Applications Note 198 Juni 2011

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1 Applications Note 198 Juni 2011 Technical Report Die Eppendorf Research plus Pipette volle Autoklavierbarkeit, leichte Justierbarkeit, schnelle und einfache Wartung Kornelia Ewald, Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland Zusammenfassung Die Research plus Pipetten sind leicht zu reinigen und instand zu halten. Die regelmäßige Wartung kann somit durch den Anwender selbst problemlos und zeitsparend erfolgen. Auch eine Umjustierung der Pipette für Flüssigkeiten, deren physikalische Eigenschaften stark von Wasser abweichen, ist einfach und sicher durchzuführen. In dieser Application Note zeigen wir Besonderheiten zur Wartung und Reinigung und geben detaillierte Hinweise zum Umjustieren der Research plus Pipetten. Einleitung Um die hohen Anforderungen im modernen Laborbetrieb zu erfüllen, sollten qualitativ hochwertige Kolbenhubpipetten der neuen Generation sich teilweise oder vollständig autoklavieren lassen und UV-beständig sein. Die neuen Eppendorf Research plus Pipetten können sowohl mittels UV-Licht als auch durch vollständiges Autoklavieren dekontaminiert werden. Dadurch ist eine Reinigung nach der Benutzung von infektiösem oder kontaminiertem Probenmaterial leicht möglich. Außerdem ist es wichtig, dass sich die Pipetten umjustieren lassen, um entweder Flüssigkeiten mit einer anderen Dichte als Wasser zu dosieren oder wenn bei der Kalibration nachweislich festgestellt wird, dass sich die Werkseinstellung der Pipette durch bestimmte Einflüsse verändert hat. Durch die Möglichkeit der Umjustierung können mit den Research plus Pipetten problemlos auch Stoffe unterschiedlicher Dichte korrekt dosiert werden.

2 Application Note 198 Seite 2 Umjustierung auf spezifische Flüssigkeiten oder geografische Höhen Kolbenhubpipetten werden bei ihrer Herstellung unter zertifizierten Messbedingungen auf destilliertes Wasser justiert. Zur Kennzeichnung der Justierung tragen die Research plus Pipetten ein Justiersiegel (Abb. 1). Ist eine Umjustierung auf eine spezifische Flüssigkeits- dichte oder auf eine geografische Höhe erforderlich kann diese einfach durchgeführt werden. Das rote Justiersiegel, das zur Kennzeichnung nach dem Justieren auf die Justiersöffnung geklebt wird, dient dazu, eine Umjustierung sichtbar zu machen (Abb. 1) Abbildung 1: Original Justiersiegel Umjustierung Justiersiegel nach Umjustierung Neu ist bei den Research plus Pipetten, dass eine Umjustierung zusätzlich durch das Justierfenster angezeigt wird (Abb. 2). Hier kann die genaue Verstellung auf einen Blick erkannt werden (Abb. 3), auch wenn das Original- Siegel entfernt wurde und die Justieröffnung u.u. offen ist. Mit Hilfe des Justierfensters ist bei Bedarf auch das Zurückstellen einer Umjustierung einfach möglich. In jedem Fall muss eine Umjustierung gravimetrisch überprüft werden. Abbildung 2: Werkseinstellung Abbildung 3: Umjustierung der Pipette Vorgehensweise bei Umjustierung: Bei einer Änderung der Justierung wird das Volumen um einen bestimmten Wert geändert. Die Änderung gilt streng genommen nur für das Prüfvolumen. Beispiel: Sie justieren eine µl Pipette bei der Volumeneinstellung 100 µl um 1 µl nach (1 µl = 1 %). Die Pipette ist auch bei einer Volumeneinstellung von 10 µl um 1 µl verstellt (= 10 %). 1. Das graue Justiersiegel entfernen. 2. Den Abwerfer gedrückt halten. 3. Das Justierwerkzeug (aus dem Lieferumfang) einstecken. 4. Das Justierwerkzeug drehen, bis das Zählwerk den gewünschten Wert anzeigt. 5. Wägungen durchführen, um die Richtigkeit und Präzision zu überprüfen. 6. Nach den Überprüfungen das rote Justiersiegel (aus dem Lieferumfang) aufkleben. Gilt die Justierung für eine bestimmte Flüssigkeit, kennzeichnen Sie die Pipette entsprechend. Verwenden Sie dazu das Beschriftungsfeld auf der Pipette und vermerken Sie die Flüssigkeit und das Volumen. Überprüfen Sie jede Änderung der Justierung gravimetrisch. Beachten Sie die Prüfvorschriften der EN ISO und Eine SOP (Standard Operation Procedure) finden Sie auf unserer Website

3 Application Note 198 Seite 3 Einstellwerte Research plus Erläuterung: Folgende Einstellwerte haben nur orientierenden Charakter, da die systematische und zufällige Messabweichung von der Handhabung, verwendeten Spitze und weiteren Punkten (z.b. Temperatur) beeinflusst werden. Die Daten wurden für die Wandabgabe ermittelt. Die Spitzen wurden nicht vorbenetzt. Für den PCR master mix (5 PRIME HotMasterMix) wurden ept.i.p.s. LoRetention verwendet. Für jede Dosierung wurde immer eine neue Spitze verwendet. Es wurde relativ zügig und somit praxisnah gearbeitet. Eine Überprüfung der Daten mit der eigenen Arbeitsweise ist zwingend erforderlich. Zur Änderung der Werkseinstellung lesen Sie bitte die Bedienungsanleitung der Eppendorf Research plus ( Tab.1: Werte für Anwenderjustierung 2-20 µl grau 2-20 µl gelb µl gelb µl gelb µl orange µl blau 0,5-5 ml lila 1-10 ml türkis bis -3,5 bis -3,5 bis -3,5 bis -3,5 bis -3,5-2,5 bis -1,5-2,5 bis -1,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5 1,5 bis 2,5 4,5 bis 5,5 7,5 bis 8,0-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5 0,5 bis 1,5 1,5 bis 2,5 1,5 bis 2,5 1,5 bis 2,5 4,5 bis 5,5 7,5 bis 8,0-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5-0,5 bis 0,5 0,5 bis 1,5 0,5 bis 1,5 0,5 bis 1,5 0,5 bis 1,5 0,5 bis 1,5 0,5 bis 1,5 0,5 bis 1,5 1,5 bis 2,5 2,5 bis 3,5 4,5 bis 5,5-0,5 bis 0,5 1,5 bis 2,5 2,5 bis 3,5 0 bis 1,0 3,5 bis 4,5 5,5 bis 6,5 Caesiumchlorid 45 % PCR master mix Ethanol 99,8 % 6,0 bis 7,0 6,0 bis 7,0 2,5 bis 3,5 2,0 bis 3,0 2,0 bis 3,0 1,5 bis 2,5 1,0 bis 2,0 4,5 bis 5,5 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 nicht getestet nicht getestet 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 7,5 bis 8,0 Pipettengröße: 2-20 µl Nennvolumen: 20 µl

4 Application Note 198 Seite 4 Pipettengröße: 2-20 µl Nennvolumen: 20 µl Pipettengröße: µl Nennvolumen: 100 µl

5 Application Note 198 Seite 5 Pipettengröße: µl Nennvolumen: 200 µl Pipettengröße: µl Nennvolumen: 300 µl

6 Application Note 198 Seite 6 Pipettengröße: µl Nennvolumen: µl Pipettengröße: 0,5-5 ml Nennvolumen: 5 ml

7 Application Note 198 Seite 7 Pipettengröße: 1-10 ml Nennvolumen: 10 ml Glycerol 50 % Cesium chloride 45 %

8 Application Note 198 Seite 8 Autoklavierung und UV-Sterilisation Die heutzutage verwendeten Kolbenhubpipetten lassen sich häufig komplett autoklavieren. Mindestens sollten aber die bei unsachgemäßem Gebrauch kontaminierten Teile autoklaviert werden können. Dadurch können Restunsicherheiten des Anwenders in Bezug auf die Sterilität beseitigt werden, und es eröffnen sich neue Anwendungsfelder für diese Technik. Das Autoklavieren der Luftpolsterpipetten sowie der Pipettenspitzen (Ausnahme Filterspitzen) erfolgt in der Regel bei 121 C bei einem Überdruck von 1 bar (100 kpa) für die Dauer von 20 min. Die neue Pipette Research plus kann komplett autoklaviert werden. Nach dem Autoklavieren muss die Pipette nachtrocknen und abkühlen. Wenn die Pipette in Teilen autoklaviert wurde, dürfen diese erst nach vollständigem Abkühlen zusammengeschraubt werden, da sonst Kunststoffteile überdehnt und beschädigt werden können. Das Nachfetten des Pipettenkolbens nach dem Autoklavieren ist bei Eppendorf-Pipetten nicht erforderlich. Durch das Autoklavieren entstehen keine Verfärbungen bei der Research plus Pipette. Die UV-Beständigkeit der in einer Pipette verarbeiteten Kunststoffe ist von zentraler Bedeutung für viele Anwendungsbereiche. UV-resistente Pipetten wie die Research plus Pipette können gefahrlos in Impfräumen oder Impfbänken verbleiben, weil das UV-Licht zur Desinfektion der Arbeitsplätze sich nicht nachteilig auf das Pipettenmaterial und somit auf die Funktion der Pipette auswirkt. Beim Dekontaminieren mittels UV-Licht sollten folgende Parameter berücksichtigt werden: Es ist eine 30-Watt- Niederdruck-Quecksilberdampflampe zu verwenden, deren charakteristische Wellenlänge 254 nm beträgt. Der optimale Abstand zwischen Lampe und Pipette beträgt ca. 60 cm. Folgende Maßnahmen zur Reinigung oder Dekontamination der Research plus Pipette sollten nicht miteinander kombiniert werden: Desinfektionsmittel, DNA-/RNA-Dekontaminationsmittel oder Natriumhypochlorit mit zusätzlich Dampfautoklavieren oder UV-Bestrahlung. Besonderheiten zur Wartung und Reinigung Die Research plus Pipetten sind einfach zu reinigen. Nur das Unterteil sollte regelmäßig, entsprechend der Häufigkeit der Anwendung, gereinigt werden (Abb. 4). Dazu wird bei gedrücktem Abwerfer die Abwurfhülse (4.1) abgezogen. Den Ring am Unterteil mit der Beschriftung PUSH TO RELEASE (4.2) ca. 5 mm nach oben schieben (4.3) bis sich das Unterteil löst. Anschließend das Unterteil aus dem Oberteil (4.4) entnehmen. Abbildung 4: Lösen des Unterteils

9 Application Note 198 Seite 9 Besonderheiten zur Wartung und Reinigung Bei den Mehrkanalpipetten wird das Unterteil wie folgt geöffnet [Abb. 5]: Den Hebel (5.1) am Unterteil nach links oder rechts schieben (5.2). Das Unterteil wird dabei gelöst und kann Durch die Benutzung der Mehrkanalpipetten auch mit weniger als 8 bzw. 12 Kanälen entstehen neue Anwendungsabgenommen werden. Das Unterteil mit dem Hebel nach unten ablegen und mittels einer Münze die beiden Riegel (5.3) nach unten schieben. Zum Einbau das Unterteil in das Oberteil stecken, bis es hörbar einrastet. Abbildung 5: Öffnen des Mehrkanal-Unterteils Die einzelnen Kolben der Mehrkanalpipetten können zum Reinigen aus ihren Halterungen herausgelöst werden [Abb. 6]. Dazu eine Pipettenspitze unter dem Kolben ansetzen (6.1) und den Kolben vorsichtig aus der oberen Schiene lösen (6.2). Anschließend den Kolben nach oben herausziehen. Den Spitzenkonus am unteren Ende anfassen und etwas nach oben drücken (6.3) und aus der unteren Schiene (6.4) herauslösen. Danach den Spitzenkonus mit dem Zylinder und der Feder aus der Halterung entnehmen (6.5). Der Einbau erfolgt in umgekehrter Reihenfolge. Abbildung 6: Kanäle aus- und einbauen möglichkeiten. Diese werden in der Application Note Nr. 197 dargestellt ( Ausblick Heutzutage spielen nicht nur die Funktion und die Bedienkräfte einer Pipette eine wesentliche Rolle, sondern ganz entscheidend sind auch Faktoren wie einfache Reinigung und Wartung sowie das Dekontaminieren mittels Autoklavieren und UV-Licht. Das einfache und sichere Umjustieren einer Kolbenhubpipette ist ein weitere Anforderung in der täglichen Laborroutine. Die Research plus Pipetten erfüllen die genannten Kriterien in jeder Hinsicht und sind somit für den Laboralltag das geeignete Instrument zum Pipettieren.

10 Application Note 198 Seite 10 Bestellinformationen Eppendorf Research plus Bezeichnung Bestell-Nr. Einkanal, variables Volumen 0,1 2,5 µl; dunkelgrau ,5 10 µl; mittelgrau µl; hellgrau µl; gelb µl; gelb µl; gelb µl; orange µl; blau ,5 5 ml; lila ml; türkis Einkanal, Fixvolumen 10 µl; mittelgrau µl; gelb µl; hellgrau µl; gelb µl; gelb µl; gelb µl; gelb µl; gelb µl; blau µl; blau µl; blau µl; blau Mehrkanal, 8-Kanal 0,5 10 µl; mittelgrau µl; gelb µl; orange Mehrkanal, 12-Kanal 0,5 10 µl; mittelgrau µl; gelb µl; orange Your local distributor: Eppendorf Vertrieb Deutschland GmbH Deutschland Tel: Fax: vertrieb@eppendorf.de Eppendorf Austria GmbH Österreich Tel: Fax: office@eppendorf.at Vaudaux-Eppendorf AG Schweiz Tel: Fax: vaudaux@vaudaux.ch Application Support Tel: (Preis je nach Tarif im Ausland; 9 ct/min aus dem dt. Festnetz; Mobilfunkhöchstpreis 42 ct/min) support@eppendorf.com MasterMix ist eine eingetragene Marke der Qiagen North America Holding, Inc., USA. eppendorf, Eppendorf Research und ept.i.p.s. sind eingetragene Marken und Eppendorf Research plus und ept.i.p.s. LoRetention sind Marken der Eppendorf AG. Alle Rechte vorbehalten, einschließlich der Graphiken und Abbildungen. Copyright (c) 2011 by Eppendorf AG. Order no: AA19 8WW 010/DE4/WEB/0611/KW