLicht (Abb. 1). b) c) Abbildung 1: Proteinkristalle in einem CrystalSlide Kanal. Aufnahmen mit Weißlicht (a), polarisiertem Licht (b) und UVinduzierter Autofluoreszenz (c). Mit freundlicher Genehmigung von Peter Kuhn, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA. Abbildung 14: Schematische Zeichnung von CrystalSlide 444 820 CrystalSlide TM KristallPipettenspitzen S. 6 l 5 CrystalSlide TM Bedienungsanleitung (BestellNr. F07 05) Mikrostrukturierte Kunststoffplattform für Counter Diffusion Anwendungen Rahmen auf Anfrage erhältlich Kat.Nr. Abmessungen Objektträger (L x B) [mm] Abmessungen Kanal (L x B x H) [mm] Anzahl Kanäle pro Objektträger Volumen pro Kanal [µl] Stück pro Box/Karton 444 820 CrystalSlide TM, durchlässig für UVLicht und Röntgenstrahlen 75 x 25 20 x 0,1 x 0,1 12 200 4/20 1 Reaktions/ 8 9